8/16/2019 JSDLA

1/4

ESTIMAREA DENSITĂŢII POPULAŢIILOR MICROBIENE

 Numărarea microorganismelor se executa in mod frecvent in laboratorul de

microbiologic, in vederea aprecierii stadiului de multiplicare a celulelor din diferite

culturi folosite in industrie sau pentru determinarea gradului de contaminare a unor 

 produse, in special alimentare. Pentru a asigura o numărare rapida si in acelaşi timp

 precisa, ţinând cont ca incarcatura microbiana a diferitelor produse si culturi poate sa

fie foarte ridicata, se recomanda in prima etapa sa se efectueze diluări ale produsului

supus analizei microbiologice.

1. TEHNICA OBŢINERII DILUŢIILOR DECIMALE

După recoltare, la omogenizarea probelor destinate analizei microbiologice, se

recomanda ca raportul intre produs si diluant sa fie de 11!, obţinându"se astfel prima

diluţie #diluţie 1!"1$. Pentru efectuarea următoarelor diluţii decimale, cu o pipeta

sterila, se barboteaza lic%idul pentru omogenizare, se recoltează 1 m& din diluţia ' si

se scurge lic%idul in alta eprubeta cu ( m& ser fiziologic steril, obţinându"se diluţia a

''"a #diluţie 1!") $ si se continua procedeul pana la obţinerea diluţiei necesare. *radul

de diluare este condiţionat de numărul presupus de microorganisme din proba de

analizat+ cu cat numărul este mai mare, cu atât se fac mai multe diluţii. Pentru

maoritatea produselor sunt suficiente - " diluţii succesive.

/ând se face numărarea celulelor dintr"o anumita diluţie considerate

corespunzătoare, numărul obţinut se multiplica cu coeficientul de diluţie 00, pentru a

obţine numărul de celule existent in produsul iniţial #pentru d"', 2 1!, pentru d"'',

2 1!! etc$.

Pentru evitarea erorilor se recomanda omogenizarea conţinutului eprubetelor in

care s"a făcut diluarea fie prin rotirea eprubetei intre palme, fie, cu autorul pipetei

sterile, prin barbotare, 3nainte de recoltarea volumului de 1 m& destinat următoarei

8/16/2019 JSDLA

2/4

diluţii. 4e iau toate masurile de precauţie pentru a evita contaminarea cu

microorganisme din mediul ambiant, lucrând in zona de protecţie din urul flecarii

 becului de gaz si respectând regulile de manipulare

Figura 1. 5e%nica obţinerii diluţiilor decimale

După efectuarea diluţiilor decimale, numărarea microorganismelor se poate realiza

 prin metode directe, cu autorul camerelor de numărare sau prin metode indirecte.

2. ESTIMAREA DENSITĂŢII POPULAŢIILOR MICROBIENE CU

AJUTORUL CAMEREI THOMA/NEWBAUER 

6stimarea densităţii populaţiilor microbiene cu autorul camerei 5%oma este o

metoda directa de numărare a celulelor, rapida si uşor de efectuat, cu utilizări in

stabilirea dinamicii de acumulare a celulelor microbiene intr"un mediu de cultura, in

scopul urmăririi formarii de biomasa, de obţinere a unui inocul sau in diferitele

 procese fermentative. 7etoda prezintă dezavantaul ca nu deosebeşte celulele vii de

cele moarte, este greu de aplicat pentru bacterii de dimensiuni mici, necesita

suspensii celulare destul de dese si nu este foarte exacta.

Pri!i"iu# $%&'(%i) /amerele de numărat reprezintă lame de sticla prevăzute cu

trei platforme, din care platforma centrala este denivelata fata de celelalte doua cu

!,1! mm. /amera 5%oma prezintă o reţea cu suprafaţa de 1 mm , divizata in -!!

microcelule elementare, numărătoarea facandu"se in grupuri de 18 microcelule.

8/16/2019 JSDLA

3/4

Figura 2. 9eprezentarea sc%ematica a !a$%r%i T*'$a+ #a&%ra#

Figura ,. /amera 5%oma " reţeaua de numărare

Ma&%ria#% u&i#i-a&%)

" suspensii de celule de drodie si spori de mucegai in apa+

" lamele+

" camera 5%oma: Ne;bauer+

" pipete sterile.

" microscop.

M'( (% #u!ru)

4e executa. un preparat umed, plasând suspensia de celule pe suprafaţa reţelei.

4e aseaza lamela, care, spriinindu"se pe cele doua platforme laterale, va delimita

inaltimea stratului de lic%id, egala cu adâncimea camerei #!,1 mm$. Preparatul astfel

obţinut se fixează cu cleme de platina microscopului si se caută imaginea reţelei. 'n

8/16/2019 JSDLA

4/4

câmpul microscopic, prin deplasarea platinei se pot aduce grupe de cate 18

microcelule elementare si se face numărarea celulelor de drodii. 4e exclud de la

numărare celulele care se afla cu mai mult de umătate din suprafaţa celulei in

exteriorul careului de - x -. 4e fac numărări din mai multe câmpuri microscopice

#minimum