Isolasi Bahan Alam Laut
-
Upload
erna-iriani -
Category
Documents
-
view
319 -
download
6
Transcript of Isolasi Bahan Alam Laut
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 1/38
ISOLASI BAHAN ALAM LAUT
Organisme laut memberikan sejumlah senyawa kimia beragam yang telah evolusioner
Terpilih untuk memodulasi jalur biokimia. Banyak kelompok-kelompok industri dan akademis
mengakses sumber ini menggunakan platform teknologi canggih. Tujuan dari bab ini adalah
untuk memberikan beberapa petunjuk praktis dalam proses ekstraksi dan isolasi bahan alam
laut. perhatian khusus diberikan kepada prosedur isolasi yang disesuaikan dengan karakteristik
fisik dan kimia dari senyawa-senyawa yang terisolasi. Kemajuan terbaru dalam teknologi
isolasi, termasuk otomatisasi dan integrasi langsung menjelaskan pemikiran yang tinggi tentang
system skrining.
Kata kunci : Produk alami laut; Koleksi inverterata laut; ekstraksi; !raksinasi;
"emurnian; isolasi; Kromato#ra!i; !raksinasi otomatis; HPL$%SP& cou"lin#'
I' Penda(uluan
Organisme laut telah berevolusi mendiami suatu daerah baru berbagai relung
ekologi. ntuk mengatasi berbagai habitat, mereka telah mengembangkan beragam jalur
metabolik sekunder yang menghasilkan sejumlah besar gugus kimia untuk
mengakomodasi gaya hidup mereka. !enyawa ini mencakup berbagai macam kelas
kimia, termasuk terpen, shikimat, polyketida, acetoginins, peptida, alkaloid, dan banyak
struktur tidak teridentifikasi dan tidak terkarakterisasi. "alam sepuluh tahun terakhir
saja, struktur lebih dari #$$$ produk alami laut telah diterbitkan . Banyak dari senyawa
ini telah membuktikan potensi mereka dalam beberapa bidang, terutama sebagai agen
terapeutik yang potensial untuk berbagai penyakit. !epuluh tahun yang lalu, pemurnian
hampir semua produk alami adalah suatu usaha yang sangat besar. !ebagai akibat dari
kemajuan teknologi, proses ini telah hampir menjadi rutin. !elain itu, kecenderungan
pemisahan yang lebih cepat dan otomatis telah menghasilkan minat secara meluas,
terutama dalam bidang industri farmasi.
Beberapa ulasan %&& ' &() telah membahas teknik-teknik yang terlibat dalam
isolasi bahan alam laut. Bab ini disusun untuk menyoroti rintangan ditemui dalam
proses isolasi, dan teknologi yang paling terbaru serta strategi diaplikasikan baik pada
timbangan laboratorium dan industrial. *amun, rincian lebih lanjut tentang dasar
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 2/38
kromatografi teori dan aplikasi yang dapat ditemukan di Bab (-+. Bagian terakhir dalam
bab ini ditujukan untuk diskusi tentang fraksinasi otomatis dan integrasi langsung ke
dalam sistem penyaringan %T!) tinggi-throughput. atatan dengan informasi yang lebih
spesifik pada topik-topik tertentu juga disediakan mana dipandang perlu untuk bantuan
lebih lanjut kepada pembaca tertarik.
.&. /intangan dalam isolasi dari produk alami laut
Beberapa faktor-faktor yang dapat menyulitkan isolasi bahan alam laut telah
didiskusikan secara rinci dalam review di isolasi bahan alam laut oleh 0my 1right
%&(). Kami menekankan kembali beberapa faktor selain orang lain yang mungkin
menambah tantangan tambahan untuk proses pemisahan.
.&.&. Taksonomi ketidakpastian taksonomi informasi dapat memfasilitasi pencarian
2iterature
"ilaporkan dihasilkan oleh spesies di bawah penyelidikan dan tentu saja
metode pemurnian senyawa. ni memiliki beberapa dampak pada pemilihan
skema pemurnian terbaik bagi metabolit baru. identifikasi Taksonomi Kelautan
organisme menantang, dan tugas-tugas taksonomi yang benar atau tidak lengkap
dapat menyebabkan kesulitan jika asumsi yang dibuat hampir kimia yang
mungkin mengandung suatu organisme. 3enggunaan kemotaksonomi untuk
memprediksi jenis senyawa yang organisme mungkin berisi tidak selalu sukses.
.&.4. Kuantitas kecil 5etabolit
Kehadiran metabolit sangat ampuh dalam jumlah jejak dapat mempersulit
proses ekstraksi dan isolasi. !ejumlah besar dari 6#( menurut oussen dan
7aspars, organisme diperlukan untuk isolasi metabolit aktif pada tingkat yang
dapat memudahkan penjelasan struktur berikutnya %lihat Bab. &8).
!alah satu contoh adalah isolasi hanya &$,8 mg yang sangat ampuh
antitumor macrolide spongistatin ( %9br. &) dari sekitar 4,# ton dari 0frika !elatan
spons laut !pirastrella spinispirulifera. ji untuk mengurangi biomassa spons.
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 3/38
3ada satu titik dalam usaha ini, perlu untuk menggunakan kolom chomatography
cair kinerja tinggi %32) yang panjangnya hampir 6 m dan berdiameter &# cm.
ontoh lain adalah isolasi hampir & mg peptida dolastatin &$ sangat penting
sebagai antitumor %:ig. 4). ampir 4 ton kelinci laut Dolabella auricularia
dikumpulkan dari 3ulau 5auritius di !amudra india. 2angkah koleksi yang
diperlukan lebih dari &$ tahun. ara termudah untuk isolasi terlibat sekitar 4$.$$$
pecahan dan 46 beberapa terpisah kromatografi langkah menggunakan berbagai
teknik. !elanjutnya, itu menjadi jelas bahwa peptida dolastatin &$ mungkin
diproduksi oleh cyanobacterium yang tumbuh di Dolabella auricularia.
.&.6. Ketidakstabilan metabolit
;kstrak laut mungkin mengandung senyawa yang sangat labil.
"ekomposisi dari senyawa ini dapat terjadi pada setiap langkah selama proses
pemurnian. 3anas, cahaya, udara, dan p adalah faktor-faktor lain yang dapat
menyebabkan degradasi senyawa. Bahan yang digunakan untuk pemisahan juga
dapat mengaktifkan beberapa reaksi. alumina dapat mengkatalisasi Kondensasi
aldol, penataan ulang, reaksi hidrasi dan dehidrasi, sementara silika dapat
meningkatkan oksidasi, penataan ulang dan * dan O demethylation. Beberapa
lainnya seperti aseton, metanol %5eO), etilena glikol, dan dimethylformamide
%"5:) dapat menimbulkan hasil adisi. !ifat asam beberapa pelarut *5/
%misalnya, "l6) dapat menyebabkan degradasi sangat sensitif terhadap p
senyawa.
.&.(. 3emurnian senyawa yang larut air < pengaruh air tinggi dan garam konten
0da banyak kesulitan yang terkait dengan isolasi dan pemurnian senyawa-
senyawa yang larut dalam air . Karena senyawa target sangat polar, media air atau
pelarut polar sangat seperti 5eO harus digunakan untuk ekstraksi. "alam kasus
larutan, masalah yang pasti terjadi adalah pertumbuhan bakteri dan jamur, yang
sering mendegradasi komponen aktif atau memberikan hasil palsu dalam uji
hayati karena endoto=ins yang dihasilkan oleh mikroorganisme. Konsentrasi
larutan ekstrak juga menciptakan masalah karena suhu tinggi pada saat
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 4/38
penguapan air. !elain itu, ekstrak cair sering mengandung agen surface-active.
surfaktan ini dapat menyebabkan berbusa dan membentur selama proses
konsentrasi. Kelimpahan garam yang dibawa dari air laut ke ekstrak cair membuat
proses isolasi lebih sulit. "alam kebanyakan kasus, ekstraksi dan fraksinasi
senyawa-senyawa yang larut dalam air memerlukan penggunaan penyangga.
!truktur dolastatin &$. 5enurut oussen dan 7asparssolutions. *amun,
pemisahan penyangga garam dari senyawa bukanlah tugas yang mudah.
.&.#. !enyawa yang kekurangan > Kromofor
ltraviolet %>) deteksi adalah teknik deteksi untuk analisis 32
produk alami karena kemudahan penggunaan dan sensitivitas tinggi. *amun,
satu kekurangan > "etektor adalah ketidakmampuan untuk mendeteksi senyawa
yang kurang > chromophores. !elain itu, beberapa pelarut yang digunakan
dalam kromatografi fase normal itu sendiri kuat dari cahaya >, yang berarti
bahwa pengaturan panjang gelombang detektor tidak mungkin rendah %2ihat tabel
# untuk nilai-nilai cutoff > pelarut yang berbeda).
ndeks bias %/) detektor adalah, sampai baru-baru ini, hanya tersedia
alternatif untuk deteksi >. *amun, / detektor jauh lebih sensitif dan terbatas
elusi isokratik. ;lusi gradient melibatkan pencampuran pelarut / yang berbeda,
sehingga menimbulkan garis besar yang melintas. Kelemahan ini membuat
deteksi sangat sulit pada konsentrasi rendah dari metabolit nonchromophoric.
.&.?. Biaya dan waktu efektivitas
!ampai saat ini, pemurnian produk alami laut adalah memakan waktu, dan
mahal. 3erkembangan terakhir di T! telah menciptakan hambatan baru untuk
penemuan obat dari alam. !ebuah supply dengan sejumlah besar strukturalmenarik sampel konsentrasi cukup adalah suatu keharusan untuk mengoperasikan
sistem T! secara optimal. ntegrasi 3erpustakaan produk alami laut ke sistem
T! adalah, tidak begitu lama dan sama sekali tidak layak.
II' Kromato#ra!i
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 5/38
Bagian ini memberikan gambaran singkat tentang teknik kromatografi berbeda
yang umumnya diterapkan dalam isolasi bahan alam laut. gambaran singkat tentang
sifat-sifat yang paling umum digunakan pelarut dan fase stationer juga disertakan.
3emisahan tergantung pada afinitas komponen terhadap fase diam dan fase gerak.
5enurut sifat fase gerak, kromatografi dapat diklasifikasikan menjadi
kromatografi gas %9), kromatografi cair %2) dan superkritis cairan kromatografi
%!:). 9 dan !: adalah teknik analisis yang digunakan secara luas tetapi tidak dapat
digunakan untuk persediaan isolasi bahan alam, dan tidak dibahas dalam bab ini. 2,
namun, secara luas digunakan dan datang dalam berbagai bentuk.
a. Klasifikasi 2
2 dapat diklasifikasikan dalam beberapa cara %4&)<
&. Klasifikasi menurut modus operasi.
Kromatografi dapat dilakukan dalam empat bentuk utama< countercurrent
kromatografi %), kromatografi lapis tipis %T2), ekstraksi solid-fase %!3;)
dan Kromatografi kolom %2ihat 4.6 subpos., untuk rincian).
4. Berdasarkan metode pemisahan %:ig. 6) ada lima mekanisme dengan pemisahan
yang dapat terjadi dan lebih dari satu mungkin bertanggung jawab selama
pemisahan tertentu. 5ode ini pemisahan yang dibahas di sini.
.&.&. 0dsorpsi
Kromatografi adsorpsi berdasarkan kemampuan molekul @at terlarut
secara fisik berinteraksi dengan fase diam %lihat juga Bab. #) .suatu sifat interaksi
dapatdilihat dari ikatan hidrogen, van der 1aals, atau dipol-dipol. !emakin kuat
interaksi, semakin lama @at terlarut akan dipertahankan pada fase diam.
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 6/38
3ilihan yang tidak tepat fase diam dapat menyebabkan adsorpsi ireversibel
@at terlarut ke kemasan material, atau setidaknya pemulihan yang sangat buruk.
!elain itu, molekul fase gerak bersaing dengan molekul @at terlarut untuk situs
adsorpsi. semakin sangat fase gerak berinteraksi dengan adsorben, semakin cepat
@at terlarut akan dielusi. Karena @at terlarut harus berinteraksi dengan stasioner
fase yang akan terserap, semakin besar luas permukaan yang ditawarkan oleh
stasioner fase, semakin besar jumlah kemungkinan interaksi. "engan demikian,
adsorben yang menawarkan rasio tinggi luas permukaan untuk kemasan >olume
menimbulkan pemisahan yang lebih baik. 2uas permukaan adalah fungsi dari
ukuran partikel, pori ukuran, dan tingkat porositas. !emakin kecil ukuran partikel
adsorben, semakin tinggi luas permukaan yang akan tersedia. 3artikel yang sangat
kecil ukuran umumnya hanya disediakan untuk 32, karena mereka
menimbulkan substansial tekanan balik ketika dilewatkan melalui fase gerak.
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 7/38
3orositas partikel mencerminkan rasio volume pori-pori permukaan untuk
total volume partikel. !enyawa lebih besar dari ukuran pori tidak akan mengikat
efisien karena mereka tidak akan dapat menembus pori-pori. ntungnya, ukuran
pori dapat sangat bervariasi dari kira-kira #$nm untuk makroskopis kuran.
Tabel & berisi informasi terperinci mengenai yang paling umum digunakan
adsorben.
.&.4. 3artisi
Kromatografi partisi didasarkan pada kemampuan @at terlarut untuk
mendistribusikan antara dua fase cair. 3aling umum, fase diam cair secara kimia
terikat pada pendukung inert, misalnya, berpori gel silika untuk memberikan AA
fase berikat. AA ni melibatkan pembentukan hydrolytically stabil obligasi, antara
kelompok silanol permukaan dukungan silika dan chlorosilane a. !ilan biasanya
membawa sebuah gugus fungsional organik dan ini berada di 0kibatnya, fase
diam cair %4&).
Besar ligan organo-silan tidak bisa bereaksi dengan semua kelompok
silanol tersedia karena halangan sterik. Kelompok silanol yang tidak bereaksi
dapat mengganggu proses pemisahan dan menghasilkan efek yang tidak
diinginkan seperti reaksi, adsorpsi, tailing, dan sebagainya. ntuk meminimalkan
interaksi sekunder, fase terikat biasanya mengalami reaksi AA endcapping AA di mana
silanols sisa yang termetilasi, biasanya dengan trimetilsilil %T5!) kelompok.
Oleh karena itu, ukuran pori dari gel silika dan jumlah fasa cair atau fungsional
kelompok terikat pada silika dan tingkat endcapping antara faktor yang harus
dipertimbangkan dalam pemilihan tahap berikat yang tepat. Beberapa dari sifat-
sifat umum digunakan fase terikat dirangkum dalam
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 8/38
Tabel &
:ase stasioner mumnya "igunakan di 0dsorpsi Kromatografi
0dsorban atatan
!ilica :ase normal %fase diam lebih polar daripada
fase gerak).
!enyawa polar dipertahankan sementara yang
nonpolar
tidak.
3elarut polar memiliki kekuatan elusi yang
lebih baik.
Tidak bisa digunakan dengan pelarut air
dengan air
menonaktifkan permukaan.
2arut pada nilai p lebih tinggi dari 8,$.
/eaktif-beberapa produk alami yang tidak
stabil di atasnya.
0lumina :ase normal.Bentuk asam, basa, dan netral yang tersedia
menjadi
digunakan dalam pemisahan asam, basa, dan
senyawa yang relatif nonpolar, masing-masing.
ukup reaktif.
!tyrene'divinyl ben@ene polymer
:ase terbalik %fase diam kurang polar
dibandingkan
fase gerak).
!tabil pada p rendah dan tinggi.
Kurang reaktif %masalah karena terkena silanol
kelompok dihindari).
5emiliki kapasitas yang lebih tinggi untuk
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 9/38
senyawa polar daripada &
karena persentase karbon yang lebih tinggi.
5emberikan resolusi lebih rendah dari &
karena yang
ukuran manik yang lebih besar.
dealnya digunakan untuk desalting dan
adsorpsi-elusi
produk alami dari ekstrak air.
2ebih ekonomis daripada &.
Brominasi membuat polimer lebih kuat.
:ase stasioner mumnya "igunakan di
0dsorpsi Kromatografi
:ase Berikat mum "igunakan di 5arine
solasi Bahan 0lam
:ase terbalik %pelarut umum adalah air, 5eO,
asetonitril, dan T:).Cang paling kuat untuk nonpolar %hidrofobik)
senyawa.
!enyawa yang dielusi dalam rangka
peningkatan
hidrofobik %air adalah eluen terlemah).
Beberapa produsen menawarkan O"! yang
dapat mentolerir up
untuk p &$.$
*amun, cairan juga dapat bertindak sebagai fase diam bahkan ketika itu tidak
terikat dukungan, seperti dalam kasus %lihat Bab. 8).
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 10/38
.&.4.&. /;09;*T! O*-30/*9 "0* ;:;K 3
!enyawa ion yang sangat mudah larut dalam air juga dapat dipisahkan
dengan menggunakan fasa diam nonpolar, misalnya, oktadesil silika. al ini
dapat dicapai dengan mengubah p fase gerak untuk menekan ionisasi senyawa
sehingga mereka dapat dipertahankan sebagai spesies netral pada permukaan
hidrofobik dari fase diam. ara alternatif adalah dengan menambahkan reagen
pasangan-ion sesuai dengan fase gerak. /eagen pasangan-ion adalah senyawa
biasanya ionik yang mengandung menanamkan rantai hidrokarbon hidrofobik.
5ereka dapat bertindak baik dengan berinteraksi dengan sampel, membentuk
sepasang ion netral reversibel yang dapat dipertahankan pada stasioner fase, atau
dengan berinteraksi dengan fase diam melalui bagian hidrofobik, membentuk fase
diam dengan kelompok-kelompok yang dibebankan pada yang senyawa ion dapat
mengikat secara reversibel %4&). 0sam trifluoroasetat %T:0), pentafluoropropionic
0sam %3:30), dan asam eptafluorobutyric %B0) adalah contoh dari anion
reagen pasangan-ion sementara trietilamina %T;0) adalah contoh dari kationik
sebuah satu. Keuntungan tambahan dari T:0 dan T;0 termasuk volatilitas tinggi
%memungkinkan untuk penghapusan cepat) dan kompatibilitas dengan
spektrometri massa analisis %44) %lihat atatan 4).
Tabel 4
:ase Berikat mum "igunakan di 5arine solasi Bahan 0lam
:ase stasioner atatan
& %Octadecyl)a :ase terbalik %pelarut umum adalah air,
5eO,
asetonitril, dan T:).
Cang paling kuat untuk nonpolar
%hidrofobik)
senyawa.
!enyawa yang dielusi dalam rangka
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 11/38
peningkatan
hidrofobik %air adalah eluen terlemah).
Beberapa produsen menawarkan O"! yang
dapat mentolerir up
untuk p &$.$
%Octyl)a :ase terbalik.
!elektivitas 5irip dengan & tapi kurang
kuat.
3h %3henyl-he=yl) :ase terbalik.
!enyawa aromatik dipertahankan lagi.
* yanopropyl Bisa digunakan dalam mode normal dan
fase terbalik.
!edikit polar. !elektivitas yang unik untuk
polar
senyawa.
.&.6. 3ertukaran ion
Kromatografi penukar ion %;) berlaku untuk pemisahan spesies atau
komponen yang terionisasi pada p tertentu ion %lihat Bab. ?). al ini umumnya
digunakan dalam pemurnian peptida karena hampir semua ini makromolekul
membawa muatan permukaan memungkinkan untuk adsorpsi mereka ke
dukungan yang solid. Keuntungan dari teknik ini adalah kenyataan bahwa biologi
Kegiatan hampir selalu dipertahankan karena komposisi ponsel-fase biasanya
berair %44). "i sisi lain, penggunaan teknik ini sering memperkenalkan sejumlah
besar garam penyangga anorganik dan dengan demikian memerlukan langkah
desalting berikutnya. :ase diam terdiri dari partikel tidak larut dalam air bantalan
kovalen terikat muatan positif atau negatif kelompok fungsional. ion lawan gratis
dari muatan yang berlawanan terkait dengan kelompok-kelompok fungsional ini.
!pesies ion dalam sampel dapat bertukar dengan ion lawan ini dan mengikat ke
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 12/38
fase stasioner. 3emisahan dicapai karena perbedaan dalam afinitas komponen
ionik terhadap fase diam. untuk lebih rincian tentang mekanisme proses
pertukaran ion, pembaca harus berkonsultasi dengan ulasan yang sangat otoritatif
yang ditulis oleh laude "ufresne.
.&.6.&. "ukungan matriks
"ukungan matriks yang membentuk partikel stasioner fase dapat resin
polystyrene, polimer karbohidrat, atau gel silika. !ifat dukungan matriks memiliki
dampak pada karakteristik aliran kolom ini, porositas dari stasioner fase partikel,
dan ketahanan terhadap mekanik tekanan. *amun, batas pengecualian %ukuran
pori) yang diberikan oleh produsen 3erlu dicatat, karena molekul lebih besar dari
batas-batas ini akan tidak mengikat efisien untuk fase diam karena pori mereka
yang terbatas aksesibilitas. Tabel 6 meringkas sifat fisikokimia dari yang paling
umum matriks dukungan ;.
.&.6.4. Kelompok fungsional
Kelompok fungsional yang melekat pada dukungan matriks bisa positif
atau bermuatan negatif untuk memberikan anion- atau kation-tukar kromatografi,
masing-masing. 7umlah kelompok fungsional ini per satuan volume dari matriks
menentukan kapasitas kolom. 3Ka nilai fungsional kelompok menentukan
kekuatan e=changer. "alam kromatografi pertukaran anion, ionisasi penuh terjadi
pada nilai p 4,$ unit di bawah pKa sementara netralisasi penuh terjadi pada nilai
p 4,$ unit di atas pKa.
Tabel 6
5atriks dukungan di ;
5atriks atatan
!tyrene-divinil ben@ena polimer 3ermukaan hidrofobik.
Kaku, menawarkan kekuatan mekanik yang
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 13/38
sangat baik.
"apat mentolerir kisaran p &,$-&(,$.
"apat berinteraksi dengan %teradsorpsi) @at
terlarut yang mengarah ke
pemulihan yang buruk. ni disebut
AA nteraksi backbone AA.
polimer karbohidrat ontohnya adalah silang dekstran dan
agarosa silang.
5embengkak mudah dalam air
menghasilkan gel yang
memiliki sifat aliran yang sangat baik.
Tidak menunjukkan interaksi backbone.
idrofilik, tidak menyebabkan denaturasi
protein.
silika gel Tidak membengkak dalam air.
5enawarkan ukuran-cocok partikel yang
sangat kecil untuk 32.
Tidak stabil pada p di atas 8,#.
!ebaliknya adalah benar untuk kromatografi kation-tukar. *ilai pKa untuk
berbagai kelompok fungsional digunakan dalam ; ditunjukkan pada Tabel (.
al ini dapat terlihat bahwa penukar kuat dibebankan selama rentang p penuh,
sementara penukar yang lemah hanya dikenakan biaya pada rentang p yang
terbatas. 3Ka *ilai analit harus dipertimbangkan juga. 0sam organik yang negatif
dibebankan pada saat p larutan berada di atas asam ini pKa, dan amina
bermuatan positif pada p di bawah nilai dasar ini pKa. *amun, p fase gerak
harus memfasilitasi ionisasi kedua sorben kelompok fungsional dan analit. 3erlu
dicatat bahwa penukar ion hanya lemah harus digunakan untuk menangkap
spesies yang kuat ion %misalnya, asam sulfonat dan amina kuaterner).
Tabel (
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 14/38
Kelompok :ungsional dalam ;
Kelompok fungsi atatan
0sam sulfonat %-!O6)
0sam karboksilat %-O4)
0mina Kuarter %-*/6D)
0mina tersier %-*/4)
Kuat kationik-pKa E&
2emah kationik-pKa :: (-#
Kuat anionik-pKaF &6
2emah anionik-pKa ::
al ini karena pemulihan analit tersebut sering rendah pada ion kuat
e=changer karena ketidakmampuan untuk menetralkan amina kuaterner atau
gugus asam sulfonat baik pada sorben atau analit. "i sisi lain tangan, analit yang
mengandung amina lemah atau gugus asam karboksilat dapat diekstraksi dengan
baik penukar ion lemah atau kuat, seperti pengaturan p dapat digunakan untuk
menetralkan muatan pada analit untuk membawa elusi %4(). *amun, penukar ion
lemah umumnya lebih disukai di alam kerja produk, elusi dapat dicapai melalui
ringan, tak rusak kondisi.
.&.6.6.on lawan dan kekuatan ion
on lawan dalam matriks dan fase gerak menyaingi sampel ion untuk situs
mengikat dikenakan di permukaan sorben. Oleh karena itu, kehadiran ion lawan
yang memiliki afinitas yang lebih besar untuk sorben dari analit atau adanya
konsentrasi tinggi %kekuatan ionik) dari hampir ion lawan pun bisa menghalangi
pengikatan analit ke fase stasioner %4(). 0nion dapat peringkat menurut afinitas
mereka untuk pertukaran anion matriks sebagai berikut <
hidroksida Efluoride Easetat EbikarbonatG format Eklorida E:osfatG garam sitrat
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 15/38
"engan cara yang sama, kation dapat peringkat dalam hal afinitas mereka
untuk penukar kation sebagai berikut <
lithium Ehidrogen Enatrium Eamonium Ekalium Emagnesium Ekalsium
!ebagai aturan umum, retensi analit difasilitasi oleh memuat sampel dalam
buffer kekuatan ion rendah yang terdiri dari afinitas rendah atau ion lawan
displacer lemah pada p yang tepat. ;lusi dipromosikan oleh garam kekuatan ion
tinggi dan buffer yang mengandung ion lawan displacer kuat dan H atau dengan
mengubah p untuk sepenuhnya menetralisir kelompok dibebankan di kedua
sorben atau analit.
.&.6.(. 3ertukaran ion
"alam kebanyakan penukar ion, kelompok fungsional tetap langsung pada
permukaan matriks. anya sejumlah kelompok ionik dapat melekat karena
permukaan bagian terbatas dari matriks. dengan tentakel 6?( oussen dan 7aspars
ion e=changer, namun, kelompok penukar kovalen berlabuh ke matriks melalui
rantai polimer linier. Oleh karena itu, kapasitas tukar dapat meningkat secara
signifikan. Keuntungan lain adalah bahwa penukar ion tentakel tidak
menunjukkan interaksi backbone sebagai matriks stasioner Tahap tersembunyi.
Oleh karena itu, penukar ion tentakel jauh lebih cocok untuk pemisahan molekul
protein besar di mana risiko denaturasi dan hilangnya aktivitas biologis yang
signifikan.
.&.(. kuran 3engecualian
Kromatografi ukuran eksklusi %!;), juga dikenal sebagai filtrasi gel atau
gel permeasi kromatografi, memisahkan molekul-molekul berdasarkan mereka
ukuran molekul %lihat Bab. #). :ase diam terdiri partikel berpori dimana ukuran
pori secara ketat dikontrol. !ebagai fase gerak mengalir di atas dan melalui
partikel-partikel ini, ia membawa bersama dengan itu @at terlarut itu, tergantung
pada ukuran dan bentuk mereka, dapat mengalir ke dalam dan keluar dari pori-
pori. 5olekul lebih besar dari ukuran pori tidak bisa masuk ke pori-pori dan elusi
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 16/38
bersama-sama sebagai puncak pertama dalam kromatogram, fenomena yang
disebut AA 3engecualian total. 5olekul yang lebih kecil yang bisa masuk ke pori-
pori akan memiliki waktu tinggal rata-rata dalam partikel yang tergantung pada
molekul Aukuran dan bentuk. 5olekul yang berbeda, karena itu, memiliki jumlah
angkutan yang berbeda kali melalui kolom. Bagian dari kromatogram disebut
selektif wilayah permeasi. 5olekul-molekul terkecil dapat menembus pori-pori
terkecil sehingga memiliki waktu tinggal terpanjang pada kolom dan mengelusi
bersama sebagai puncak terakhir dalam kromatogram. 3uncak terakhir ini
menentukan batas permeasi keseluruhan. !; adalah teknik banyak digunakan
untuk pemisahan peptida dan protein karena kondisi elusi keras tidak diperlukan.
!elain itu dapat digunakan dengan sukses untuk desalting. ICang paling umum
digunakan sorbents ukuran-pengecualian adalah gel polyde=tran, mis, !ephade=J
diproduksi oleh 3harmacia. 9el ini tersedia secara komersial dalam bentuk
manik-manik, yang harus tenggelam dalam fase gerak untuk beberapa jam
sebelum digunakan untuk memungkinkan pembengkakan berlangsung. !ephade=
diproduksi oleh ikatan silang dari dekstran dengan epiklorohidrin dan tersedia
dalam berbagai kelas dengan ukuran pori yang berbeda %lihat Bab. #). !ephade= 9
gel hidrofilik dan penggunaannya terbatas pada berair solusi. "engan demikian,
mereka ideal untuk fraksionasi campuran yang larut dalam air. 5eskipun modus
utama mereka pemisahan adalah filtrasi gel, adsorpsi tambahan mekanisme
mungkin ada, sehingga menimbulkan resolusi yang baik. !ephade= 2-4$ adalah
hydro=ypropylated 9-4#. 3engenalan kelompok hidroksipropil tidak mengubah
jumlah gugus hidroksil tapi meningkatkan rasio karbon untuk hidroksil. /esultan
gel memiliki, oleh karena itu, baik hidrofilik dan lipofilik properti.
2ipofilisitasnya tambahan memungkinkan gel ini untuk digunakan dengan pelarut
berair. !ephade= 2-4$ umumnya digunakan untuk fraksinasi produk alami
organik larut. ketika pelarut tunggal digunakan, pemisahan terutama terjadi
dengan filtrasi gel modus. Ketika campuran pelarut yang digunakan, gel akan
mengambil sebagian besar komponen polar dari campuran pelarut. al ini
menghasilkan dua fase sistem dengan fasa diam dan mobile komposisi yang
berbeda. 3emisahan kemudian terjadi berdasarkan partisi dan ukuran eksklusi.
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 17/38
terbaik fraksinasi biasanya diperoleh ketika campuran polar dan nonpolar pelarut
yang digunakan. !elain itu, harus dipertimbangkan bahwa fenolik, heteroatomic,
dan siklik !enyawa istimewa tertahan gel !ephade= terutama ketika alkohol
rendah digunakan sebagai pelarut eluting. !enyawa ini biasanya tinggal lagi pada
gel dari yang diharapkan berdasarkan ukuran mereka. !ephade= gel cukup inert,
sehingga pemulihan sampel biasanya sangat baik. 5ereka stabil di semua pelarut,
yang tidak asam kuat %misalnya, di bawah p 4.$), dan tidak mengandung @at
pengoksidasi kuat. "i sisi lain, gel ini rentan terhadap serangan jamur dan bakteri.
kelemahan lainnya termasuk waktu elusi yang lama dan resolusi relatif rendah. itu
diperpanjang kali operasional terutama karena kebutuhan untuk panjang kolom
sempit dan laju aliran lambat untuk efek resolusi yang memadai. !orbents lain
untuk eksklusi ukuran telah dikembangkan menggunakan berbeda jenis matriks,
misalnya, stirena-divinil ben@ena polimer dan gel silika. Kedua matriks
menawarkan kekuatan mekanik yang baik dan dapat digunakan dalam 32
modus. !ilica gel yang digunakan di !; benar-benar endcapped untuk
meminimalkan spesifik interaksi. al ini stabil di kisaran p 4,$-8,#. !tyrene-
divinil ben@ena polimer, bagaimanapun, menawarkan lebih luas p rentang
stabilitas tetapi menunjukkan efisiensi yang lebih rendah daripada silika. !;
memiliki kapasitas muat yang rendah dalam hal massa sampel dan volume
sampel. !ampel harus terkonsentrasi ke tetapi tidak melampaui titik curah hujan
untuk kinerja optimal.
.&.#. 0finitas biologi
Kromatografi afinitas jauh lebih spesifik daripada pemurnian lainnya
teknik. al ini bergantung pada persiapan matriks yang kompleks bunga, dan
sebaiknya hanya senyawa ini, akan mengikat secara reversibel. itu matriks
biasanya manik-manik agarosa %!epharose atau Bio9el 0), poliakrilamida
%misalnya, Bio9el 3), dekstran silang %misalnya, !ephacryl), atau silica gel yang
ligan biospecific %antibodi, en@im, atau protein reseptor) telah kovalen. 2igan
amobil berinteraksi hanya dengan molekul yang selektif dapat mengikat untuk itu.
!enyawa lain dalam sampel, tidak mampu dari biospecific mengikat, yang hanyut.
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 18/38
!enyawa ditahan bisa pulih dengan mengubah p dan H atau komposisi
penyangga untuk mengganggu interaksi solut-ligan. !ebuah teknik elusi alternatif
melibatkan penambahan agen kompetitif yang dapat bersaing dengan @at terlarut
yang menarik untuk situs pengikatan spesifik pada kolom. beberapa ligan
mungkin memiliki afinitas kepada sekelompok @at terkait daripada tunggal satu
dan dapat digunakan untuk memurnikan beberapa @at.Terlepas dari selektivitas
yang tinggi, kromatografi afinitas tidak sering diterapkan pada isolasi hasil alam
laut. al ini terutama karena Teknik ini sangat mahal. Banyak kesulitan yang
dihadapi dalam pemilihan ligan yang sesuai dan persiapan fase diam. 2igan harus
menunjukkan afinitas pengikatan spesifik dan reversibel untuk substansi yang
akan dimurnikan. al ini juga harus memiliki kelompok kimia dimodifikasi yang
memungkinkan untuk melekat pada matriks tanpa merusak mengikat aktivitas.
!elain itu, hubungan kovalen digunakan untuk melumpuhkan ligan harus stabil di
segala kondisi yang digunakan selama kromatografi.
.4.:asa gerak di 2
"alam adsorpsi dan kromatografi partisi sistem, aturan lama AA seperti
memiliki afinitas untuk seperti AA memegang makna khusus dalam hal yang !istem
pelarut dapat berhasil digunakan untuk sampel elusi. !ebuah pelarut polar
dibutuhkan untuk mengelusi analit polar dari kolom normal fase polar, sedangkan
pelarut organik hidrofobik diperlukan untuk elusi hidrofobik analit dari kolom
fase terbalik hidrofobik. !ifat-sifat pelarut lainnya seperti volatilitas, viskositas,
mudah terbakar, toksisitas, reaktivitas, kompatibilitas dengan metode deteksi, dan
biaya harus dipertimbangkan. Tabel # berisi informasi rinci tentang sifat-sifat
yang paling umum organik pelarut. 3enambahan berbagai pengubah ponsel-fase
seperti asam %atau kurang umumnya, basa), reagen pasangan-ion, atau garam
penyangga anorganik bisa berharga dan menimbulkan resolusi yang lebih baik.
9aram Buffer biasanya ditambahkan ke fase mobile kromatografi cair kinerja
tinggi fase terbalik %/3-32). 3ilihan garam penyangga, bagaimanapun,
dikendalikan oleh banyak faktor. ni harus transparan pada panjang gelombang
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 19/38
deteksi dan gratis dari kontaminan organik. !elain itu, harus menunjukkan
kelarutan lengkap ketika komponen organik dan berair fase gerak dicampur.
Tabel #
Sifat umum Pelarut Digunakan Pemurnian Natural ProductsÃ
mumnya, garam penyangga digunakan pada konsentrasi &$-&$$m5
%4$). *amun, penggunaan garam-garam ini memerlukan langkah desalting
berikutnya. "i ;, fase gerak terutama larutan buffer. :aktor-faktor kritis adalah
p dan kekuatan ion dari fase gerak. Tradisional buffer anorganik seperti fosfat,
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 20/38
asetat, dan format biasanya digunakan dalam pemisahan pertukaran ion. Beberapa
penulis lebih suka menggunakan buffer volatile menghilangkan langkah desalting
berikutnya. ontoh buffer volatile amonium bikarbonat dan amonium asetat.
Buffer volatile terutama mengandung piridin, yang sangat beracun. *amun,
penguapan buffer ini bukanlah tugas yang mudah, dan selama proses penguapan
penyangga solusi, perubahan drastis dalam p dapat terjadi yang dapat
mempengaruhi diinginkan komponen %&+).
.6.Bentuk 2
.6.&. Berlawanan hromatography %)
Kedua fase stasioner dan mobile cair. 3emisahan @at terlarut adalah
dicapai dengan partisi. "ua bentuk tersedia %lihat Bab. 8). Bentuk
lama adalah tetesan berlawanan dan didasarkan pada berlalunya tetesan
dari fase mobile melalui fase diam lebih lama jarak. :ase diam yang
terkandung dalam 4$$ atau lebih tabung kaca dihubungkan secara seri
dengan lembam Teflon tabung. :ase gerak dipompa melalui sebagai
serangkaian terus menerus tetesan yang cukup kecil untuk naik %atau
jatuh) melalui fase diam tanpa menyentuh sisi tabung. sentrifugal ini
merupakan lanjutan mengenai hal ini dan memberi jauh lebih cepat hasil.
:ase diam diadakan di tabung sebagai lapisan tipis dengan sentrifugal
kekuatan. 5eskipun menawarkan pemulihan sampel sangat baik,
terbatas berbagai campuran pelarut yang dapat digunakan dan tingginya
biaya yang terlibat membatasi penerapannya %4#).
.6.4. Tipis-2ayer hromatography
:ase diam padat dan tersebar di lembaran datar. kedua adsorpsi dan partisi stasioner fase yang tersedia. Cang paling umum digunakan fasa
diam adalah silika gel dan oktadesil silika. Teknik ini berguna dalam
fraksinasi, tidak hanya sebagai proses akhir untuk pemurnian relatif
sejumlah kecil senyawa yang hampir murni, tetapi juga sebagai metode
untuk merancang beberapa jenis pemisahan kolom dan juga untuk
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 21/38
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 22/38
organisme dan tempat pengumpulan harus hati-hati dicatat untuk memfasilitasi re-
pengumpulan dan identifikasi taksonomi berikutnya.
9ambar ( menyajikan contoh lembar catatan koleksi yang harus selesai
untuk setiap sampel yang dikumpulkan.
"i tempat pertama, masing-masing sampel harus memiliki sejumlah
koleksi khusus. 7umlah ini dapat dipilih untuk menunjukkan koleksi tahun,
ekspedisi nomor, dan spesimen nomor, misalnya, koleksi nomor +84&4 berarti
tahun &++8, ekspedisi nomor 4, dan spesimen nomor &4. 2okasi harus direkam
pada peta atau grafik daerah dengan skala yang sesuai untuk mengaktifkan re-
koleksi. 7ika memungkinkan, aparat posisi global %93!) harus digunakan wuntuk
mendapatkan koordinat yang akurat untuk &$ m. nformasi tentang habitat
%misalnya, sampel tumbuh di atas batu atau pada permukaan organisme lain)
sebagai juga setiap pengamatan ekologi %misalnya, mampu mencegah
pertumbuhan organisme tetangga) harus dicatat. !ebuah penjelasan rinci tentang
ciri-ciri morfologi organisme, termasuk warna, bentuk, tekstur, harus ditulis. :oto
closeup organisme, diambil di bawah dan di atas air, adalah sangat penting untuk
nanti identifikasi taksonomi dan harus melekat pada lembar pengumpulan %lihat
atatan 6). !pesimen voucher untuk tujuan taksonomi harus disiapkan dengan
mengambil kecil %misalnya, 4-# cm) bagian dari jaringan dan melestarikan dalam
larutan formalin &$L dalam air laut. !pesimen ganggang biasanya diawetkan
dalam larutan formalin #L dalam air laut. !pesimen harus mewakili dari seluruh
organisme dan mencakup banyak jaringan yang relevan dengan taksonomi
mungkin, misalnya, untuk spons, baik e=o- dan endosome sangat penting untuk
identifikasi akurat. ntuk tunicates dan karang lunak, sering menjadi bagian dari
organisme atau seluruh organisme %jika tidak terlalu besar) harus dikumpulkan,
termasuk AA root. AA !etelah spesimen mencapai laboratorium, larutan formalin
harus dituangkan dan diganti dengan etanol 8$L untuk penyimpanan jangka
panjang.
7umlah organisme yang akan dikumpulkan biasanya ditentukan mengingat
kelimpahan. kuran sampel yang ideal adalah &-4 kg berat basah %&$$-4$$ g
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 23/38
berat kering). 3emanenan lengkap organisme harus dihindari. 7ika hanya
organisme tunggal yang besar tersedia, bagian dari itu mungkin dikumpulkan.
dealnya, sampel harus liofilisasi segera setelah pengumpulan untuk mencegah
degradasi kimia. 7ika hal ini tidak mungkin, sampel harus
disimpan pada -4$J sampai $J sampai pengeringan beku. !ebuah pendekatan
alternatif adalah untuk memperbaiki sampel dengan merendamnya dalam
campuran etanol-air %#$<#$ vHv) untuk kira-kira 4( jam setelah cairan tersebut
akan dibuang. basah organisme tersebut kemudian ditempatkan dalam high-
density polyethylene botol %*algene 4 2 wadah lebar mulut adalah yang terbaik)
dan dikirim kembali ke laboratorium rumah di suhu lingkungan %48) %lihat
atatan (). !ampel diawetkan dengan cara ini biasanya tetap dalam kondisi baik
hingga 4 minggu dalam kondisi tropis dengan tidak ada kerugian yang signifikan
dari konten metabolik sekunder. 3enambahan 5eO harus terjadi segera setelah
sampel mencapai laboratorium.
&KST)AKSI
!trategi ekstraksi tiga yang banyak digunakan di bidang alam laut produk.
3ilihan metode tergantung pada tujuan proses isolasi, fasilitas yang tersedia, serta
keuntungan intrinsik dan kerugian prosedur %lihat atatan #). 5etode pertama
melibatkan maserasi sampel dengan pelarut, diikuti dengan penyaringan atau sentrifugasi.
/esidu jaringan dikembalikan ke wadah ekstraksi dan diekstraksi lagi. 3roses berlanjut
sampai tidak ada hasil ekstraktif diperoleh %lihat atatan ?). !ampel biasanya dipotong
menjadi potongan-potongan kecil atau ditumbuk menjadi partikel halus untuk
memfasilitasi penetrasi pelarut.
3engadukan atau sonication dapat diterapkan untuk meningkatkan tingkat difusi.
"alam kebanyakan kasus, 5eO atau ;tO adalah pelarut pilihan. *amun, penggunaanserangkaian pelarut meningkatkan polaritas juga umum untuk mencapai tingkat tertentu
fraksinasi. :ilter bantu dan vakum biasanya digunakan untuk mempercepat proses filtrasi.
!etelah ekstraksi, pelarut dihilangkan dengan penguapan rotary tidak lebih dari 6#J
untuk menghindari degradasi senyawa %lihat atatan 8). 5etode ini sederhana dan tidak
memerlukan peralatan yang canggih. "i sisi lain, sejumlah besar pelarut yang terlibat dan
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 24/38
energi yang dibutuhkan untuk penguapan mereka, serta prosedur yang panjang dapat
membatasi aplikasi industrinya. !kema ekstraksi kedua dikembangkan oleh para ilmuwan
di ! *ational ancer nstitute %*) sebagai bagian dari program skrining yang luas
dari produk alami untuk mendeteksi senyawa dengan aktivitas antitumor atau anti->.
!ampel beku yang digiling dengan es kering %O4) dan diekstraksi dengan air pada ( M .
;kstrak air dihilangkan dengan sentrifugasi dan liofilisasi. The marc kering kemudian
berturut-turut diekstraksi dengan 5eO-4l4 %&< & v H v), diikuti oleh 5eO %&$$L).
;kstrak organik digabungkan dan dipekatkan pada vakum %4,4+). 5etode ini sangat
efisien. !elain itu, liofilisasi dalam ekstrak air menghilangkan risiko menabrak dan
degradasi panas. 3rotokol ekstraksi ketiga melibatkan penggunaan !:s %lihat Bab. 6).
Titik kritis didefinisikan sebagai suhu tertinggi dan tekanan di atas yang tidak ada
perbedaan dalam kepadatan antara bentuk cair dan gas dari substansi. 3ada suhu dan
tekanan di atas titik kritis, cairan homogen tunggal terbentuk dan dikatakan superkritis.
!uhu dan tekanan kritis berbeda dengan substansi dan dengan kemurniannya. ntuk air,
nilai-nilai 68(J dan 44$ atm, masing-masing, sedangkan untuk karbon dioksida nilai-
nilai yang sesuai adalah 6&J dan 8( atm, masing-masing.
!:s memiliki keuntungan dari viskositas rendah, sifat perpindahan massa
unggul, dan daya solvasi baik. 5ereka juga memiliki kemampuan untuk menembus
bahan mikro. "engan demikian, penggunaannya dalam ekstraksi produk alami secara
luas dihargai. Karbon dioksida superkritis adalah pelarut suhu rendah paling disukai
dapat digunakan. ni memiliki keuntungan lain, seperti sebagai tidak beracun,
nonflammability, noncorrosiveness, inertness kimia, dan efektivitas biaya. !elain itu,
akan mudah menguap ke atmosfer setelah ekstraksi %6$). O4 superkritis menyerupai
pelarut nonpolar heksana dan ben@ene dalam kekuasaan pelarut mereka. 0finitas untuk
senyawa polaritas yang lebih tinggi dapat ditingkatkan dengan meningkatkan densitas
%oleh kecil perubahan suhu dan tekanan) atau menambahkan pelarut organik %misalnya,5eO, ;tO, atau "5). *amun, penambahan tersebut pengubah organik akan
mengubah suhu dan tekanan kritis dan akan memerlukan modifikasi prosedur untuk
menghapus cairan ekstraksi pada akhir proses %4#). /eferensi %6&,64) termasuk contoh
untuk aplikasi teknik ini dalam ekstraksi rumput laut. meskipun ini 5etode menawarkan
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 25/38
cara yang cepat dan efektif untuk ekstraksi dan penghapusan pelarut selanjutnya, perlu
peralatan canggih dan beberapa eksperimen untuk memilih pengubah organik terbaik.
*ractionation o! Marine &+tracts
;kstrak laut sangat kompleks, dan terdiri campuran senyawa netral, asam, basa,
lipofilik, dan amphiphilic. !ifat senyawa %s) dari bunga mungkin berbeda sesuai dengan
tujuan proyek, dan sebagai akibatnya tidak ada prosedur fraksinasi umum atau resep yang
dapat melayani untuk segala kemungkinan. 3erlu dicatat bahwa meskipun kemajuan
terbaru dalam teknologi pemisahan, pengalaman masih memainkan peran yang sangat
diperlukan dalam isolasi hasil alam laut.
mumnya, prosedur fraksinasi melewati empat tahap %9ambar. #). Tahap pertama
meliputi pengumpulan informasi tentang profil kimia konten dan aktivitas biologis
ekstrak, sifat senyawa yang menarik, serta jenis kotoran. nformasi ini sangat berharga
untuk perencanaan strategi isolasi. 3ada tahap kedua, dereplication %lihat Bab. &4)
biasanya terjadi. Tujuannya adalah untuk mengidentifikasi ekstrak yang mengandung
senyawa hanya dikenal sedini mungkin sebelum langkah fraksinasi rumit yang dilakukan,
dan untuk memprioritaskan ekstrak dalam hal konten mereka senyawa baru dan H atau
aktif menarik. ni mungkin berguna untuk menunjukkan bahwa semua prosedur yang
terlibat dalam tahap & dan 4 harus dilakukan untuk semua fraksi yang diperoleh setelah
setiap langkah pemisahan. "engan cara ini, komponen yang menarik dapat dilacak
sampai pemurnian akhir. Tujuan dari tahap ketiga sering untuk menghilangkan sebagian
besar yang tidak diinginkan bahan, misalnya, lemak dan garam menggunakan cukup
resolusi rendah langkah pemisahan, misalnya, partisi cair-cair, !3;, dan !;. Tahap
keempat biasanya melibatkan langkah-resolusi tinggi pemisahan, misalnya, 32
dengan Tujuan pemurnian senyawa yang menarik untuk sebuah gelar yang
memungkinkan penjelasan struktur berikutnya. 3rosedur yang terlibat dalam empat tahap
yang disebutkan dibahas di bawah ini dengan beberapa rincian.
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 26/38
9ambar. #. 3endekatan umum untuk fraksinasi ekstrak laut.
Ta(a" ,: Investi#asi Si!at &+tract Kom"onen
ni mungkin adalah tahap yang paling penting dalam proses isolasi. 3erencanaan
bijaksana skema fraksionasi terutama tergantung pada informasi yang tersedia pada sifat
@at hadir dalam ekstrak. !elain itu, pengetahuan tentang sifat kimia dan H atau aktivitas
biologis senyawa target yang efisien dapat memandu proses pemisahan. 0kibatnya,
beberapa informasi dapat diungkapkan oleh taksonomi yang tepat identifikasi organisme
diselidiki. 3encarian literatur dapat memberikan informasi tentang senyawa yang
sebelumnya terisolasi dari spesies. 7ika kimia spesies belum diteliti, informasi yang
berguna dapat diperoleh dengan mencari spesies yang terkait erat dalam genus. *amun,
perlu diingat bahwa kandungan kimia dari organisme laut dapat benar-benar berbeda jika
dikumpulkan dari sebuah wilayah yang berbeda dan H atau di musim lain. 7enis pelarut
yang digunakan dalam ekstraksi juga dapat memberikan beberapa informasi yang
berguna. ;kstrak air biasanya mengandung senyawa yang sangat polar dan sejumlah
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 27/38
besar garam anorganik. "i sisi lain, ekstrak organik sering mengandung senyawa yang
kurang polar dan banyak lemak. nformasi lebih lanjut dapat diperoleh dengan melakukan
biologis pengujian, analisis T2, spektrometri massa %5!), dan *5/ percobaan.
P&N-A)IN.AN BIOLO.I
Bioassay-dipandu fraksinasi sangat menarik untuk penelitian tentang penemuan
obat dari sumber alami. al ini penting untuk menjaga sampel referensi dari fraksi yang
diperoleh setelah setiap langkah pemisahan sehingga dapat diuji secara biologis dan
berfungsi sebagai catatan bahan pulih pada setiap tahap proses %4&). *amun, salah satu
masalah yang paling sulit dalam bioassay-diarahkan fraksinasi adalah kemungkinan
mendapatkan positif palsu dan negatif palsu. !alah positif biasanya terjadi jika salah satu
komponen tidak aktif dalam ekstrak memiliki kemampuan untuk berinteraksi nonspesifik
dengan target molekul assay %misalnya, mampu mengendapkan protein dan karenanya
menunjukkan aktivitas penghambatan dalam banyak tes berbasis en@im). "emikian pula,
beberapa komponen tidak aktif dapat menimbulkan hit positif dengan berinteraksi dengan
beberapa komponen dari sistem uji selain target. Orang lain mungkin mengganggu
metode uji deteksi, misalnya, Nuenchers > %&). "i sisi lain, negatif palsu biasanya
terjadi jika senyawa aktif bekerja pada target molekul lain daripada pengujian tersebut.
al ini juga harus dicatat bahwa banyak entitas kimia menarik mungkin diaktifkan secara
in vivo oleh en@im metabolik, faktor yang tidak dipertimbangkan dalam banyak sistem
penyaringan in vitro. "engan demikian, kita dapat menyimpulkan bahwa proses
fraksinasi tidak boleh hanya mengandalkan skrining biologis.
ANALISIS TL$
0nalitis pelat T2 dapat digunakan untuk mendapatkan ide tentang tingkat
polaritas danHatau hidrofilisitas komponen ekstrak yang berbeda. 5ereka juga banyak
diterapkan dalam mendeteksi senyawa melalui beberapa langkah pemisahan. !elain itu,
mereka dapat digunakan untuk memprediksi pola pemisahan pada kromatografi kolom,
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 28/38
dan dengan demikian membantu dalam memilih sistem kolom kromatografi terbaik.
5ereka mungkin membantu juga dalam menilai tingkat kemurnian senyawa hasil isolasi.
"alam semua aplikasi di atas, lebih dari satu sistem pelarut harus diadili sebagai senyawa
yang berbeda mungkin memiliki nilai /f yang sama dalam satu sistem dan dengan
demikian muncul sebagai satu tempat. 3elat T2 dapat disemprot dengan reagen yang
bereaksi khusus dengan kelas-kelas tertentu senyawa. 3enggunaan reagen penyemprotan
yang berbeda dapat memberikan banyak informasi tentang kelas kimia hadir dalam
ekstrak. 0da banyak reagen penyemprotan tercantum dalam beberapa teks standar pada
subjek %66,6() dan juga dalam Bab (. Tabel ? daftar penyemprotan reagen yang paling
banyak digunakan untuk produk alami laut.
!elain itu, kombinasi langsung T2 dengan bioassay %bioautografi) dapat
memberikan informasi lebih lanjut tentang komponen aktif dalam ekstrak campuran. al
ini dicontohkan dalam penemuan agen antimikroba.
tabel ?
T2 3enyemprotan /eagen mum "igunakan di 5ost Kelautan 0lam 3roduk 2abs
/eagen /esep 3erawatan atatan
>anillin H
asam sulfat
2arutkan vanillin %(
g) di terkonsentrasi
4!O( %&$$ m2)
3anas pada &$$M
sampai warna
muncul
niversal penyemprotan
reagen
0nisaldehida
H asam sulfat
Tambahkan $.#ml
anisaldehida ke &$
m2 asam asetat
glasial
dan kemudian
menambahkan ke
campuran #m2
3anas pada &$$M
sampai warna
muncul
5endeteksi banyak
senyawa, terutama
terpen, gula, fenol, dan
steroid
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 29/38
5eO dan # m2
terkonsentrasi
4!O(, dalam
urutan ini
/eagen
"ragendorff
Tambahkan &$ m2
larutan ($L dari K
ke &$ m2 larutan
$,# g subnitrate
bismut dasar dalam
asam asetat %&$ ml)
dan air suling %($
ml). ;ncerkan larutan
yang dihasilkan
dengan asetat asam
dan air dalam rasio<
&< 4< &$
Tidak ada panas yang
diperlukan
5endeteksi alkaloid dan
senyawa heterosiklik
nitrogen
*inhydrin
reagen
2arutkan ninhidrin
%6$ mg) di &$ m2 n-
butanol. Tambahkan
asam asetat $.6m2
untuk solusi
3anas pada &$$M
sampai warna
muncul
"eteksi asam amino,
amina, dan peptida
"ari ekstrak laut. !etelah pengembangan, pelat K2T dari ekstrak kering
dan kemudian dilapis dengan lapisan tipis agar yang mengandung organisme uji
terhadap yang ekstrak aktif. !etelah masa inkubasi yang tepat, @ona inhibisi
pertumbuhan agar dapat dilihat pada daerah-daerah pelat yang mengandung
senyawa aktif %6#). 5etode yang sama juga dapat diterapkan untuk mendeteksi
senyawa dengan aktivitas antitumor %6?).
.6.&.6. 0*02!! *5/
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 30/38
0nalisis spektroskopi *5/ memiliki peran yang sangat diperlukan dalam
menjelaskan struktur senyawa murni. al ini juga dapat memberikan banyak informasi
tentang sifat kimia senyawa dalam campuran. 5aka dari itu, disarankan untuk
memperoleh &- dan &6- spektrum *5/ untuk ekstrak laut. Tujuannya adalah untuk
mendeteksi ada atau tidaknya artefak umum, misalnya, plastici@er %lihat atatan ) dan
untuk menetapkan komponen dalam campuran kelas kimia tertentu %lihat atatan +).
Kombinasi dari fraksi setelah pemisahan dapat ditetapkan atas dasar spektrum *5/
yang serupa.
.6.&.(. 0*02!! 5!
5! adalah teknik yang digunakan untuk mengidentifikasi berat molekul dari
senyawa yang tidak diketahui oleh pengionnya dan mendeteksi rasio massa terhadap
muatan %m H @) dari ion molekul yang dihasilkan. 5olekul yang tidak terionisasi tidak
akan terdeteksi. !alah satu keuntungan dari teknik ini memiliki sensitivitas tinggi. a
bahkan bisa mendeteksi jumlah mikrogram senyawa. 5asalah dalam generalisasi 5!
untuk proses identifikasi komponen ekstrak adalah kurangnya mode ionisasi yang
universal dimana setiap senyawa yang tidak diketahui dapat terionisasi. ntungnya,
banyak teknik ionisasi 5! telah diperkenalkan dimana sebagian besar produk alami
laut dapat terionisasi. mumnya, electrospray %;!) adalah teknik ionisasi yang
direkomendasikan untuk ekstrak polar, sedangkan ionisasi kimia tekanan atmosfer
%03) lebih disukai untuk yang agak polar %68). 0nalisis 5! sulit untuk diterapkan
pada ekstrak laut mentah, tapi bisa digunakan untuk mengidentifikasi senyawa dari
campuran semi murni.
.6.4. Tahap 4< "ereplikasi
solasi senyawa murni dari ekstrak laut adalah proses yang membosankan dan
mahal. 2angkah-langkah harus diambil untuk menghindari isolasi senyawa yang dikenal.
"ereplikasi dapat didefinisikan sebagai upaya untuk menghapus duplikat lead atau
senyawa %lihat Bab. &4) %6). 3roses ini tergantung pada ketersediaan database yang
komprehensif untuk senyawa yang dikenal. 0da 68 database oussen dan 7aspars
tersedia saat ini, termasuk yang mengandung informasi mengenai sumber organisme,
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 31/38
identifikasi taksonomi, dan metode ekstraksi, serta karakteristik kromatografi dan
spektroskopi yang berbeda dari senyawa hasil isolasi. !ebagian besar database ini dapat
diakses melalui internet. Tersedia juga pada ". Tabel 8 berisi beberapa dari database
yang berguna serta /2-nya, terutama dalam kaitannya dengan produk alami laut.
.6.6. Tahap 6< rude :raksinasi
Tujuan dari tahap ini adalah untuk menyederhanakan komposisi ekstrak dengan
membaginya kedalam berbagai kelompok senyawa berbagi karakteristik fisikokimia
yang sama dan atau menghapus sebagian besar bahan yang tidak diinginkan dan dengan
demikian memperbanyak ekstrak sehubungan dengan senyawa sasaran. prosedur umum
melibatkan partisi pelarut, defatting, dan desalting.
.6.6.&. 3artisi pelarut
3rosedur yang dijelaskan pada 9ambar. ? merupakan modifikasi dari
metode yang dikembangkan oleh Kupchan %6+). al ini dapat digunakan
untuk defatting dan desalting juga.
Tabel 8
Beberapa "atabase yang Berguna ntuk "ereplikasi Bahan 0lami 2aut
"atabase /2
5arin2it http<HHwww.chem.canterbury.ac.n@HmarinlitHmarinlit
.shtml
"ictionary of *atural
3roducts and others
http<HHwww.chemnetbase.comH
hemical 0bstracts %0!) http<HHinfo.cas.orgH
*03/02;/T %*atural http<HHwww.cas.orgHO*2*;H"B!!Hnapralertss.htm
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 32/38
3roduct 0lert) database l
Beilstein ross:ire http<HHwww.mimas.ac.ukHcrossfireH
!ilverplatter http<HHweb#.silverplatter.comHwebspirsHstart.ws
* data search http<HHdtp.nci.nih.govHdocsHdtpsearch.html
nited !tates 3atents http<HHwww.uspto.govHpatftH
hemical "atabase
!ervices
http<HHcds.dl.ac.ukHcdsH
*ational nstitute of
!tandards
http<HHwebbook.nist.govHchemistryH
ambridge !tructural
"atabase
http<HHwww.ccdc.cam.ac.ukHproductsHcsdH
5arine Biological
2aboratory, 1oods ole,
50, !0
http<HHwww.mbl.eduH
hromatography
application database
http<HHwww.chromatography.co.ukHappsHhplcHdbases
Hform.htm
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 33/38
9ambar. ?. 5odifikasi skema partisi Kupchan
!ebagian besar lemak akan hilang dengan fraksi n-heksana, sedangkan
garam anorganik akan hilang dengan sesuatu yang berair. Keuntungan dari
metode ini adalah perolehan kembali senyawa sasaran. Kelemahannya adalah
masalah pembentukan emulsi, ketidakefektifan waktu, dan banyaknya
penggunaan volume pelarut.
.6.6.4. "efatting
!ejumlah prosedur telah dijelaskan untuk defatting ekstrak laut.
3enggunaan !ephade= 2-4$ dan 5eO< 4l4 %&< & v H v) sebagai eluen
adalah salah satu prosedur yang umum digunakan. 2emak dan senyawa
organik non polar biasanya dielusi pertama. 3rosedur umum lainnya
melibatkan penggunaan cartridge !3; yang mengandung silika & dan
5eO atau 4O sebagai cairan pencuci. Karena sifat hidrofobik yang kuat,
lemak dan lipid dipertahankan pada fase diam, sementara lainnya komponen
ekstrak hidrofilik berlebih dielusi. 3rosedur terakhir tidak cocok apabila
senyawa sasaran menunjukkan perolehan kembali dari silika & yang buruk.
.6.6.6.3enghilangan garam
5etode yang paling efisien untuk desalting ekstrak laut telah dijelaskan
oleh 1est dan *orthcote %($) dan 1est. %(&). "alam prosedurnya, ekstrak
metanol dilewatkan melalui kolom "iaion 34$P resin %styrene-divinil
ben@ena polimer) sebelumnya dikalibrasi dengan 5eO. ;luen terkonsentrasi
dan melewati lagi kolom yang sama. ;luen yang dihasilkan diencerkan
dengan air dan melewati kolom. 2angkah terakhir diulang untuk memastikan
bahwa semua senyawa yang mengandung domain hidrofobik teradsorpsi pada
resin. "esalting dapat dengan mudah dicapai dengan mencuci resin dengan air
yang banyak. 3roporsi yang berbeda dari 5eO atau aseton dalam air dapat
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 34/38
digunakan untuk mengelusi senyawa teradsorbsi dan untuk mencapai tingkat
fraksinasi tertentu. asil yang lebih baik dapat diperoleh dengan
menggunakan manik-manik dengan ukuran partikel yang lebih kecil
%misalnya, "iaion 34$ss)G namun, dalam hal ini, aplikasi tekanan yang
dibutuhkan untuk mencapai sifat alir yang baik.
.6.(. Tahap (< 3emurnian 0khir
32 preparatif, sejauh ini, merupakan alat yang paling berguna untuk
memisahkan campuran kompleks. Ketika dihubungkan dengan diode array detector
%"0"), 32 memungkinkan seorang analis untuk mengidentifikasi senyawa yang
dikenal dengan perbandingan waktu retensi dan spektrum >. 3engenalan evaporative
light scattering detector %;2!") memungkinkan untuk mendeteksi senyawa yang tidak
memiliki gugus kromofor >. "alam beberapa tahun terakhir, tandem atau ditulis dgn
tanda penghubung teknik analisis seperti 2-5!, 2-5!-5!, 2-*5/, dan 2-
*5/-5! juga telah dikembangkan %lihat Bab. +). Teknik ini menyediakan alat yang
ampuh untuk identifikasi secara cepat senyawa yang dikenal dan penentuan kelas
struktur yang baru.
.6.(.&.> "O"0 0//0C ";T;TO/ %"0")
"etektor > :otodioda array memungkinkan pengumpulan data absorbansi >
di banyak panjang gelombang secara bersamaan dan dengan demikian memungkinkan
penilaian kemurnian puncak. Kotoran dasar dapat dengan mudah dideteksi dengan
membandingkan spektra > pada titik waktu yang berbeda di puncak. "0" paling
modern didukung dengan pustaka yang mengandung spektrum > senyawa yang
dilaporkan sebelumnya. Operasi perangkat lunak ini memiliki detektor dengan
kemampuan untuk turunan pustaka spektral dan mencari dan dengan demikian
memungkinkan identifikasi cepat senyawa yang dikenal %4$).
.6.(.4.;>03O/0T>; 29T-!0TT;/*9 ";T;TO/ %;2!")
;2!" telah dikembangkan untuk melengkapi deteksi > senyawa dengan daya
absorbansi yang lemah. "i ;2!", efluen 32 nebuli@ed dan kemudian menguap
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 35/38
dalam tabung melayang yang dipanaskan, yang menghasilkan embun partikel analit
yang melewati seberkas cahaya. 3artikel analit menghamburkan cahaya dan
menghasilkan sinyal %(4). Berbeda dengan detektor >, koefisien kehilangan analit
tidak berpengaruh pada respon ;2!". "engan demikian, ;2!" sekarang merupakan
metode deteksi konsentrasi pilihan untuk 2. Ketika ;2!" terhubung ke 32
preparatif, efluen dari kolom dibagi dan hanya sebagian kecil diarahkan ke detektor.
.6.(.6.2-5! "0* 2-5!-5!
2-5! adalah alat yang paling banyak diterapkan untuk dereplikasi bahan alami
%lihat bab. + dan &4) %(6,((). al ini terutama karena berat molekul nominal dapat
digunakan sebagai permintaan pencarian di hampir semua database. 5enggunakan 2-
5!-5!, ion molekul tertentu dipisahkan dan mengalami putaran kedua pada
fragmentasi. 3ola fragmentasi yang dihasilkan dapat memberikan banyak informasi
tentang struktur induk. Teknik ini cocok untuk identifikasi fragmen dari molekul yang
terbentuk dari beberapa unit individu seperti peptida, depsipeptida, oligosakarida, dan
saponin %&6).
.6.(.(.2-*5/
Kemajuan terbaru dalam spektroskopi *5/ telah memungkinkan rangkaian
langsung dengan sistem 32 %lihat Bab. +). 3enggunaan medan magnet yang tinggi
%#$$ 5@ atau lebih besar), !el aliran volume kapiler mikroliter, dan sistem pemrosesan
sinyal digital telah secara dramatis meningkatkan sensitivitas untuk melacak jumlah
analit. !elain itu, desain pemeriksaan baru telah memfasilitasi efisiensi dan spesifikasi
penekanan sinyal *5/ pelarut 32. Bagaimanapun, teknik ini masih lambat dan
sangat mahal. 2-*5/ sangat berguna dalam kasus dimana data dari 2-5! tidak
memungkinkan identifikasi senyawa pasti %misalnya, isomer yang memiliki berat
molekul yang sama). Teknik ini telah berhasil diterapkan pada identifikasi alkaloid
aaptamine dalam ekstrak spons laut Aaptos spesies %(#). 3enggunaan 32-*5/-5!,
diomana sistem pemisahan digabungkan dengan kedua *5/ dan 5!, juga telah
dilaporkan %(?).
I/' >istas baru 3ada Teknologi 3emisahan
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 36/38
1alaupun perbedaan tinggi, produk alami telah hadir dari program penelitian dari
berbagai perusahaan farmasi. al ini terutama karena dari penggunaan waktu tradisional
dan intensif biaya isolasi dan prosedur identifikasi, dan kurangnya ketersediaan produk
alami dalam format yang sesuai untuk teknologi T! modern. 0kibatnya, integrasi
ekstrak mentah produk alami dalam sistem T! menjadi sulit. al ini terutama karena
ada kemungkinan positif palsu yang tinggi dan senyawa bioaktif berulang diketahui dan
pekerjaan membosankan yang diperlukan untuk identifikasi hit. Baru-baru ini, metode
telah dijelaskan untuk persiapan produk alami yang besar dan beragam dioptimalkan
untuk T! %(8). !alah satu metode bergantung pada menghasilkan sebuah pustaka besar
dari fraksi yang dimurnikan setengah. Keuntungan dari metode ini antara lain yaitu
peningkatan keandalan hasil pengujian biologis dan penurunan yang tajam dalam beban
kerja berikutnya untuk identifikasi hit dan dereplication. !trategi lain tergantung pada
persiapan pustaka senyawa alami murni. 5eskipun jenis pustaka ini menawarkan
kehandalan yang paling tinggi dalam pengujian biologis, jumlah besar pekerjaan yang
dibutuhkan untuk persiapan sampel masih sangat kekurangan. Kedua pustaka
bergantung pada ketersediaan teknik fraksinasi yang cepat dan otomatis. Baru-baru ini,
!epiatec 9mb %Berlin, 7erman) bekerjasama dengan 0ventis 3harma "eutschland
9mb %:rankfurt, 7erman) telah merancang sistem untuk meningkatkan produktivitas
persiapan sampel untuk T!. !ebuah deskripsi singkat dari dua contoh representatif
sistem ini diberikan di sini.
>.&. Q 32 3aralel
!istem ini %9br. 8), yang dapat berjalan tanpa pengawasan untuk 4( jam dalam
sehari, mampu secara bersamaan menggunakan delapan fraksinasi campuran ekstrak
kompleks dengan sistem pompa gradien tunggal bertekanan tinggi, multi-channel %>,
"0", atau ;2!") detektor, dan perangkat lunak ahli. !ampel dipisahkan oleh sebuah
array dari kolom 32, menyediakan satu buah kolom untuk setiap sampel. 3erludicatat bahwa suntikan cairan dari sampel dengan berbagai polaritas yang luas adalah
pekerjaan yang menantang. "imethyl sulfo=ide %"5!O) benar-benar melarutkan
sebagian sampel untuk injeksi, tetapi juga dapat mengganggu pemisahan kromatografi
berikutnya. 5odul injeksi !3; on-line %4?) memecahkan kesulitan ini. "engan
menggunakan autosampler, sampel dilarutkan dalam "5!O yang disuntikkan kedalam
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 37/38
modul, dan air atau buffer secara bersamaan dipompa sebelum inlet ke kolom !3; %().
Karena peningkatan cepat ini dalam polaritas gradien, komponen ekstrak tetap
teradsorbsi ke kolom !3; dan "5!O H air dibuang. !elanjutnya, pelarut organik yang
sesuai menyuntikkan ekstrak ke kolom pemisahan.
9ambar. 8. garis !kema pipa dari Q perangkat 32 3aralel. 9ambar
direproduksi dengan i@in dari 3erusahaan Brosur !epiatec.
;lusi fraksi menjadi on-line dan pemeriksaan otomatis sebelum pengumpulan.
5ereka terabsorbsi lagi ke kolom !3; menggunakan prinsip yang sama seperti modul
injeksi sampel yang telah dijelaskan sebelumnya. !3; teradsorpsi fraksi yang memerah
dengan air dan kemudian dielusi dengan pelarut organik murni ke dalam +?-piring baik.
!istem ini mampu memisahkan lebih dari &$$ ekstrak produk alami perhari menjadi
beberapa ribu air dan fraksi penyangga bebas. Kualitas dan kemurnian fraksi yang
diperoleh sesuai dengan tuntutan T!.
>.4. !epbo=P< 3engaturan 32-!3;-32-!3;
!istem ini %9br. ) didasarkan pada kombinasi 32 dan !3;. "alam pengaturan
32-!3;-32-!3; ini, polaritas eluen meningkat dengan penambahan air yang
sedemikian rupa sehingga fraksi dielusi dari kolom pemisahan yang teradsorpsi ke
kolom perangkap . /ute fraksi terperangkap kemudian melewati pemisahan kolom
dimana pemisahan akhir selesai. !etiap komponen yang dielusi teradsorpsi ke kolom
7/23/2019 Isolasi Bahan Alam Laut
http://slidepdf.com/reader/full/isolasi-bahan-alam-laut 38/38
perangkap , terpisah dari buffer, dan memerah pada pengumpul fraksi. !istem ini jauh
lebih cocok untuk menghasilkan sebuah pustaka senyawa yang hampir murni.
9ambar. . garis !kema pipa dari sepbo=P. 9ambar direproduksi dengan
i@in dari 3erusahaan Brosur !epiatec.