IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri •...
Transcript of IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri •...
![Page 1: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/1.jpg)
IFA TESTLERİNDE KALİTEVE GÜVENİLİRLİK
IFA TESTLERİNDE KALİTEVE GÜVENİLİRLİK
Dr. Derya MutluAkdeniz Üniversitesi Tıp FakültesiTıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı
1. Ulusal Klinik Mikrobiyoloji Kongresi, Antalya, 2011
![Page 2: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/2.jpg)
IFA: İndirek floresan antikor testleri
• Oto antikor saptanmasında en sık kullanılanyöntem
• Kullanılan hücre hatlarında 100’den fazla farklıproteinin ekspresyonu
• Floresan mikroskobun sık ihtiyaç duyulan teknikbakımları
• Floresan ile çalışmanın zorlukları
• Oto antikor saptanmasında en sık kullanılanyöntem
• Kullanılan hücre hatlarında 100’den fazla farklıproteinin ekspresyonu
• Floresan mikroskobun sık ihtiyaç duyulan teknikbakımları
• Floresan ile çalışmanın zorlukları
• Otoantikorların adlandırılmalarında ortak bir dil oluşması• Sonuçların güvenilirliğini etkilenmesi
![Page 3: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/3.jpg)
Testin çalışılacağı kitin belirlenmesi
Testin çalışılması
Lamların mikroskopta değerlendirilmesi
Sonucun klinisyene raporlanması
![Page 4: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/4.jpg)
Sunum ana başlıkları
• Teknik sorunlar• Substrat seçimi• Raporlama: Kaba granüler, ince granüler, ...• Raporlama: hastalıkla ilişkisi kanıtlanmamış otoantikorlar• Raporlama: +, ++, +++, ++++ Veya 1/100 – 1/320,
1/1000• IFA testleri ve ELISA – Immunblot testlerinin birlikte
kullanımı
• Teknik sorunlar• Substrat seçimi• Raporlama: Kaba granüler, ince granüler, ...• Raporlama: hastalıkla ilişkisi kanıtlanmamış otoantikorlar• Raporlama: +, ++, +++, ++++ Veya 1/100 – 1/320,
1/1000• IFA testleri ve ELISA – Immunblot testlerinin birlikte
kullanımı
![Page 5: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/5.jpg)
Sonuçların güvenilirliğinietkileyebilecek teknik sorunlar
• Lamba (foton kaynağı)kullanım süresi (100-200 saat) sonundadeğiştirilmeli.
• Foton kaynağı doğruolarak konumlanmalı
• Doğru eksitasyon veemisyon filtreleriseçilmeli.
• Lamba (foton kaynağı)kullanım süresi (100-200 saat) sonundadeğiştirilmeli.
• Foton kaynağı doğruolarak konumlanmalı
• Doğru eksitasyon veemisyon filtreleriseçilmeli.
![Page 6: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/6.jpg)
Foton kaynağı doğru olarakkonumlanmalı
1
2-3
4
![Page 7: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/7.jpg)
Civalı lamba
• Geniş spektrumdafotonlar oluşturur.
• Her floresanmaddenineksitasyonu için belliaralıkta fotonlargerekli
• Geniş spektrumdafotonlar oluşturur.
• Her floresanmaddenineksitasyonu için belliaralıkta fotonlargerekli
![Page 8: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/8.jpg)
Eksitasyon ve emisyon filtrelerininseçimi
![Page 9: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/9.jpg)
LED MİKROSKOPLAR
• LED: Light emmision diode• Etkin; Watt başına daha çok ışık• Filtresiz kullanabilme özelliği• Küçük boyut• Mikrosaniyeden kısa açılma zamanı• Isınma sorunu yok• Uzun ömürlü• Odaklama kolay
• LED: Light emmision diode• Etkin; Watt başına daha çok ışık• Filtresiz kullanabilme özelliği• Küçük boyut• Mikrosaniyeden kısa açılma zamanı• Isınma sorunu yok• Uzun ömürlü• Odaklama kolay
![Page 10: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/10.jpg)
LED MİKROSKOPLAR
![Page 11: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/11.jpg)
Sonuçların doğruluğunun kontrolü
• Üretici firmanın önerileridoğrultusunda çalışmak
• Her çalışmada pozitif venegatif kontroller vepozitif hasta örneği
• Dış kalite kontrolprogramına dahil olmak(Euroimmun, yılda 2 kezörnek gönderimi)
• Üretici firmanın önerileridoğrultusunda çalışmak
• Her çalışmada pozitif venegatif kontroller vepozitif hasta örneği
• Dış kalite kontrolprogramına dahil olmak(Euroimmun, yılda 2 kezörnek gönderimi)
![Page 12: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/13.jpg)
![Page 14: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/14.jpg)
Substrat seçiminde dikkatedilmesi gerekenler; ANA
• İlk kez kullanılan: sıçan karaciğeri1• HEp2 epitelyal hücre hattı
– Duyarlılık– Standardizasyon sağlandı.– HEp2 epitelyal hücre hattı özellikleri:
• yüksek çekirdek / sitoplazma oranı• büyük çekirdekçikler• yüksek mitotik aktivitesi ile mitoz sırasında eksprese olan
antijenlere yönelik otoantikorların saptanması (Anti-sentrozomal antikorlar, iğsi cisim kutbu [spindle pole]antikorları, iğsi cisim iplikleri [spindle fibre] antikorları, ortacisim [mid-body] antikorları, anti-CENP-F proteini antikorları)
• HEp-20-10 hücre hattı: mitotik aktivitesi HEp2hücrelerine kıyasla 10 kat daha fazla
• İlk kez kullanılan: sıçan karaciğeri1• HEp2 epitelyal hücre hattı
– Duyarlılık– Standardizasyon sağlandı.– HEp2 epitelyal hücre hattı özellikleri:
• yüksek çekirdek / sitoplazma oranı• büyük çekirdekçikler• yüksek mitotik aktivitesi ile mitoz sırasında eksprese olan
antijenlere yönelik otoantikorların saptanması (Anti-sentrozomal antikorlar, iğsi cisim kutbu [spindle pole]antikorları, iğsi cisim iplikleri [spindle fibre] antikorları, ortacisim [mid-body] antikorları, anti-CENP-F proteini antikorları)
• HEp-20-10 hücre hattı: mitotik aktivitesi HEp2hücrelerine kıyasla 10 kat daha fazla
1 Holbrow EJ et al. Br Med J. 1957; 2 : 732-4.
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 15: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/15.jpg)
ANA: Hep2 veya Hep 20-10
Akdeniz Üniversitesi arşivi
Hep 20-10 Hep 2
![Page 16: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/16.jpg)
Substrat seçiminde dikkatedilmesi gerekenler; ANCA
• Otoantikorlar oluşabilecek nötrofilsitoplazmik proteinleri
•MPO
•Elastaz
•Laktoferrin
•Lizozim
•Katepsin G
•Beta glukoronidaz
•Azurosidin
•Alfa enolaz
•Defensin
pANCA
• proteinaz 3• bakterisidalpermeabilite arttırıcıprotein (BPI)
cANCA
•MPO
•Elastaz
•Laktoferrin
•Lizozim
•Katepsin G
•Beta glukoronidaz
•Azurosidin
•Alfa enolaz
•Defensin
pANCA
![Page 17: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/17.jpg)
ANCA
ANCA
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 18: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/18.jpg)
ANCA pozitifliği tanımlama algoritması
Etanol ile fikse nötrofillerdecANCA +
Anti-PR3 + Anti-PR3 -
Etanol ile fikse nötrofillerdepANCA +
Formalin ilefikse
nötrofillerdecANCA +
Formalin ilefikse
nötrofillerdeANCA -
Anti BPI+
Anti-Elastaz, Anti- Laktoferrin, Anti- Lizozim, Anti-Katepsin G, Anti- Beta glukoronidaz, Anti-Azurosidin, Anti- Alfa enolaz , Anti- Defensin
Formalin ilefikse
nötrofillerdecANCA +
Formalin ilefikse
nötrofillerdeANCA -
Anti-MPO + Anti-MPO -
![Page 19: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/19.jpg)
Anti-nükleer antikorlarınsınıflandırılması
Alt tipler raporlanmalı mı1. Nükleer membrana yönelik otoantikorlar2. Nükleoplazmaya yönelik otoantikorlar3. Çekirdekçiğe (nucleolus) yönelik
otoantikorlar4. Mitotik hücrelere özgü otoantikorlar5. Sitoplazmaya yönelik otoantikorlar
1. Nükleer membrana yönelik otoantikorlar2. Nükleoplazmaya yönelik otoantikorlar3. Çekirdekçiğe (nucleolus) yönelik
otoantikorlar4. Mitotik hücrelere özgü otoantikorlar5. Sitoplazmaya yönelik otoantikorlar
![Page 20: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/20.jpg)
Hücre siklusu aşamaları
• İnterfaz
• Profaz
• Metafaz
• Anafaz
• Telofaz
• İnterfaz
• Profaz
• Metafaz
• Anafaz
• Telofaz
![Page 21: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/21.jpg)
Nükleer membrana yönelikotoantikorlar
Akdeniz Üniversitesi arşivi
Düzgün nükleer membranantikorları
Noktalı nükleer membranantikorları
Wiik AS et al. J. Autoimmun. 2010; 35: 276-90
![Page 22: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/22.jpg)
Nükleer membrana yönelikotoantikorlar
Akdeniz Üniversitesi arşivi
Nükleer membran antikorları,primat karaciğeri görüntüsü
![Page 23: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/23.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
• Homojen nükleoplazmik patern• Büyük granüler nükleoplazmik patern• Kaba granüler nükleoplazmik patern• İnce granüler nükleoplazmik patern• İnce taneli (fine grainy) scl-70 benzeri patern• Pleomorfik nükleer patern• Sentromerik patern• Çoklu nükleer nokta paterni• Az nükleer nokta paterni
• Homojen nükleoplazmik patern• Büyük granüler nükleoplazmik patern• Kaba granüler nükleoplazmik patern• İnce granüler nükleoplazmik patern• İnce taneli (fine grainy) scl-70 benzeri patern• Pleomorfik nükleer patern• Sentromerik patern• Çoklu nükleer nokta paterni• Az nükleer nokta paterni
![Page 24: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/24.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Homojen nükleoplazmik patern
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 25: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/25.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Büyük granüler nükleoplazmik patern
Wiik AS et al. J. Autoimmun. 2010; 35: 276-90
![Page 26: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/26.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Kaba granüler nükleoplazmikpatern
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 27: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/27.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
İnce granüler nükleoplazmikpatern
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 28: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/28.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
İnce granüler scl-70 benzeri patern
Wiik AS et al. J. Autoimmun. 2010; 35: 276-90
![Page 29: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/29.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Pleomorfik nükleer patern
Wiik AS et al. J. Autoimmun. 2010; 35: 276-90
![Page 30: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/30.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Sentromerik patern
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 31: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/31.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Çoklu nükleer nokta paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 32: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/32.jpg)
Nükleoplazma ile ilişkiliotoantikorlar
Az nükleer nokta paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 33: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/33.jpg)
Çekirdekçikle ilişkili otoantikorlar
• Homojen çekirdekçik paterni• Dağınık (clumpy) çekirdekçik paterni• Noktalı çekirdekçik paterni
![Page 34: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/34.jpg)
Çekirdekçikle ilişkili otoantikorlar
Homojen çekirdekçik paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 35: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/35.jpg)
Çekirdekçikle ilişkili otoantikorlar
Dağınık çekirdekçik paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 36: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/36.jpg)
Çekirdekçikle ilişkili otoantikorlar
Noktalı çekirdekçik paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 37: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/37.jpg)
Mitotik hücrelerle ilişkiliotoantikorlar
• Sentrozomal (sentriol) patern• İğsi cisim kutbu (spindle pole) paterni• İğsi cisim iplikleri (Spindle fibre) paterni• Orta cisim (mid-body) paterni• CENP-F paterni
• Sentrozomal (sentriol) patern• İğsi cisim kutbu (spindle pole) paterni• İğsi cisim iplikleri (Spindle fibre) paterni• Orta cisim (mid-body) paterni• CENP-F paterni
![Page 38: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/38.jpg)
Mitotik iğsi cisimle ilişkiliotoantikorlar
Sentrozomal (sentriol) patern
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 39: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/39.jpg)
Mitotik iğsi cisimle ilişkiliotoantikorlar
İğsi cisim kutbu (spindle pole)paterni
Wiik AS et al. J. Autoimmun. 2010; 35: 276-90
![Page 40: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/40.jpg)
Mitotik iğsi cisimle ilişkiliotoantikorlar
İğsi cisim iplikleri (Spindle fibre)paterni
Wiik AS et al. J. Autoimmun. 2010; 35: 276-90
![Page 41: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/41.jpg)
Mitotik iğsi cisimle ilişkiliotoantikorlar
Orta cisim (mid-body) paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 42: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/42.jpg)
Mitotik iğsi cisimle ilişkiliotoantikorlar
CENP-F proteini paterni
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 43: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/43.jpg)
ANA’da otomatize otoantikortayini
• Pozitif negatif ayrımı %92• Doğru paternin tanımlanması %90• Yanlış değerlendirmeler karışık
paternlerde ve sitoplazmik boyanmalarda
• Pozitif negatif ayrımı %92• Doğru paternin tanımlanması %90• Yanlış değerlendirmeler karışık
paternlerde ve sitoplazmik boyanmalarda
Egerer et al. Arthritis Research & Therapy 2010; 12: 1-9
![Page 44: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/44.jpg)
AMA Anti-mitokondrial antikor
• Substrat: Sıçan böbreği• Proksimal ve distal
tübüllerin tamamındasitoplazmik boyanma
• Tarama dilüsyonu1/100
• Substrat: Sıçan böbreği• Proksimal ve distal
tübüllerin tamamındasitoplazmik boyanma
• Tarama dilüsyonu1/100
![Page 45: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/45.jpg)
Anti-LKM (Liver KidneyMicrosomal antibody)
• Substrat: Sıçan böbreğive karaciğeri
• Sadece Proksimaltübüllerde vehepatositlerde(tübüllere kıyasla dahaparlak) boyanma
• Tarama dilüsyonu1/100
• Substrat: Sıçan böbreğive karaciğeri
• Sadece Proksimaltübüllerde vehepatositlerde(tübüllere kıyasla dahaparlak) boyanma
• Tarama dilüsyonu1/100
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 46: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/46.jpg)
ASMA (Anti Düz Kas Antikoru)
• Substrat: Sıçan midesi• Tunica muscularis,
Lamina muscularismucosa veinterglanduler fibrillerdeboyanma
• Tarama dilüsyonu1/100
• Substrat: Sıçan midesi• Tunica muscularis,
Lamina muscularismucosa veinterglanduler fibrillerdeboyanma
• Tarama dilüsyonu1/100
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 47: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/47.jpg)
Anti-dsDNA Antikoru
• Substrat: Crithidialuciliae
• Kinetoplastta boyanma• Tarama dilüsyonu 1/10
• Substrat: Crithidialuciliae
• Kinetoplastta boyanma• Tarama dilüsyonu 1/10
Akdeniz Üniversitesi arşivi
Akdeniz Üniversitesi arşivi
![Page 48: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/48.jpg)
Klinikle ilişkisiz otoantikorlar raporedilmeli midir?
• Otoimmün hastalıklar dışındakihastalıklarla ilişkili otoantikorlar– Anti-CENP-F antikorları: Akciğer ve göğüs
kanseri• Hastalıklarla ilişkilendirilmeyen
otoantikorlar• Anti-sentriol antikorları• Anti-vimentin antikorları• Anti-lizozomal antikorlar
• Otoimmün hastalıklar dışındakihastalıklarla ilişkili otoantikorlar– Anti-CENP-F antikorları: Akciğer ve göğüs
kanseri• Hastalıklarla ilişkilendirilmeyen
otoantikorlar• Anti-sentriol antikorları• Anti-vimentin antikorları• Anti-lizozomal antikorlar
![Page 49: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/49.jpg)
Klinikle ilişkisiz otoantikorlar raporedilmeli midir?
• Hastalıklarla ilişkilendirilmeyenotoantikorlar: laboratuvar arşivindesonuçları sakla, klinisyene bildirme
• Otoimmün hastalıklar dışındakihastalıklarla ilişkili otoantikorlar:klinisyenebildir.
• Hastalıklarla ilişkilendirilmeyenotoantikorlar: laboratuvar arşivindesonuçları sakla, klinisyene bildirme
• Otoimmün hastalıklar dışındakihastalıklarla ilişkili otoantikorlar:klinisyenebildir.
![Page 50: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/50.jpg)
Pozitif sonuçların bildirimi• Başlangıç serum dilüsyonu:
– 1/40: Yanlış pozitif sonuçlar (%30)*– Optimal dilüsyon:1/100,– yüksek titrede otoantikorlar → otoimmun bağ doku
hastalığının olma olasılığı• Dilüsyonla sonuçların raporlanması
– Özgüllük– Bileşik paternlerin tanımlanması– Sonuç verme süresi– Maliyet
• +, ++, +++, ++++ olarak sonuçların raporlanması
• Başlangıç serum dilüsyonu:– 1/40: Yanlış pozitif sonuçlar (%30)*– Optimal dilüsyon:1/100,– yüksek titrede otoantikorlar → otoimmun bağ doku
hastalığının olma olasılığı• Dilüsyonla sonuçların raporlanması
– Özgüllük– Bileşik paternlerin tanımlanması– Sonuç verme süresi– Maliyet
• +, ++, +++, ++++ olarak sonuçların raporlanması
*Egner W. J Clin Pathol. 2000;53:424
![Page 51: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/51.jpg)
IFA testi diğer otoantikor testleri (ELİSA,ımmunblot ) ile birlikte kullanımı
• IFA ANA testi: tarama testi• Pozitif sonuçlar diğer yöntemlerle mutlaka
doğrulanmalıdırlar.• Doğrulama yöntemlerinden en sık kullanılanları
ve ticari kitleri kullanımda bulunanları– ELISA– İmmunblot:
• yaklaşık 15 farklı proteine yönelikotoantikorlar
• maliteyler ELISA’dan 5-6 kat fazla
• IFA ANA testi: tarama testi• Pozitif sonuçlar diğer yöntemlerle mutlaka
doğrulanmalıdırlar.• Doğrulama yöntemlerinden en sık kullanılanları
ve ticari kitleri kullanımda bulunanları– ELISA– İmmunblot:
• yaklaşık 15 farklı proteine yönelikotoantikorlar
• maliteyler ELISA’dan 5-6 kat fazla
*Fritzler MJ, et al. J Clin Lab Anal 1995;9:2218–24.
![Page 52: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/52.jpg)
IFA testi diğer otoantikor testleri (ELİSA,ımmunblot ) ile birlikte kullanımı
• IFA ANA yöntemi ile saptanan paternioluşturabilecek birkaç otoantikorundoğrulanması amaçlı ELISA yöntemlerininuygulanması
• IFA ANA - , klinik süphenin çok güçlü, IFAANA negatif, doğrulama testlerini uygula.(SS-A/Ro antijeni)*.
• IFA ANA +, immunblot -. IFA yönteminde25’den fazla paterne neden olacakotoantikorların saptanabiliyor.
• IFA ANA yöntemi ile saptanan paternioluşturabilecek birkaç otoantikorundoğrulanması amaçlı ELISA yöntemlerininuygulanması
• IFA ANA - , klinik süphenin çok güçlü, IFAANA negatif, doğrulama testlerini uygula.(SS-A/Ro antijeni)*.
• IFA ANA +, immunblot -. IFA yönteminde25’den fazla paterne neden olacakotoantikorların saptanabiliyor.
*Fritzler MJ, et al. J Clin Lab Anal 1995;9:2218–24.
![Page 53: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/53.jpg)
Özet• Kitlerin satın alınması aşamasında gerekli
özenin gösterilmesi,• Hasta örneklerinin çalışılması aşamasında
üretici firmanın önerilerine sadık kalınması,• Dış kalite kontrol programına üye olunması,
Karşılaşılan paternlerin mümkün olduğuncaayrıntılı tanımlanması
• IFA ANA testlerinin diğer otoantikor saptamayöntemleri ile uygun kullanımları,
• n doğru sonuçların klinisyenlere ulaştırılmasınısağlayacaktır.
• Kitlerin satın alınması aşamasında gerekliözenin gösterilmesi,
• Hasta örneklerinin çalışılması aşamasındaüretici firmanın önerilerine sadık kalınması,
• Dış kalite kontrol programına üye olunması,Karşılaşılan paternlerin mümkün olduğuncaayrıntılı tanımlanması
• IFA ANA testlerinin diğer otoantikor saptamayöntemleri ile uygun kullanımları,
• n doğru sonuçların klinisyenlere ulaştırılmasınısağlayacaktır.
![Page 54: IFA TESTLERİNDE KALİTE VE GÜVENİLİRLİK - … · IFA: İndirek floresan antikor testleri • Oto antikor saptanmasında en sık kullanılan yöntem • Kullanılan hücre hatlarında](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022021619/5bae853e09d3f253098d550b/html5/thumbnails/54.jpg)