MARTA ROCCHIMARTA ROCCHIEspecialista en BacteriologEspecialista en Bacteriologíía a --UNC UNC Hospital Nacional de ClHospital Nacional de Clíínicas nicas -- UNCUNC

rocchimarta@gmail.comrocchimarta@gmail.com

IDENTIFICACION DE BNF IDENTIFICACION DE BNF

MAS FRECUENTESMAS FRECUENTES

…… un continuo un continuo desafdesafííoo……

ampliamente ampliamente distribudistribuíídosdos en el ambienteen el ambientesobreviven en el ambiente hospitalariosobreviven en el ambiente hospitalariohay especies hay especies multirresistentesmultirresistenteshay especies hay especies psicrpsicróófilasfilas →→ bancos de sangrebancos de sangrepacientes hospitalizados con tratamiento pacientes hospitalizados con tratamiento

antibiantibióótico pueden colonizarsetico pueden colonizarse

QuQuéé sabemos de los BNF???sabemos de los BNF???

BurkholderiaBurkholderia pseudomalleipseudomalleiBurkholderiaBurkholderia malleimalleiBordetellaBordetella pertussispertussis -- B. B. parapertussisparapertussisBrucellaBrucella

PseudomonasPseudomonas aeruginosaaeruginosaAcinetobacterAcinetobacter baumanniibaumanniiStenotrophomonasStenotrophomonas maltophiliamaltophiliaComplejoComplejo BurkholderiaBurkholderia cepaciacepaciaAchromobacterAchromobacter xylosoxidansxylosoxidans

PatPatóógenos obligadosgenos obligados

PatPatóógenos oportunistasgenos oportunistas

son oportunistasson oportunistas

de baja virulenciade baja virulencia

se presentan en cultivos mixtosse presentan en cultivos mixtos

generalmente generalmente ……

es difes difíícil determinar cucil determinar cuáándo realizar ndo realizar pruebas de identificacipruebas de identificacióón y de n y de

susceptibilidadsusceptibilidad

segsegúún la n la significanciasignificancia clclíínicanica

cuando se lo recupera de un sitio cuando se lo recupera de un sitio normalmente estnormalmente estéérilril

CuCuáándo identificamos un BNF?ndo identificamos un BNF?

YY……hay ghay gééneros que sneros que síí

por lo general no es sencillopor lo general no es sencillo

se requiere de se requiere de ““pacienciapaciencia”…”…

si llegamos a si llegamos a ggééneronero…… AleluiaAleluia!! !!

Es fEs fáácil llegar a identificar cil llegar a identificar a nivel de especie?a nivel de especie?

CCóómo mo sospechamos unsospechamos un

BNF en el BNF en el laboratoriolaboratorio

desarrolla pobremente a las 24 desarrolla pobremente a las 24 hshsen en agaragar sangre o sangre o triptosatriptosa sojasoja

bacilo o bacilo o cocobacilococobacilo gramgram negativonegativo

alcaliniza el pico del TSI y no alcaliniza el pico del TSI y no produce cambios en el fondoproduce cambios en el fondo

Pico alcalinoPico alcalino

Fondo neutroFondo neutro

TSITSI

primero debemos tener en primero debemos tener en cuentacuenta……

morfologmorfologíía de las colonias: tamaa de las colonias: tamañño, bordes, o, bordes, consistencia, aspectoconsistencia, aspecto

presencia de pigmentopresencia de pigmentoel olor: frutal el olor: frutal ((PseudomonasPseudomonas aeruginosaaeruginosa, ,

AlcaligenesAlcaligenes faecalisfaecalis , , MyroidesMyroides, , EmpedobacterEmpedobacter brevisbrevis, ,

ChryseobacteriumChryseobacterium gleumgleum--indologenesindologenes)),,

amoniacal amoniacal StenotrophomonasStenotrophomonas maltophiliamaltophilia,,,, etcetc

……unauna vez seleccionada la colonia, vez seleccionada la colonia, hacemos el hacemos el ““GRAMGRAM””

Es fundamental y Es fundamental y orientativoorientativo ver la ver la MORFOLOGIA de la bacteria en cuestiMORFOLOGIA de la bacteria en cuestióónn

… cocoide??

……unun cocobacilococobacilo????Es un bacilo??Es un bacilo??

PseudomonasPseudomonas fluorescentesfluorescentesAcinetobacterAcinetobacter baumanniibaumanniiComplejoComplejo BurkholderiaBurkholderia cepaciacepaciaStenotrophomonasStenotrophomonas maltophiliamaltophiliaAlcaligenesAlcaligenes faecalisfaecalis ((exex A.odoransA.odorans))AchromobacterAchromobacter xylososoxidansxylososoxidans

ElizabethkingiaElizabethkingia meningosepticameningosepticaMyroidesMyroidesChryseobacteriumChryseobacterium gleumgleum--indologenesindologenes

Veamos pues cVeamos pues cóómo identificar:mo identificar:

Las pruebas CLAVE para iniciar la Las pruebas CLAVE para iniciar la identificaciidentificacióón son:n son:

OXIDASAOXIDASA(+)(+) ((--)) ((--))(+)(+)

MOVILIDADMOVILIDAD

(+)(+)((--))

OXIDASA

MovilidadMovilidad+

GRUPO GRUPO AA GRUPO GRUPO CC GRUPO GRUPO DD

MovilidadMovilidad-

+ +GRUPO GRUPO BB

- -

ARBITRARIAMENTEARBITRARIAMENTE……

GRUPO GRUPO AAGénero Pseudomonas

Pseudomonas aeruginosaP.fluorescens - P.putidaP.veronii - P.monteiliiP.mosseilii - P.stutzeriP.stuzeri like (CDC grupo Vb3)P.mendocina-P.alcaligenesP.pseudoalcaligenes

AchromobacterAlcaligenes faecalisRhizobium- BalneatrixShewanellaMethylobacteriumRoseomonasOchrobactrumSphingomonasAgrobacteriumOligella - BordetellaCDC grupo I; WO-1; O-1; O-2; O-3; OFBA-1

Ex PseudomonasBurkholderia-Ralstonia-Cupriavidus-PandoraeaComamonas (Delftia)Acidovorax-Brevundimonas

OXIDASA

MovilidadMovilidad+

GRUPO GRUPO AA+

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

P. P. aeruginosaaeruginosaP. P. fluorescensfluorescensP. P. putidaputida

P. P. veroniiveroniiP. P. monteiliimonteiliiP. P. mosseiliimosseilii

pioverdinapioverdinaGrupo Grupo fluorescentefluorescente

KingKing BB FLNFLN

ADH +ADH +4242ººCC 44ººCC Gel Gel

•• P. P. aeruginosaaeruginosa ++ -- +/+/--

•• P. P. fluorescensfluorescens -- + + ++

•• P. P. putidaputida -- -- --

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

TestigoTestigo ADH ADH ++

ENTEROBACTERIA BNF

TestigoTestigoTestigoTestigoADH +ADH + ADH +ADH +

ARGININA DEHIDROLASA

OXIDASA

MovilidadMovilidad+

GRUPO GRUPO AA+

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

Pruebas Pruebas marcadoras marcadoras fenotfenotíípicas picas

Pruebas marcadoras fenotPruebas marcadoras fenotíípicas mpicas míínimasnimas

Acido de lactosa

Resistencia al colistín

Decarboxilación de Lisina

Hidrólisis de la Acetamida

Denitrificación

Pigmento

Acido de glucosa

Hidrólisis de la Arginina

GRUPO GRUPO AA

Acido de LACTOSA (FLN Acido de LACTOSA (FLN –– OF)OF)

BurkholderiaSphingomonas

RhizobiumAgrobacterium

Grupo O3 Ralstonia

Pseudomonas spp

Lisina Lisina decarboxilasadecarboxilasa

positivapositiva

ComplejoBurkholderia cepacia

GRUPO GRUPO AA

AcidoAcido

Resistencia al COLISTResistencia al COLISTÍÍNN

BurkholderiaRalstonia

Pandoraea

ComplejoB. cepacia

GRUPO GRUPO AA

LDC positivaLDC positiva

ACETAMIDA positivaACETAMIDA positivaGRUPO GRUPO AA

AchromobacterAchromobacterxylosoxidansxylosoxidans

-

XilosaXilosa ++ADHADH

ComplejoComplejoB. B. cepaciacepacia

LDC +LDC +Olor frutal y Olor frutal y

Gas NOGas NO--22

AlcaligenesAlcaligenesfaecalisfaecalis

P. P. aeruginosaaeruginosa

+

P. aeruginosa - Alcaligenes faecalisAchromobacter spp - B. cepacia (50%)

Bordetella - Delftia

+

DenitrificaciDenitrificacióónn

P. P. aeruginosaaeruginosa no fluorescenteno fluorescente

P.mendocinaP.mendocina -- P.stutzeriP.stutzeriP. P. stutzeristutzeri--likelike

(CDC (CDC grupoVb3grupoVb3))AchromobacterAchromobacter xylosoxidansxylosoxidansR.pickettiR.picketti--OchrobactrumOchrobactrumOligellaOligella--RhizobacteriumRhizobacteriumBurkholderiaBurkholderia pseudomalleipseudomallei

GRUPO GRUPO AA

P stutzeri

ADH ADH ––AlmidAlmidóón +n +

Maltosa +Maltosa +ManitolManitol ++

PIGMENTOPIGMENTOGRUPO GRUPO AA

PARDO/TOSTADOPARDO/TOSTADOP.stutzeriP.stutzeri

P P stutzeristutzeri--likelike (CDC (CDC grupoVb3grupoVb3))ShewanellaShewanella

NARANJANARANJAB. B. vesicularisvesicularis

AMARILLOAMARILLOB.vesicularisB.vesicularisP. mendocinaP. mendocinaSphingomonasSphingomonasAgrobacteriumAgrobacteriumBalneatrixBalneatrixAcidovoraxAcidovoraxGrupos CDCGrupos CDC

ROSADOROSADORoseomonasRoseomonas

MethylobacteriumMethylobacteriumAzospirillumAzospirillum

ARGININA ARGININA dehidrolasadehidrolasapositivapositiva

GRUPO GRUPO AA

PseudomonasPseudomonas grupo fluorescentegrupo fluorescenteP. mendocinaP. mendocinaP. P. stutzeristutzeri--likelike (CDC (CDC grupoVb3grupoVb3))P. P. luteolaluteolaOchrobactrumOchrobactrum anthropianthropiBurkholderiaBurkholderia pseudomalleipseudomalleiB. B. malleimalleiAcidovoraxAcidovorax facilisfacilis--delafieldiidelafieldii

ADH +ADH +

Acido de GLUCOSA negativa (OF)Acido de GLUCOSA negativa (OF)

Bordetella – Oligella – DelftiaAlcaligenes faecalis - Cupriavidus (ex R.paucula)

Roseomonas – Methylobacterium – ShewanellaA.xylosoxidans subsp denitrificans

Pseudomonas CDC grupo 1 - P.pseudoalcaligenes -

GRUPO GRUPO AA

BNF inactivos, inertes a los H de CBNF inactivos, inertes a los H de Csignificacisignificacióón cln clíínica dudosanica dudosaidentificaciidentificacióón fenotn fenotíípica dificultosapica dificultosa

Olor frutal y Olor frutal y Gas NOGas NO--

22

Alcaligenesfaecalis

OXIDASA

MovilidadMovilidad

GRUPO GRUPO AA+

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

Pruebas Pruebas marcadoras marcadoras fenotfenotíípicas picas

GRUPO GRUPO BB

-

+

ElizabethkingiaElizabethkingia meningosepticameningosepticaC. C. gleumgleum--indologenesindologenesEmpedobacterEmpedobacter brevisbrevisMyroidesMyroides sppsppSphingobacteriumSphingobacterium sppspp..PedobacterPedobacter sppsppSphingomonasSphingomonas paucimobilispaucimobilisOligellaOligella urethralisurethralisPsycrobacterPsycrobacter immobilisimmobilis ((glucgluc v)v)PsycrobacterPsycrobacter phenilpyruvicusphenilpyruvicusWeeksellaWeeksella virosavirosaBergeyellaBergeyella zoohelcumzoohelcum

NeisseriaNeisseria weaveriweaveriN. N. elongataelongata subspsubsp. . nitroreducensnitroreducensMoraxellaMoraxella sppsppParacoccusParacoccus yeeiyeei ((EOEO--2)2)

Bacilo Bacilo GilardiGilardi Grupo 1Grupo 1CDC grupo CDC grupo IIcIIc, , IIeIIe, , IIgIIg, , IIhIIh, , IIiIIiCDC grupo EOCDC grupo EO--3, EF3, EF--4b4bBrucellaBrucella sppsppAdvenellaAdvenella incenataincenataHaemabacterHaemabacterLanbacterLanbacterAlishewanellaAlishewanella

GRUPO GRUPO BB

Nuevos gNuevos gééneros neros ex Gex Gééneronero FlavobacteriumFlavobacteriumElizabethkingiaElizabethkingia F. F. meningosepticummeningosepticum

meningosepticameningoseptica

ChryseobacteriumChryseobacterium F. F. gleumgleumF. F. indologenesindologenesF. F. balustinumbalustinum -- CDC CDC llbllbF. F. indoltheticumindoltheticum

EmpedobacterEmpedobacter brevisbrevis F. breveF. breveMyroidesMyroides sppspp F. F. odoratumodoratumFlavobacteriumFlavobacterium sppspp F. F. aquatileaquatile y otras especiesy otras especies

no encontradas en no encontradas en muestras clmuestras clíínicasnicas

OXIDASA

MovilidadMovilidad

GRUPO GRUPO AA+

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

Pruebas Pruebas marcadoras marcadoras fenotfenotíípicas picas

GRUPO GRUPO BB

-

INDOL

+ -

+

GRUPO GRUPO BBINDOL +

GLUCOSAGLUCOSA +ESCULINAESCULINA +

DNAsaDNAsa ++ManitolManitol ++DNAsaDNAsa --

ManitolManitol --

Elizabethkingiameningoseptica

Chryseobacteriumgleum-indologenes

GRUPO GRUPO BBINDOL -

GLUCOSA GLUCOSA -

DNAsaDNAsa ++Urea +Urea +

NeisseriaNeisseria weaveriweaveri -- MyroidesMyroidesN. N. elongataelongata subspsubsp. . nitroreducensnitroreducensMoraxellaMoraxella sppspp--Bacilo Bacilo GilardiGilardi Grupo 1Grupo 1CDC grupo CDC grupo IIcIIc, , IIe,IIgIIe,IIg, , IIhIIh, , IIiIIi

MyroidesMyroides sppspp

OXIDASA

MovilidadMovilidad

GRUPO GRUPO AA+

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

Pruebas Pruebas marcadoras marcadoras fenotfenotíípicas picas

GRUPO GRUPO BB

-

INDOL

+ -

GRUPO GRUPO CC+

+MovilidadMovilidad

-

GRUPO GRUPO CC

StenotrophomonasStenotrophomonas maltophiliamaltophiliaComplejoComplejo BurkholderiaBurkholderia cepaciacepacia (14% (14% oxox -- ))BurkholderiaBurkholderia gladioligladioli (53% (53% oxox -- ))

PseudomonasPseudomonas luteolaluteola ((exex ChryseomonasChryseomonas))PseudomonasPseudomonas oryzihabitansoryzihabitans (ex(ex FlavimonasFlavimonas))BordetellaBordetella trematumtrematumSphingomonasSphingomonas paucimobilispaucimobilis (6% son (6% son oxox --))MassiliaMassilia timonaetimonae

GRUPO GRUPO CC

Lisina Lisina decarboxilasadecarboxilasa

positivapositiva++TestigoTestigo

DNAsaDNAsa+

-

Complejo Burkholderia cepacia

StenotrophomonasStenotrophomonasmaltophiliamaltophilia

OXIDASA

MovilidadMovilidad

GRUPO GRUPO AA+

Grupo Grupo fluorescentefluorescente

Pruebas Pruebas marcadoras marcadoras fenotfenotíípicas picas

GRUPO GRUPO BB

-

INDOL

+ -

GRUPO GRUPO CC

MovilidadMovilidad-

+GRUPO GRUPO DD

-

+

LDC

+

GRUPO GRUPO DD

AcinetobacterAcinetobacter sppspp..CDC grupo EOCDC grupo EO--55CDC grupo NOCDC grupo NO--11BordetellaBordetella holmessiholmessiBordetellaBordetella parapertussisparapertussisSphingomonasSphingomonas paucimobilispaucimobilis

(es m(es móóvil entre 18vil entre 18--2222ººC, no a 37C, no a 37ººCC))BrucellaBrucella caniscanis

morfología cocoidecocoide a cocobacilarcocobacilarNO NO reducen los NO3

- a NO2-32 genoespecies – 17 especies

AcinetobacterAcinetobacter sppspp..

Glucosa(+) no hemolGlucosa(+) no hemolíítico 44tico 44ººCC A.baumanniiA.baumannii

A A haemolyticushaemolyticusGlucosa(+) hemolGlucosa(+) hemolííticotico

A A lwoffiilwoffiiGlucosa (Glucosa (--) ) ……

REPASANDO Y REPASANDO Y CONCLUYENDOCONCLUYENDO……

MOVILIDAD MOVILIDAD Punto de partidaPunto de partiday OXIDASAy OXIDASA Elementales en la identificaciElementales en la identificacióón de BNFn de BNF

AROMA DEL CULTIVOAROMA DEL CULTIVO olor frutal, amoniacalolor frutal, amoniacal

CARACTERISTICASCARACTERISTICAS Pigmentos solubles e insolublesPigmentos solubles e insolublesCULTURALESCULTURALES Forma, borde. ConsistenciaForma, borde. Consistencia

PERFIL de RESISTENCIAPERFIL de RESISTENCIA PolimixinaPolimixina, AG,, AG,CarbapenemesCarbapenemes

API 20 NEAPI 20 NE RRáápido, de fpido, de fáácil manejocil manejo