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HnRNP A2/B1 在非小细胞肺癌（ NSCLC ）中的表达及其与 DNA 修复酶 MGMT 、 OGG1 、 APEX 、 DNA-

PKcs 和 Ku 之间作用关系的初步研究

石园 陈颖 侯英勇 季春华 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山

作者单位：复旦大学附属中山医院病理科 ( 石园 侯英勇 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山 ); 复旦大学附属肿瘤医院病理科 ( 陈颖 ); 上海市第五人民医院 ( 季春华 )

第一作者 : 石园

通讯作者：谭云山

研究背景• 肺癌的发病率和死亡率目前已经排在各种恶性肿瘤的第一

位，但其发病机制尚未阐明• 文献报道核不均一核糖核蛋白 A2/B1 （ hnRNP A2/B1 ）在

NSCLC 中表达上调。 hnRNP A2/B1 一种重要的 RNA 连接蛋白，负责基因转录后调控 , 由 hnRNP A2 和 hnRNP B1 组成 ，广泛低量存在于正常肺组织中，参与 RNA 的拼接、 Pre-mRNA 的成熟和降解 ， mRNA 由胞核到胞质的转运及转录后调节，细胞有丝分裂、成熟、分化及凋亡的调节

• 目前已知 DNA 修复酶 MGMT 、 APEX 、 OGG1 、 DNA-PKcs 和 Ku 在肺癌组织中的表达与正常肺组织有明显差别，均与肺癌的发生相关

• hnRNP A2/B1 是否对 DNA 修复酶转录后调控？

材料与方法• 免疫组织化学： 50 例 NSCLC 石蜡标本（包括癌及距离癌 5cm 以上的

正常肺组织）；一抗 : 鼠抗人 hnRNP A2/B1 单克隆抗体 (1:1000,Sigma)及鼠抗人 MGMT 单克隆抗体（ 1:100 ， Abcam ） ；评定标准：胞核阳性，以阳性细胞数量及阳性强度为标准进行半定量评分

• Western blot ： 5 例鳞癌和 5 例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；一抗 : 鼠抗人 hnRNP A2/B1 单克隆抗体

• 荧光实时定量 PCR(real-time PCR):11 例鳞癌和 11 例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本； 2 －△ Ct 法检测目的基因 hnRNP A2/B1 及MGMT mRNA 的相对表达量

• 免疫共沉淀结合 RT-PCR ：人肺鳞癌细胞株 （ HTB-182 ），裂解后加入鼠抗人 hnRNP A2/B1 单克隆抗体共沉淀，从产物中提取 RNA 进行RT-PCR 检测（目的基因 MGMT 、 OGG1 、 APEX 、 DNA-PKcs 和 Ku ）

结 果• HnRNP A2/B1 免疫组织化学： NSCLC 癌组织中的阳性率及

平均表达得分（ 100 ％， 5.3±0.9 ）显著高于正常肺组织（ 32 ％， 2.2±0.7 ）（ p<0.01 ）；在 III-IV 期癌组织中的平均表达得分（ 5.7±0.7 ）略高于 I-II 期（ 5.0±0.9 ）（ p<0.05 ），其表达与年龄、性别、肿瘤类型及吸烟史无明显相关性

鳞癌 （ Envision×400 ）

正常 （ Envision×100 ）

腺癌 （ Envision×400 ）

正常（ Envision×100 ）

• HnRNP A2/B1 Westen blot ： NSCLC 癌组织平均灰度比值(1.4±0.5) 明显高于正常肺组织 (0.7±0.2) （ p<0.01 ）

hnRNP A2/B1 及内参的 western blot 结果： 1 、 3 为同一鳞癌患者的癌组织及正常组织的条带； 2 、 4 为同一腺癌患者的癌组织及正常组织

的条带

• HnRNP A2/B1 荧光实时定量 PCR:

0

5

10

15

20

25

30

35

40

hnRNPA2/ B1

癌组织正常组织

hnRNP A2/B1 mRNA 在 NSCLC 癌组织中的平均表达量37.4(15.6 ～ 82.6) 明显高于正常肺组织 17.6(7.8 ～ 27.8)

（ p<0.01 ）

• 免疫共沉淀结合 RT-PCR 结果：

基因扩增电泳条带图（ 1-2 为 MGMT 扩增产物， 3-10 分别为OGG1 、 APEX 、 DNA-PKcs 和 Ku ，均未显示明显条带）

提示提示 hnRNP A2/B1hnRNP A2/B1 蛋白与蛋白与 MGMT mRNAMGMT mRNA 相结合相结合

• MGMT 免疫组织化学： NSCLC 癌组织阳性率及平均表达得分 (32 ％， 2.2±0.8) 明显低于正常肺组织（ 78 ％， 4.1±1.2) （ p<0.01 ）

鳞癌 （ Envision×400 ） 正常 （ Envision×400 ） 腺癌（ Envision×400 ） 正常 （ Envision×400 ）

• MGMT 荧光实时定量 PCR:

012345678910

MGMT

癌组织正常组织

MGMT mRNA 在 NSCLC 癌组织中的平均表达量 1.8(0.6 ～3.1) 明显低于正常肺组织 9.8(6.8 ～ 18.3) （ p<0.01 ）

讨 论 hnRNP A2/B1 蛋白及 mRNA 在 NSCLC 癌组织中高表达

MGMT 蛋白及 mRNA 在 NSCLC 癌组织中低表达+

hnRNP A2/B1 蛋白结合 MGMT mRNA

hnRNP A2/B1 对 MGMT 可能存在转录后调控作用

下调 MGMT mRNA 及蛋白的表达

削弱细胞 DNA 损伤修复能力

参与非小细胞肺癌发生