Grupo 1 - Verificação

Temas a abordar:•Teste de suscetibilidade aos antibióticos;•Testes:

Placa de testemunho; Teste de viabilidade;

•Processo de transconjugação;•Isolamento dos transconjugantes;•Previsão dos resultados;•Verificação.

Teste de suscetibilidade aos antibióticos • Ensaio que mede a susceptibilidade ou resistência de uma

bactéria aos antibióticos

• Realizado em placas de agar,rico em proteínas e hidratos de carbono que fornecem o substrato ideal para o desenvolvimento e crescimento de bactérias deinteresse clínico

Teste de suscetibilidade aos antibióticos

• São utilizados discos de difusão antibióticos depositados sobre a superfície do meio onde se inoculou, por espalhamento, uma amostra de uma cultura bacteriana previamente desenvolvida em meio líquido.

• Tendo como base a tabela de Teste de Susceptibilidade, podemos comparar os resultados e concluir a eficácia de cada antibiótico em inibir o crescimento das bactérias

Teste de suscetibilidade aos antibióticos

• AMC - amoxicilina + ácido clavulânico

• NAL - ácido nalidíxico• AMX - amoxicilina• AZT - aztreonam• FOX - cefoxitina• FEP - cefepime

999 – klebsiela pneumoneae •Halo com 19 mm no disco de ácido

nalidíxico; sendo por isso sensível

•Resistente a todos os B-lactâmicos;

• Lac +

K802N - Escherichia coli•Sensível a todos os B-lactâmicos;

•Resistente ao ácidonalidíxico;

•Lac -

TESTE DE VIABILIDADE E TESTEMUNHO

Meio em Gelose de Ágar

―Não seletivo―Não diferencial

Meio em Gelose de Ágar―Contem Amoxicilina + Ácido Nalidixico

TESTE DE VIABILIDADE E TESTEMUNHO

Permite verificar a viabilidade das bactérias: observa-se crescimento tanto da bactéria dadora como da recetora.

Permite verificar se as bactérias são, de facto, sensíveis aos antibióticos utilizados

Bactérias Vivas e Viáveis

Não se verifica crescimento bacteriano

TESTE DE VIABILIDADE E TESTEMUNHO

TESTE DE VIABILIDADE

PLACA TESTEMUNHO

OBSERVAÇÕES

Conjugação bacteriana

Klebsiela pneumonae E. coli

Em que consiste:

• Conjugação é a transferência de DNA plasmídico de uma bactéria dadora (Klebsiela pneumoneae) para uma bactéria recetora (E. coli).

Procedimento:

• Promoveu-se a conjugação bacteriana por dois métodos:

• 1. Encontro em gelose de agár;• 2. Encontro em caldo.

Resultados:

• Após incubação tanto da placa como do caldo obteve-se uma mistura

bacteriana constituída por bactéria dadora, recetora e transconjugantes

.

Isolamento dos Transconjugantes

• Consiste na separação das bactérias transconjugantes das bactérias dadoras e receptoras, obtidas no final do processo de transconjugação.

• Este processo vai permitir avaliar o comportamento das bactérias transconjugantes, no que respeita ao seu fenótipo. Permitindo assim, compará-las com o fenótipo das bactérias que lhes deram origem.

ProcedimentoÁgar

Recolha da massa de

crescimento obtido

Suspensão em 1 mL de Soro

Fisiológico

Dilu

içõe

s

Mãe

1/10

1/100

1/1000

Plaqueamento

ProcedimentoCaldo

Mãe 1/10 10/100 1/1000

Diluições

Plaqueamento

Plaqueamento Meio de MacConkey + Antibióticos

Macconkey

Lactose

Vermelho Neutro

Cristal violeta

Sais Biliares

• Utilizado para o isolamento de bactérias Gram negativo.

• Permite diferenciar bactérias Lac+ e Lac-

Plaqueamento Meio de MacConkey + Antibióticos

Antibióticos

Ác. Nalidíxico

Quinolona

Actua inibindo as

topoisomerases II e IV

Impede a formação dos

ácidos nucleícos

Amoxicilina

Oximino-ß-lactâmico

Do grupo das amino-

penicilinas

Atua na fase parietal da

formação do peptidoglican

o

Inibe a acção das

transpeptidases

Previsão dos resultados • Teoricamente as placas Mac Conkey deveriam ter colónias

âmbar/amarelas.

Previsão dos resultados • Contudo podem aparecer placas com colónias vermelhas.

Transconjugantes mudaram de

cor porque houve

degradação do antibiótico que produz ácidos.

Cresceram colónias da

bactéria dadora.

Sofreram alguma

mutação que lhes fez ganhar a

resistência ao antibiótico.

• Para verificar se na situação anterior existem apenas colónias transconjugantes:

Verificação

Isolamento em meio Mac Conkey sem antibióticos

Colónias Vermelhas – Bactéria dadora

Colónias amarelas – Bactéria T

• Pode ocorrer o crescimento de colónias satélites (bactérias recetoras).

Previsão de resultados

Necessário verificar se as bactérias que cresceram no meio seletivo são apenas as

transconjugantes

Podemos fazer de 3 maneiras

Verificação

Inocular as bactérias obtidas

em meio Mac Conkey com discos de antibiótico de

amoxicilina e ácido nalidíxico.

Inocular as bactérias obtidas

em meio Mac Conkey com os

antibióticos inseridos no agar.

Estria à superfície Técnica do

isolamento em quadrantes

VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio Mac Conkey com discos de

antibiótico de amoxicilina e ácido nalidíxico.

Colónias que cresceram são de bactérias Transconjugantes

VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio Mac Conkey com discos de

antibiótico de amoxicilina e ácido nalidíxico.

Colónias que cresceram são de bactérias recetoras

VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio

Mac Conkey com os antibióticos inseridos no agar.

Estria à superfície

Colónias que cresceram são de bactérias Transconjugantes

VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio

Mac Conkey com os antibióticos inseridos no agar.

Estria à superfície

Colónias que cresceram são de bactérias recetoras

VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio

Mac Conkey com os antibióticos inseridos no agar.

Técnica do isolamento

em quadrantes

No 4º quadrante teremos as bactérias Transconjugantes