Golden sponsors Silver sponsors - OLV Z · Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3...
Transcript of Golden sponsors Silver sponsors - OLV Z · Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3...
Golden sponsors Silver sponsors
Andere sponsors
Resultaten EKE IHC 2019/2+3
De Wiest Bart
10 december 2019
OLV Ziekenhuis Aalst
EKE IHC 2019-3
Antistoffen: tweede semi-kwantitatieve EKE
ER reassessment: n=10
PR: n=65
Her2: n=64
Panel:
Scoring 04/11/2019 (UZ Brussel)
Onafhankelijk, in consensus
4 pathologen
Dr. B. Lelie (AZ Zeno)
Dr. A.M. Schelfhout (OLV Aalst)
Dr. K. Lambein (AZ St-Lucas Gent)
Dr. A.M. Dierick (Sciensano)
Procedure panelbeoordeling
• Literatuurstudie m.b.t. antilichaam: NordiQC website, datasheets, guidelines, …
– Wat moet / kan aankleuren?
– Wat mag zeker niet aankleuren?
• Vastleggen criteria aankleuring per AS
• Beoordeling
– Consensus binnen het panel
– Reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende
– Evt. aanbevelingen protocol
eindbeoordeling
Beoordelingscriteria HER2
Optimaal:- Concordantie met verwacht resultaat biopten
- de kleuring van biopt 4 (IHC 2+ ampl.) komt overeen met een score 2+
- geen of maximaal zwakke cytoplasmatische aankleuring die niet interfereert met de interpretatie
Goed: - Algemeen zwakke aankleuring
- Zeer zwakke tegenkleuring: bemoeilijkt interpretatie
- Biopt 5 (3+) kleurt als 2+ downgrade
- IHC 0 vals positief of IHC biopt 1 (1+) kleurt als 2+ downgrade
- cellijnen:
- A (IHC 0) kleurt als 1+
- of B (IHC 1+) kleurt als 2+
- of C (IHC 2+) kleurt als 1+
- er is cytoplasmatische aankleuring die interfereert met de interpretatie downgrade
actie: optimalisatie nuttig
Beoordelingscriteria HER2
Borderline:
- één van de biopten/cellijnen (C) is vals negatief
- of twee van de biopten/cellijnen zijn vals positief
actie: optimalisatie nodig
Onvoldoende:
- Biopt 4 (IHC 2+ geamplificeerd) is vals negatief
- en/of twee van de biopten/cellijnen zijn vals negatief
- of constante overkleuring
actie: dringend optimalisatie nodig
Protocol HER2
n= 64
Conc.: n=24
Geen wijziging tov EKE2019-1: ~40% conc. (<>andere EKE ~ 20% conc.)
Dako: polyclonaal: n=23
Leica/Novocastra: clone CB11: n=1
RTU: n=40
tov EKE2019-1 : +1(Roche 4B5)
Dako Herceptest: n=1
Roche :rm 4B5: n=38
Leica/Novocastra: clone CB11 : n=1
Protocol HER2
Polyclonaal conc. Dako
Dako datasheet Autostainer: Ph6: 1/600-1/800 ; 20min RT
Ph9: 1/1000-1/1200 ; 20min RT
op Autostainer: Flex+ Inc.tijd : 15- 20min RT
10 verdunningen 2019-1 (1/150 - 1/800)
4 verdunningen: 1/150 - 1/500
HIER 2019-1: 2/14 pH9 geen, enkel pH6
op Omnis: Flex+ 5 verdunningen: 1/100 - 1/600
6 verdunningen: 1/100 – 1/400
Inc.tijd : 12- 20min RT/32°C
HIER 2019-1: enkel pH6 2/13 pH9
Dako AS op Roche XT: UV kit 1/200 32’ bij 36°C HIER CC1 8’ UV
1/300 28’ RT (+amp) HIER CC1 30’ UV
Protocol HER2
Clone 4B5 RTU Ventana BMK GX: UV kit
AS: 16’ - 32’ bij 36°C /RT
+ amplifier: 3 (2019-1: 2) datasheet?
HIER: CC1 30’ - 38’
BMK XT: UV kit 1/2 Datasheet: AS16’ ; CC1 mild (geen amp)
AS: 16’ bij 36°C ; HIER: CC1 30’ +/- amplifier
BMK Ultra: UV kit 20% datasheet: AS12’ ; CC1 mild
AS: 8’ - 32’ bij 36°C (25%: 16’ )
+ amplifier (n=10): 4’ - 8’
HIER: CC1 8’ - 64’ (80% CC1 mild)
BMK iView kit (n=2) XT: 32 bij 36°C ; HIER: CC1 60’ (= datasheet)
Ultra: AS 32’ RT ; HIER: CC1 36’ (~datasheet)
Protocol HER2
Herceptest Dako RTU
1 deelnemer
Omnis platform
AS inc. 20’ bij 32°C ; HIER pH6 30’
Datasheet?
Clone CB11 Leica
conc. :
Datasheet CB11 (2008): AS 1/40 inc. 60min bij 25°C. ; HIER niet aanbevolen!
Dako Autostainer: AS 1/800 20’ RT ; HIER pH9 onvoldoende 2019-1
zelfde labo: AS 1/250 20’ RT ; HIER pH9 optimaal 2019-3
RTU: Leica BondIII: AS inc. 15’ bij 20°C ; HIER pH9 20’ (borderline vals pos.)
zelfde protocol: goed 2019-3
Antistof HER2 Samenstelling EQA blok
Weefsel
Biopt 1: IHC 0, Non Amplified
Biopt 2: IHC 1+ Non Amplified
Biopt 3: IHC 2+ Non Amplified
Biopt 4: IHC 2+ Amplified
Biopt 5: IHC 3+ Amplified
Cellijn
Antistof HER2 : overzichtDako Herceptest by NordiQC
2+ 3+
1+
Antistof HER2 : overzichtVentana Pathway by NordiQC
2+ 3+
1+
Antistof HER2
3+ OK? Optimaal?
3+ cellijn
Dako poly A0485 1/300 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis
3+ histo
Antistof HER2
3+ histo3+ cellijnDako poly A0485 1/300 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis
optimaal resultaat Dako poly A0485 1/400 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis
Optimaal? 3+ OK ?
Antistof HER2
te zwak ‘vals negatief’
3+ histo3+ cellijnDako poly A0485 1/300 20’ 32°C ; pH6 30’; Dako Omnis
aanvaardbaarte zwak
Antistof HER2
2+ cellijn
2+ Optimaal?
Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis 2+ histo
Antistof HER2
2+ cellijn
2+ EQA histo
Dako poly A0485 1/300 20’ RT’; pH6 30’; Omnis
2+ histo onvoldoende
2+ histo optimaal
Antistof HER2
Ventana BMK Ultra: ultraView
tegenkleuring
OK
Antistof HER2
Zwakke tegenkleuring
Resultaatbespreking HER2
Algemeen
n=64 2019-3 2019-1 NQC run B27
n % Suff. n n=324 suff.
optimaal 34 53 %86%
43%56 %
83%
86 %goed 21 33 % 3%
13%
borderline 1 1,5 % 19%
44 %
2 %
onvoldoende 8 12,5 % 25% 12%
In house, LDT
Resultaatbespreking HER2
Opgesplitst per clone : conc. polyclonal
Dako% suff2019-3
2019-1 % suff2019-1
NQC B27
2019
CB11 LeicaNovocastra
% suff
n=23 2019-3
2019-1
optimaal 6 26% 0 0% 75% 1 0 -
goed 9 39% 1 4% 2% 0 0 -
borderline 0 - 8 35% 5% 0 0 -
onvoldoende 8 35% 14 61% 18% 0 1 -
Totaal suff 65% 1/1
NQC B27 2019 77% (34/44) 67% (4/6)
Resultaatbespreking HER2
Opgesplitst per clone: RTU
HerceptestDako
% suff
4B5 Ventana % suff CB11 LeicaNovocastra
% suff
2019-3 2019-1 2019-3 2019-1 2019-3 2019-1 2019-3 2019-1
optimaal 1 0 - 26 27 68% 73% 0 0 -
goed 0 0 - 11 7 18% 19% 1 0 -
borderline 0 0 - 1 3 - - 0 1 -
onvoldoende 0 1 - 0 0 - - 0 0 -
Totaal suff 1/1 0/1 86% 92% 1/1 0/1
NQC B27 2019
88% (n=28) 3 niet geslaagd
94% 78% (5/7) 2 poor result
Resultaatbespreking HER2
Besluit: 37% conc. vs 63% RTU
NQC B27: 14% gebruikt poly AS Dako<> EKE 36%
Herceptest: slechts 1 gebruiker op Omnis (NQC B27: 9%)
Per toesteltype:
Dako Autostainer: 8/9 poly AS Dako, 1x CB11
Dako Omnis: 13/14 poly AS Dako, 1x RTU Herceptest
Ventana platformen: 2/39 gebruiken poly AS Dako
Gebruik datasheets
Ventana:
vnl. aanpassingen aan AS inc.tijd geen probleem
36% gebruikt amplifier
Amplifier in 35% te sterke aankleuring (1+ 2+) downgrade ‘goed’ ; geen niet geslaagde
Dako:
Beduidend minder variatie in protocol t.o.v. 2019-1
Verdunningen binnen voorgestelde range
Hoogste verdunningen (beide toestellen) buiten gebruik
Effect pH type:
Autostainer: enkel pH6
Omnis: 85% pH6 (82% geslaagd) ; 15% pH9 (enkel goed) ; 1 niet meegedeeld
vals neg. 2+ en/of 3+: niet geslaagd: = protocol (1/300-350)
optimaal echter mogelijk
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Suff. 86 %
% geslaagd: +30% uitsluitend Dako poly, Ventana status quo
Resultaten dicht bij NordiQC Run B27
Minder optimale resultaten
Aanvaardbare, maar zwakke 2+ ; achtergrond ; (zeer) zwakke tegenkleuring ‘goed’
OK, maar…
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Suff. 86 %
Resultaten dicht bij Run B27
Minder optimale resultaten
Aanvaardbare, maar zwakke 2+ ; achtergrond ; (zeer) zwakke tegenkleuring ‘goed’
OK, maar…
Globaal: nog steeds 12,5% onvoldoende (vals negatieve 2+ amplified)
<>NordiQC algemeen: Na 27 NQC runs nog steeds 14% niet geslaagd (12% onvoldoende)
AS in ‘onvoldoende’ beoordeelde groep:
35% conc. AS scoort onvoldoende (>< EKE2019-1: 61%)
Reden: strikte interpretatie: 2+ amplified en 3+ cores moeten aangetoond kunnen worden
8/8 vals negatieve IHC 2+ amplified klinische impact!
4/8 vals negatieve IHC 2+ amplified én cellijn 2+ EQ
4/8 ook vals negatieve 3+ cellijn (kleurt als 2+)
4/8 vals negatieve cellijn 1+ (kleurt niet aan)
1/8 vals negatieve IHC 2+ (kleurt als 1+) én IHC 3+ (kleurt als 2+)
Enkel Dako poly
Onafh. van toesteltypes
Over ganse verdunningsrange, maar identieke AS tijd en HIER type
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Suff. 86 %
Resultaten dicht bij Run B27
Minder optimale resultaten
Aanvaardbare, maar zwakke 2+ ; achtergrond ; (zeer) zwakke tegenkleuring ‘goed’
OK, maar…
AS in ‘geslaagd’ beoordeelde groep:
Leica CB11: 2/2 geslaagd (conc.: gewijzigde verdunning) >< 2019-1: 0/2
Dako poly: EKE2019-1: 3% (Ventana platform) 2019-3: 65% (Ventana én Dako platformen)
Ventana 4B5:
97% geslaagd
1 niet geslaagd: standaardprotocol: 2+ cellijn vals negatief + alg. achtergrond (tech.?)
Dako poly op Ventana: enkel goed resultaat <> 2019-1 goed/onvoldoende
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Resultaatbespreking HER2
Besluit: Gebruik controles:
Verplichting vanaf deze EKE
98,5% (<>2019-1: 55%)
Conformiteit?
Goede controle = dynamic range
0, 1+ en/of 2+(voorkeur amplified), 3+
17% niet conform guidelines
Niet conform:
Geen dynamic range (1 controleweefsel)
Geen negatieve controle (0/1+)
Geen 3+ aankleuring aantoonbaar/aanwezig
1/9 onvoldoende resultaat
Sanbio
Controls
Inclusion of 2+ tumours with and without HER-2 gene amplification in the control material for both EQA and
internal quality control is essential to evaluate precision and performance stability of the IHC HER-2 assay. (bron NordiQC)
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Oorzaakanalyse
Aankleuring 3+ histologie: OK
98,5% geslaagd
1 vals negatief: Dako poly op Autostainer: 1/500 20’ RT; TRS pH6 <>met linker ‘goed’
hoogste verdunning! Ook probleem met beide 2+ cores (vals neg.)
Aankleuring 2+ amplified:
Histologie: 12,5% vals negatief
Dako: geen éénduidige oorzaak (volledige verdunningreeks, beide toesteltypes)
Cellijn (EQ): 14% vals negatief (vanaf 1/300 verdunning)
Ventana: 3x standaardprotocol <> telkens 2+ amplified core wel en 3+ core OK: oorzaak??
Dako: ook 3+ cellijn en /of 2+ amplified biopt onvoldoende (80%)
Cellijn:
Omnis protocol scoort beter: 43% volledige correlatie <> 0% Autostainer
Omnis: identiek protocol: onvoldoende, wisselende resultaten cellijn??
Correlatie cellijnen Ventana protocol: 68% OK
Cellijn 3+ vals negatief: Omnis 7% ; Autostainer 55% ; Ventana geen probleem
Cellijn 2+ (EQ) vals negatief : Omnis 14% ; Autostainer 50% ; Ventana 8%
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Oorzaakanalyse
Impact verdunning? Minder grote spreiding 1/100 - 1/500
Datasheet 1/600 - 1/1200 afh. van HIER type <> ~56% gebruikt verdunning rond 1/200-300
Range 1/100-1/150: allen geslaagd, onafh. van stainer
Range 1/200-1/600: 55% geslaagd: probleem 2+ amplified én cellijn(en)
optimaal goed borderline onvoldoende opmerkingen
100 (Omnis) 1 1 = protocol
150 1 2 = protocol
200 3 1 3 Enkel Omnis/Ventana geslaagd
300 (NQC) 3 3 Enkel Omnis/Ventana geslaagd
350 (Omnis) 1
400 (Omnis) 1 1 AS20’ en pH6 ; AS12’ en pH9
500 (Autostainer) 1 1 +linker = OK
Meest gebruikt
Resultaatbespreking HER2
Besluit:
Corrigerende maatregelen n.a.v. resultaten EKE2019-1
Aantal labo’s met maatregelen: 13/27 ~48%
Dako poly: 11/23 ~52%
Ventana: 2/3
Leica: 0/1
Impact op outcome:
Labo’s met wijziging:
Dako poly: 82% geslaagd ; 36% optimaal
Ventana: 100% geslaagd (1/2 optimaal)
Labo’s zonder wijziging
Dako poly: 50% geslaagd (44% optimaal) ; 50% ‘onvoldoende’
Ventana: 1/1 ; geslaagd (‘goed’)
Leica: geslaagd (2019-1 vals positief 2019-3 achtergrond)
Corrigerende acties:
Verdunning: 30% ; gemiddelde verd. 1/320 1/250 (spreiding 1/150 tot 1/400 )
Incubatietijd en -temperatuur: 4/27
Schrappen chromogeen versterker: 2/27
Autostainer Omnis : 4/5 gewijzigde verdunning
HIER: pH9 pH6 (CB11 op Dako)
Resultaatbespreking HER2
Staining issues UES (uneven staining)https://journals.lww.com/appliedimmunohist/Abstract/2018/05000/Uneven_Staining_in_Automated_Immunohistochemistry_.1.aspx
Resultaatbespreking HER2
– Results:
• only 8% (14/180 slides) showed uniform staining !• decreased staining (‘cold zones’): zonal, large regions, mostly instrument dependent• increased staining (‘hot zones’): small foci, random distribution, appears on all
stainers
– Conclusions:
• UES = important implications on reliability IHC assay• baseline testing (machine validation) and periodic QA testing recommended• pathologists should be aware of UES • be aware of cold zones in cores / small endoscopic samples without internal control
(although normal on-slide control)
Resultaatbespreking HER2
cold zone
overstaining, control looks OK
variable staining
decreased staining
both increased/decreased in same slide
uneven staining(arrows)
hot zone
Resultaatbespreking HER2
Consider each slide position / chamber on the IHC stainer as an individual stainer and use appropriate on-slide controls
Resultaatbespreking HER2Take home message: cf individueel rapport Sciensano
Optimaliseren van methoden
NordiQC website
Leverancier AS
Correct toepassen nationale adviezen en guidelines: controles dynamic range!
Periodieke evaluatie (KPI): bvb correlatie IHC - ISH
Ingangscontrole uitvoeren op gevalideerd controlemateriaal voor ingebruikname
Pre analytics !
RTU én Conc. AS: lotvariatie mogelijk = eiwit conc. kan wijzigen
= monitoren o.b.v. verdunningsreeks
Resultaatbespreking HER2Take home message: cf individueel rapport Sciensano
Samenstelling controleblok:
Op elk glaasje bij routine aanvraag
Enkel sterke expressor 3+ is onvoldoende
Volledige dynamic range is nodig:
bij ingangscontrole lot: weefsel 2+ is cruciaal (cave conc. AS)
Bij routine gebruik volstaat naast 0 en 3+ een ‘zwakke expressor (= 1+ of 2+)
Permanente monitoring van aankleuring controleblok
Protocol PR
n= 65
Conc.: geen wijzigingen (n=3)
Dako: mm clone PgR 1294: n=1
Leica Novocastra:
mm clone 16 (n=1)
Mm clone 16+SAN27 (n=1)
RTU:
Dako:
mm clone PgR1294 : n=11 (2019-1: 7)
mm clone PgR636: n=10 (2019-1: 15)
Roche/Cell Marque: rm clone 1E2 : n=40 (2019-1: 38)
Leica Novocastra: mm clone 16: n=1
Protocol PR
Conc. AS
PgR 1294 Dako
1/50 15’ bij 32°C ; pH9 30’ Flex+ Omnis
16+SAN27 Leica
1/50 20’ bij 32°C +linker ; pH9 30’ Flex+ Omnis
16 Leica
BMK XT: 1/200 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 8’
(2019-1: 1/50 60’ bij 36°C. +amp 8’ ; UV HIER CC1 60’)
RTU clone 16 (Leica)
Bond III: 15’ RT ; HIER pH9 20’
Datasheet 10/2016: HIER pH9 20’ , AS voorgedefinieerd
Protocol PR
RTU clone PgR 1294 (Dako)
Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 30’ , AS 10’ 55%
Allen Omnis
AS 10’- 20’ bij 32°C
AS 10’- 27’ bij RT
HIER pH9
RTU clone PgR 636 (Dako)
Datasheet 10/2016: Flex+ HIER pH9 20’ , AS tijd voorgedefinieerd (20’?)
Autostainer 8/9
AS 15’-20’ RT. 30% gebruikt kortere inc. tijd
+linker 15’: 20% (datasheet?) 2019-1: 50%
HIER pH9: 8/9
Omnis 1/9
AS 20’ RT; HIER tijd??
Protocol PR
RTU clone 1E2 (Roche/C.Marque)
Datasheet:
AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’
48% deelnemers (2019-1: 28%)
UView:
AS 12’ – 32’ (55% AS datasheet )
+/- 4’ tot 8’ amp bij 36°C (38% )
HIER CC1 8’ – 36’ - 64’ (58% ‘standard’ CC1 ~)
iView (2):
AS 16’ bij 36°C ; HIER CC1 60’
AS 20’ bij RT ; HIER CC1 36’
Resultaat datasheet:
89% geslaagd ; 84% optimaal
4 niet geslaagd: te zwakke Ca, vals pos./neg., storend cytoplasma
Scoringscriteria PRAankleuringspatroon: nucleair
• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen
• Normale tonsil : geen kernaankleuring
• Borst sarcomatoïd carcinoom (core 3) : geen aankleuring van de tumorale cellen
• Borst lobulair carcinoom (core 4): matig tot sterk nucleaire aankleuring in meerderheid (80-90%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 5) : zwak tot sterke aankleuring in minderheid (15-30%) van de tumorale cellen
• Borst intraductaal carcinoom (core 6) : max. 1% aankleuring in tumorale cellen, vanaf rond coupe 50: extra focus waarin minstens matig nucleaire aankleuring
Antistof PR
Core 4
Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
OK?
Cervix OK
OK?OK?
Core 5
Antistof PR
Optimaal
Ventana 1E2 16’ ; CC1 64’ ; UV BMK Ultra
optimaal
Core 4 matig/sterk positief 80-90%
Core 5 zwak/ sterk positief 15-30%
Antistof PR
Ventana 1E2 16’ +amp 4’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
borderline
Core 4
Core 5
Cervix te zwak
Antistof PR
borderline
Ventana 1E2 32’ ; CC1 36’ ; UV BMK Ultra
Cervix
aspecifiek
aspecifiek
Antistof PR
Te zwakke tegenkleuring
Ventana BMK Ultra
Antistof PR
Te zwakke tegenkleuring
Te zwakke tegenkleuring
Resultaatbespreking PR
Algemeen
n=65 EKE 2019-3
EKE 2019-1
NQC 2019B27
n % suff suff % suff
optimaal 47 72%86%
42%84%
66%85%
goed 9 14% 42% 19%
borderline 7 11% 9% 11%
onvoldoende 2 3% 6% 4%
Resultaatbespreking PR
Opgesplitst per clone : conc.
* NordiQC: waarvan 63% optimaal
** NordiQC: geen optimaal
*** NordiQC: waarvan 70% optimaal
16
Leica / Novocastra
% suff
16+SAN27 Leica/
Novocastra
% suff PgR 1294 Dako
% suff
n=1 n=1 n=1
optimaal 1 - 1 - 1 -
goed 0 - 0 - 0 -
borderline 0 - 0 - 0 -
onvoldoende 0 - 0 - 0 -
Totaal suff - - -
NQC 2019 82%* 4/4 ** 90% ***
Resultaatbespreking PR
Opgesplitst per clone: RTU
* NordiQC: waarvan 62% optimaal** NordiQC: waarvan 66% optimaal
*** NordiQC: waarvan 82% optimaal
**** NordiQC: waarvan 72% optimaal
PgR1294 Dako
% suff
1E2 Ventana/ C. Marque
% suff
16 Leica
% suff
PgR 636 Dako
% suff.
n=11 n=40 n=1 n=10
optimaal 9 82% 29 73% 0 - 6 60%
goed 0 - 5 12% 1 - 3 30%
borderline 2 18% 4 10% 0 - 1 10%
onvoldoende 0 - 2 5% 0 - 0 -
Totaal suff 82% 85% 1/1 90%
NQC 2019 89% * 83%** 100% *** 89% ****
Resultaatbespreking PR
Besluit: Suff. 86 %
Algemene score vergelijkbaar 2019-1 en NQC 2019
Geslaagd resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers
AS:
Slechts 5% (n=3) conc. NQC slaagpercentage : clone 16 82%, beide Dako clones 90-95%
34% Dako clones , 62% Ventana clone 1E2, 4% Leica clones robuust
Dako
robuuste antistoffen en test: AS tijd en -incubatie, pH geen invloed voor geslaagd resultaat
Linker geen garantie voor optimaal resultaat (achtergrond)
Ventana platformen: meer spreiding in protocols (AS en HIER)
Standaardprotocol: 94% geslaagd, 88% optimaal
<> 2019-1: wisselend resultaat met standaard protocol
Optimaal mogelijk met datasheet of LDT
Niet geslaagd: 2/4 gebruiken standaardprotocol
Korte(re) HIER: optimaal mogelijk
(Te) zwakke tegenkleuring
+amp. (38%) is geen garantie op optimaal resultaat (11% niet geslaagd)
voldoende lange HIER wel
Niet geslaagd: 2/4 gebruiken signaalversterker, optimaal mogelijk met amp.
Resultaatbespreking PR
Besluit: Suff. 86%
Extra controlecoupe: 57% (2019-1: 52%)
Aanbevolen controle: NordiQC
Cervix: pos. controle (sensitiviteit)
Columnair epitheel, squameus epitheel en stromale cellen sterk pos.
endotheel en lymfocyten cellen negatief
minimale cytoplasmatische aankleuring (PgR 636 geeft sterkere aankleuring)
! Post-menopauzale cervix: lagere PR expressie in squameus epitheel mogelijk !
Tonsil: negatieve controle (cave Ventana clone)
Scoringscriteria ERAankleuringspatroon: nucleair
• Normale cervix: matig/sterke aankleuring bijna alle columnair epitheel, basaal squameus epitheel en de meeste stromale cellen. Uitz. endotheel en lymfoïde cellen
• Normale tonsil : minstens zwak tot matige aankleuring van kiemcentrum macrofagenen squameus epitheel
• Borst ductaal carcinoom (core 3) : minstens matig tot sterke aankleuring in meerderheid (90-100%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 4) : minstens matig tot sterke aankleuring in minderheid (ongeveer 20%) van de tumorale cellen
• Borst ductaal carcinoom (core 5) : geen aankleuring van de neoplastische cellen
Reassessment ER
Algemeen
n=7 reassess
n % suff
optimaal 2 29%43 %
goed 1 14%
borderline 1 14 %
onvoldoende 3 43 %
Reassessment ER
Besluit: 7/13 niet geslaagde labo’s hebben een reassessment aangevraagd (niet verplichtend)
Aktieplan:
3/7 protocolwijziging: aanpassing HIER en/of AS tijd (RTU)
3 geen wijziging ; 1 geen wijziging
Resultaten:
Gewijzigde protocols: onvoldoende 2/3 geslaagd
1 lab grondige protocolwijziging (onvoldoende optimaal)
Niet gewijzigde: borderline
Oorzaakanalyse: onvoldoende
Vals negatief Ca en cellijn
Vals positief Ca
Protocol optimalisatie loont !
Resultaatbespreking besluit
sufficient 2019 NQC
PR 84 % 85 % 2019
HER2* 86 % 86% 2019
* Dako conc. AS: vals negatieve IHC 2+ amplified
Resultaten EKE IHC 2019-2
De Wiest Bart
10 december 2019
OLV Ziekenhuis Aalst
EKE IHC 2019-2
Antistoffen:
CD34: n= 65
TTF-1: n= 65
Panel:
Scoring 22/10/2019 (CHU Brugmann)
Onafhankelijk, in consensus
3 pathologen
Dr. Valérie Segers (CHU Brugmann)
Dr. Nicky D’Haene (Erasme)
Dr. A.M. Dierick (Sciensano)
Protocol CD34
• Gebruikte clone: enkel QBEnd/10
– Conc.: n=9• DAKO op Ventana stainer UV/OV:
1/24 - 1/50 - 1/100
16’ – 20’ – 32’ – 100’ +/- amp.
HIER 32’ – 64’
• Dako op Omnis (1) 1/100 20’ bij 32°C ; HIER pH9 30’
• Leica (2) BondIII : 1/100 15’ RT ; HIER pH9
Ventana iView: 1/50 32’ ; HIER CC1 32’
– RTU ½ verdund: • Op Ventana stainer: AS 32’ RT ; HIER CC1 30’
Protocol CD34
• Gebruikte clone: enkel QBEnd/10
– RTU: n= 56• DAKO: n=11
Omnis: 12’ - 30’ RT/32°C +/- linker ; HIER pH9 30’
Autostainer:
10’ - 30’ RT +/- linker ; HIER pH9 30’ (8/9)
20’ RT ; HIER pH6 30’
Ventana Ultra:
32’ RT ; HIER CC1 8’ iView
28’ - 32’ bij 36°C ; HIER CC1 30’-36’ UView
• LEICA: n=3
Incubatietijd: 10’ - 15’
HIER pH9 : 10’ - 30’
• VENTANA: n=27
Incubatietijd: 16’ - 60’ RT/36°C ; +/- amp.
Zonder / met HIER CC1 8’ - 64’
Antistof CD34• Scoringscriteria: membranaire aankleuring
– Appendix:
Matig tot sterke aankleuring (membranair) van de Cajal cellen in muscularis propia en de stromale fibroblast-like cellen
Epitheliale cellen negatief
– Lever:
Matig tot sterke aankleuring (membranair) van de endotheliale cellen in portavelden en periportale sinusoïden.
Hepatocyten negatief
– GIST:
Sterke membranaire aankleuring van neoplastische cellen
– Bijniertumor:
Geen aankleuring van neoplastische cellen
- Alle weefsels :
sterke (overwegend membranaire) aankleuring van bijna alle endotheliale cellen
geen aankleuring van de gladde spiercellen
Antistof CD34: overzicht
Optimaal Goed
Antistof CD34: appendix
Optimaal
goed
Dako RTU ½ 32’ RT ; CC1 30’ ; UV BMK XT
Antistof CD34: appendix
Optimaal
goed
Dako RTU ½ 32’ RT ; CC1 30’ ; UV BMK XT
Ventana RTU 60’ 36°C ; CC1 32’ ; OV BMK Ultra
Antistof CD34: leverOptimaal
Dako RTU 20’ RT ; pH9 30’ ; Dako Autostainer
Dako RTU ½ 32’ RT ; CC1 30’ ; UV BMK XT
goed
Antistof CD34: GISTOptimaal
Dako RTU 20’ RT ; pH9 30’ ; Dako Autostainer
Dako RTU ½ 32’ RT ; CC1 30’ ; UV BMK XT
goed
Antistof CD34
Optimaal Goed
Dako 1/100 32’ bij 36°C ; CC1 mild ; UV BMK XT Dako 1/100 32’ bij 36°C +amp ; CC1 mild ; OV BMK XT
Resultaatbespreking CD34
• Algemeen
– n=65
Suff. 100 %
EKE 2019-2
OLV 2013-2
NQC 2016
n suff % suff % suff
optimaal 62 95%
100%
84% 63%
goed 3 5% 8% 92% 32% 95%
Borderline 0 - 8% 4%
Onvoldoende 0 - 0% 1%
Resultaatbespreking CD34
• Opgesplitst per clone producent
– RTU: 96% optimaal ; suff. 100 %
* RTU ½ verdund: ‘goed (zwak)’
n=54 DakoQBEnd10
RTU*
% suff
VentanaQBEnd10
RTU
% suff
LeicaQBEnd10
RTU
% suff
n=27 n=26 n=3
optimaal 26 96% 26 100%
3 -
goed 1 4% 0 - 0 -
borderline 0 - 0 - 0 -
onvoldoende 0 - 0 0 -
Totaal suff 100% 100% -
NQC 2016 Autostainer 92% Omnis 100%
97% 100%
Resultaatbespreking CD34
• Opgesplitst per clone producent
– Concentrated: 88% optimaal ; suff. 100 %
n=8 DakoQBEnd10 RTU
% suff Leica QBEnd10 RTU
% suff
n=6 n=2
optimaal 5 83% 2 100%
goed 1 17% 0 -
borderline 0 - 0 -
onvoldoende 0 - 0
Totaal suff. 100% 100%
NQC 2016 95%
Resultaatbespreking CD34
Besluit:• Lage expressors (Cajal cellen en perisinoïdale endotheelcellen): OK voor
meeste deelnemers
• Suff. 100% (~NQC 95%)
• Geen vals negatieven
• Geen verschil tussen aanbevolen protocol en LDT Ventana (2008): 20% gebruikt aanbevolen protocol = geen HIER (cave blasten?)
• Geen verschillen tussen producenten, format: robuuste test
• Resultaat ‘goed’: RTU ½ verdund: merkelijk zwakkere aankleuring GIST (sterke expressor)
cave suboptimale fixatie?
Verdunning 1/100 met gelijkaardig protocol: uView te zwak <>OptiView optimaal (+amp)
• HIER:
Geen HIER: ook optimaal mogelijk
Langere pretreat: – geen intensere kleuring
– 1 lab verlengde HIER: aankleuring blasten (decal) ook Cajal duidelijker aantoonbaar
Amplifier: 35%. Niet noodzakelijk voor optimaal resultaat
Protocol TTF-1
n= 66
Conc.: n=9
Leica SPT24 n=4
Immunologic SPT24 n=1
Dako 8G7G3/1 n=3
Biocare 8G7G3/1 n=1
RTU: n=57
Dako 8G7G3/1 n=24
Roche 8G7G3/1 n= 10
Roche SP141 n=19
Leica SPT24 n=4
Protocol TTF-1
• Conc. AS:
Leica SPT24 Ventana
Poly: 1/50 32’ ; HIER CC1 64’ OV
Mouse: 1/20 24’ RT ; HIER CC1 8’ UV
BondIII: 1/200 15’ RT ; pH9 20’
Omnis:
1/400 30’ 32°C ; pH9 30’
Immunologic SPT24 Omnis: 1/100 20’ bij 32°C +linker 10’ ; HIER pH9 30’
Protocol TTF-1
• Conc. AS:
Dako 8G7G3/1 Omnis: 1/150 20’ bij 32°C +linker ; HIER pH6 30’
Ventana 1/50 40’ Rt ; HIER CC1 36’
Ventana 1/100 32’ bij 42°C ; HIER CC1 64’
Biocare 8G7G3/1 Ventana 1/250 32’ bij 36°C +amp. ; HIER CC1 64’
• RTU:
Roche SP141 AS 8’ – 40’ RT of 32°C +/- amp
HIER CC1 8’ – 64’
Protocol TTF-1
• RTU:
Dako 8G7G3/1 Autostainer
AS 10’ – 20’ – 30’ RT +/- linker
HIER pH9 of pH6 (n=1)
Omnis AS 12’ – 20’ – 30’ RT/32°C/36°C +/- linker
HIER pH9
Ventana stainers AS 28’ – 30’ RT of 36°C +/- amp
Roche 8G7G3/1 AS 16’ – 40’ 36°C +/- amp
HIER CC1 36’-64’
Leica SPT24 Omnis: AS 20’ RT of 32°C ; HIER pH9 30’
Bond III of Max: AS 10’ – 15’ 32°C ; HIER pH6
Spreiding
protocolsettings
Antistof TTF-1• Scoringscriteria: kern aankleuring
– Lever• geen nucleaire aankleuring (cytoplasmatische aankleuring in de hepatocyten werd aanvaard bij
gebruik van het antilichaam 8G7G3/1)
– Schildklier• sterke (nucleaire) aankleuring van alle folliculaire epitheelcellen (hoge expressor)
– Long• sterke (nucleaire) aankleuring van alle type II pneumocyten, Clara-cellen en basale cellen van
de bronchioli terminales (lage expressor: controle analytische sensitiviteit)
– Schildkliercarcinoom• matig tot sterke (nucleaire) aankleuring van bijna alle neoplastische cellen
– Long, plaveiselcelCa (controle specificiteit/sensitiviteit)
• Focaal zwakke (nucleaire) aankleuring neoplastische cellen
• Negatief wordt enkel aanvaard indien alle andere criteria voldaan zijn
– Long, atypisch carcinoïd (controle analytische sensitiviteit)
• minstens matige/sterke (nucleaire) aankleuring van de meeste neoplastische cellen
– Colon AdCa• geen nucleaire aankleuring (controle specificiteit)
Antistof TTF-1: overzicht
Optimaal Borderline
Dako 8G7G3/1 1/100 32’ 42°C ; CC1 64’ ; UV BMK UltraLeica SPT24 RTU 20’ 32°C ; TRS pH9 30’ ; Omnis
Antistof TTF-1: schildklier
Optimaal Borderlinenormaal
carcinoom
Antistof TTF-1: long
Optimaal Borderline
Antistof TTF-1: plaveiselcelCa
Optimaal
Borderline
Antistof TTF-1: long carcinoïd
Optimaal
Borderline
Antistof TTF-1
Leica SPT24 Ventana SP141 Dako 8G7G3/1
Leica SPT24 RTU 20’ 32°C ; TRS pH9 30’ ; Omnis Ventana SP141 RTU 32’ 36°C ; CC1 64’ ; BMK Ultra ultraView Dako 8G7G3/1 RTU 30’ RT ; TRS pH9 ; Dako Autostainer
Optimaal
Antistof TTF-1
Goed
Dako 8G7G3/1 RTU 10’ RT ; TRS pH9 ; Dako Autostainer
optimaal
zwak / populatie
lever
lever
1
3
2
1
23
3
1
4
4
Antistof TTF-1
Optimaal conc. AS
Leica SPT24 1/200 15’ RT ; pH9 20’ ; Leica BondIII
Optimaal RTU
Antistof TTF-1
Expected result NordiQC
Leica SPT24 ; TRS pH9 ; Dako Omnis
Optimaal RTU
Borderline
Resultaatbespreking TTF-1
• Algemeen
– n=66
Suff. 41 %
EKE 2019-2
NQC 2013
NQC 2016
n suff % suff % suff
optimaal 20 30%
41%
51% 43%
goed 7 11% 20% 71% 24% 67%
Borderline 39 59% 24% 23%
Onvoldoende 0 - 5% 10%
Resultaatbespreking TTF-1
• Opgesplitst per clone producent
– RTU: 30% optimaal ; suff. 39 %
n=57 Dako8G7G3/1
RTU
% suff
Ventana8G7G3/1
RTU
% suff VentanaSP141 RTU
% suff
LeicaSPT24
% suff.
n=23 n=10 n=20 n=4
optimaal 0 0% 0 0% 15 75% 2 50%
goed 1 4% 0 0% 4 20% 1 25%
borderline 22 92% 10 100% 1 5% 1 25%
onvoldoende 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
Totaal suff 4% 0% 95% 75%
NQC 2016 3% (n=31) geen optimaal
7% (n=16) geen optimaal
94% (n=50) 60% optimaal
100% (n=8) 88% optimaal
Resultaatbespreking TTF-1
• Opgesplitst per clone producent
– Concentrated: 33% optimaal ; suff. 44 %
n=9 Dako/Biocare8G7G3/1 conc.
% suff Leica/ImmunologicSPT24 conc.
% suff
n=4 n=5
optimaal 0 0% 3 60%
goed 0 0% 1 20%
borderline 4 100% 1 20%
onvoldoende 0 0% 0 0%
Totaal suff. 0% 80%
NQC 2016 0% (n=25) 88% (n=136)
Resultaatbespreking TTF-1
Besluit:• Slechts 41% geslaagd, merkelijk lager dan NQC
• Sterke expressor (schildklier en pneumocyten): geen probleem
• Resultaten RTU en conc. 100% afhankelijk van gebruikte clone
• SP141:
• Optimaal mogelijk met UV en OV
• ‘goed’ owv storende achtergrond
• Borderline owv % carcinoïd merkelijk kleiner ondanks amp. (AS tijd ½ )
• SPT24:
• goede clone (1 borderline: % carcinoïd merkelijk kleiner, protocol lijkt OK)
• Op alle platformen optimaal mogelijk
• 8G7G3/1: op alle platformen
• geen goede clone (lot onafhankelijk): slechts 4% geslaagd (zwak carcinoïd) %populatie te klein én te zwakke aankleuring longcarcinoïd bij negatief plaveiselcelCa
• Amplifier: 50%. Geen impact op resultaat
• >50% 8G7G3/1 en 30% SP141 <> NQC 52% SPT24 (Leica RTU/conc.)
In the last four TTF1 assessments, none of 259 submitted protocols based on the mAb clone 8G7G3/1 produced an optimal
staining despite protocol settings similar to those used for the mAb clone SPT24 or the rmAb clone SP141 as (Fig. 1 – Fig. 4).
The mAb clone 8G7G3/1 has thus shown to have a significantly lower affinity for TTF1 compared to the mAb clone SPT24
and the rmAb clone SP141.
Resultaatbespreking TTF-1
Besluit:• Controle
• 40% gebruikt controle
• Aanbevolen controle
• Long (normaal): columnair epitheel terminale bronchioli = lage expressor
• Long (normaal): pneumocyten en basale cellen terminale bronchioli = hoge expressor zo sterk mogelijk zonder cytopl. aankleuring sensitiviteit
• Lever: negatieve controle (cave clone 8G7G3/1) specificiteit
• Schildklier: enkel hoge expressor= niet aanbevolen (cave controle sensitiviteit)
• Initiële validatie TTF1:
• Includeren carcinoïde tumor (lage expressor) of long AdCa (lage/matige expressielevel)
• iCAPC: critical assay performance controls (bron NordiQC)
Hoge expressor=controle
op keuze juiste AS
lage expressor=controle op
sensitiviteitgeen expressie=controle op
specificiteit
EKE planning
Externe kwaliteitsevaluatie
EKE 2020-1 EKE 2020-2 EKE 2020-3 EKE 2021-1 EKE 2021-2 EKE 2021-3
ER / Her2 / PR reassess
2019-3
CD3 Chromo Desmin
PR / Her2 /ER reassess
2020-1
ER / Her2 / PR reassess
2020-3
CD117 panCK
E-Cadh.
PR / Her2 /ER reassess
2021-1
Rondzending coupes door Sciensano
17-21/02/2020 4-8/05/2020 14-18/09/2020 15-19/02/2021 3-7/05/2020 13-17/09/2020
Beoordeling panel03/2020
6/202010/2020 03/2021 6/2021 10/2021
Doorsturen individueelresultaat 05/2020
10/202011/2020
Resultaatbespreking / symposium Vr 29/05/2020 nvt ?
Doorsturen globaalrapport
06/2020 11/2020 12/2020
Golden sponsors Silver sponsors
Andere sponsors