GERMENES PIOGENES -...
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GERMENES PIOGENES
STAPHYLOCOCCUS: Staphylococcus aureus
• Factores de patogenicidad:
- Hemólisis (grado Variable)
- Coagulasa (+)
- Patógenos: no presente en flora normal
- Endotoxina
- Catalasa (-)
- Hialuronidasa: Otorga versatilidad, permite que se disemine por
todo el organismo (sangre, endocrino, articulaciones, huesos)
- Se adapta a cualquier medio, aerobio o anaerobio
- Produce shock tóxico y el síndrome de piel escalada en niños.
• Procedimiento para investigar su presencia
En condiciones de asepsia se obtiene la muestra problema
(sangre, líquido sinovial, secreciones de heridas, secreciones
mucosas, esputo) para luego:
1º Coloración GRAM: Los cocos son GRAM(+) y se trasladan al
Agar sangre, su fueron bacilos GRAM(-) se siembran en Agar Mc
ConKey.
2º Siembra de cultivo en Agar Sangre: Para hacer evidente sus
propiedades hemolíticas: (sangre de carnero 10%)
- α - Hemólisis: Es parcial e incompleta con la producción de
Biliverdina alrededor de la colonia (los estreptococos también
tiene esta propiedad)
- β- Hemólisis: Total con destrucción completa de los
eritrocitos, lo que forma un halo transparente alrededor de la
colonia.
Siembra de cultivo en Agar Chaptman: Es un medio selectivo
que contiene una elevada (7.5%) concentración de NaCl donde se
desarrollan estos microorganismos además de Manitol 1% e
indicador rojo de fenol.
Sirve para la diferenciación bioquímica por poseer manitol y un
indicador, el cual vira al calor amarillo si el manitol se metaboliza
Manitol(+) (S.aureus y algunas otras cepas) otorgándole acidez al
medio; si el metabolismo es básico, el indicador no vira Manitol(-).
3º Prueba de la Coagulasa (Confirmatoria) Se realiza en lámina
o en tubo (mejor)
- Se coloca 0.5 ml de plasma en las colonias con Agar Chaptman,
luego se incuba a 37ºC por 24 h, Si los resultados son positivos
Coagulasa (+) se trata del S. aureus, pero si son negativos se
trata del S. epidermidis, agente causal de bacteremia y
septicemia.
- No todas las cepas de S. auerus producen el factor de
agregación que provoca la aglutinación de los microorganismos
uniéndolos a través del fibrinógeno.
- La reacción debe leerse dentro de 10 seg. y la inclusión de un
control disminuiría el número de resultados falso positivos. Es
preferible el plasma de conejo, conecta o citrato, al plasma
humano, porque este puede contener sustancias que inhiben la
reacción.
Streptococcus
• Clasificación:
Grupo A: Causan faringitis, enfermedades de la piel,
endocarditis.
Muestra: secreción faríngea
Grupo B: Causan enfermedades neonatales, sepsis puerperal
Muestra: Neonato
Grupo C: Enterococo: Causa enfermedades de las vías
urinarias
Muestra: Orina
Viridans: Causante de endocarditis, caries dental
Muestra: Sarro dentario
S.pneumonae:Termina a diferencia del resto, en forma
lanceolada, causante de otitis, meningitis,
neumonía.
Muestra: sangre – secreciones
• Procedimiento para investigar su presencia: Todos se
diagnostican de igual manera, así que su identificación depende de
la muestra.
La muestra problema se obtiene en condiciones de asepsia y en
algunos casos se usa el Medio Thyoglicolato para transporte, el
cual es semisólido con una concentración pequeña de Agar donde
se pueden observar grumitos: “colonias” que no producen
turbidez.
Este medio contiene una sustancia queda potencial REDOX:
Rezasurim que permite un crecimiento selectivo de
microorganismos.
Anaerobios: Fondo
Facultativos: A lo largo del tubo (Streptococcus)
Microaerófilos: Cerca de la superficie
Aerobio: En la superficie de tubo.
1º Coloración GRAM: Cocos GRAM(+)
2º Cultivo en Agar Sangre: Donde van a crecer colonias
pequeñas y transparentes (streptococcus), pero también pueden
crecer otras colonias grandes, cremosas o no que son otros
microorganismos.
Pueden producir hemólisis α (viridans) o β (otros)
3º Prueba de la Catalasa: Se realiza en una lámina portaobjeto,
donde se realiza un extendido de una porción de colonia a la que
se le agrega 1 gota de H2O2 (3%)
Si la reacción es positiva es porque es inmediata la libración de
O2, pero si la muestra permanece homogénea, sin reacción,
entonces indica la presencia de estreptococos.
Medio Tioglicolato: Es un medio poco líquido, enriquecido previo al cultivo,
preferentemente para recuperar gérmenes en su mayoría. Este medio permite
el crecimiento tanto de Staphylococcus como streptococcus.
PRUEBA DE LA CATALASA
FORMACIÓN DE BURBUJAS EN EL TUBO DE ENSAYO
STAPHYLOCOCCUS
STREPTOCOCCUS
OBSERVACIÓN DE CLOSTRIDIUM Y BACILLUS
• Son bacilos Gram(+) formadores de esporas, por lo que son
ubicuos y pueden sobrevivir en estados adversos por muchos
años.
• La mayor parte de las especies de estos géneros no son
patógenos, pero existen varias especies que causan enfermedades
peligrosas en el ser humano.
• B. anthracis: Causante del Antrax. Son bacilos aerobios grandes
que forman cadenas (Estreptobacilo). Sus colonias son redondas y
tienen aspecto de vidrio esmerilado.
No son exigentes en cuanto a medio de cultivo. Licuan la gelatina
y crecen en el Agar Gelatina en forma de árbol de pino invertido
(Gelatina +); en el Agar Almidón son Amilasa (+) y en el Agar
nutritivo forman “cabellos de medusa” las cepas rugosas.
Producen zoonosis
La enfermedad de los animales afecta al hombre, existen 3 formas
de contagio, cutánea, digestiva e inhalatoria.
Factores de virulencia:
Cápsula de Acido Poli D-Glutámico (antifagocítica)
Toxina constituida por 3 proteínas: Antígeno protector (AP) factor
de edema (FE) y factor letal (FL).
• Clostridium tetani: Es un bacilo anaerobio grande, grampositivo,
su hábitat natural es el suelo. Forman esporas terminales
deformantes adquiriendo la forma de “palillo de tambor”.
Sin difíciles de cultivar in Vitro por lo que se requiere del medio
Loffler para su cultivo (mas adecuado con suero de caballo)
aunque también se puede realizar en Agar Sangre.
Son catalasa (-) y realiza sus reacciones metabólicas sólo en un
medio reductor, razón por la cual en el medio Tarozzi (caldo
glucosado + carne molida) producen un olor fétido por la
descomposición de la carne.
Clostridium botolinum: Produce toxinas A,B (en la carne), Cα, Cβ,
D, E, (en el pescado), F y G.
Clostridium difficile: Para su identificación, es necesario un
diagnóstico diferencial con Shigella y E. coli enterohemorrágica.
Corynobacterium diphtheriae: Es pleomórfico (formas muy
variadas).
Bacillus anthracis
Clostridium tetani
AGENTES QUE PRODUCEN ENFERMEDADES
GASTROINTESTINALES
“ENTEROBACTERIAS”
• Se transmiten vía fecal-oral.
• Se deben al mal saneamiento ambiental, falta de higiene personal
y por el hacinamiento. Todos son oxidasa negativo.
CLASIFICACIÓN
1. Toxoinfecciones: Por S. aureus, Clostridium botulinum, C
perfringes, Bacillus cereus.
2. Enfermedades diarreicas no inflamatorias: Causadas por E.
coli, enterotoxigénica, Salmonella ententidis (mayonesa), Vibrium
cholerae (no es enterobacteria). No existen leucocitos en las
heces.
Enterotoxina: Provoca alteración de los electrolitos y este
desbalance produce que los microorganismos sean eliminados por
EDA.
Inóculo: 108 gérmenes/ml o más.
Enfermedad Diarreica Inflamatoria
• Si afecta el tacto gastrointestinal alto: vómitos, náusea, sin
fiebre.
• Si afecta tracto gastrointestinal bajo: diarrea, dolo abdominal,
fiebre.
3. Disentería: Afecta mucosa del intestino grueso produciendo daño
y eliminación de la misma junto con sangre.
Agentes: Shigella dysenteri, E. coli enteroinvasiva o algunos
parásitos.
4. Fiebre entérica: Causada por Salmonella typhi, la que ingresa de
la misma manera que la Shigella, pero atraviesa la mucosa y pasa
a la sangre (Bacteremia), luego afecta al hígado y se instala en el
tejido biliar (circulación enterohepática) para eliminarse en heces
y orina (poco).
Muestra: Mielocultivo (LCR de médula espinal)
(+) al tercer día.
• Coprocultivo (heces)
(+) a los 15 días
• Hemocultivo (sangre)
(+) a la segunda semana
• Serología:
Hallazgo de Ab en la primera semana (Ab O y Ab H)
“Prueba de Widal”
Todos los cultivos deben hacerse bajo condiciones estériles.
• Para un mielocultivo se puede transportar el LCR en un medio
estéril.
• Para el coprocultivo es más conveniente que la muestra se
obtenga de un Hisopado rectal para transportarla en el medio
Cary Blair o en solución salma estéril, luego se debe descartar
diarrea inflamatoria por la ausencia de moco, sangre o
leucocitos.
• Para realizar un hemocultivo es necesario que la sangre sea
procesada de inmediato, después de obtener la muestra,
evitando que ésta se coagule. El uso de anticoagulantes puede
interferir con los resultados.
PROCEDIMIENTO PARA EL ANÁLISIS DE LA MUESTRA
1. Sembrar en un medio selectivo para los agentes que
producen enfermedades gastrointestinales: Mc Conkey; que
por su contenido de sales biliares inhibe el crecimiento de
cocos (grampositivos), además es un medio de diferenciación
bioquímica por su contenido de lactosa y del indicador rojo
neutro para identificar a las bacterias fermentadoras de este
carbohidrato.
• Lactosa (+) (E. coli y Klebsiella)…Colonias de color fucsia
• Lactosa (-) Salmonella, Shiguella, Proteus vulgaris y
Vibrium cholerae (No enterobacteria)…Colonias de color
cremoso claro hasta amarillo.
2. Prueba de diferenciación bioquímica más completa; para lo
cual cogemos con el asa Pasteur una muestra de la colonia, la
introducimos hasta el fondo del tubo de ensayo con el medio
indicado y hacemos estrías en la parte superior.
Agar hierro tres azúcares (TSI): Medio en el que la
fermentación de lactosa en la parte superior (pico de flauta),
de la sacarosa en la parte intermedia y de glucosa en el fondo
(en condiciones anaerobias) da lugar a la producción de
ácidos que se detecta por cambios de color de Rojo fenol
hacia amarillo o la alcalinización mantenimiento un color rojo.
Los azúcares se distribuyen según el peso molecular.
El tiosulfato sódico que contiene se reduce a Acido
sulfhídrico, el cual reacciona con una sal de hierro dando lugar
al sulfuro de hierro de color negro.
La presencia de cavidades en el medio se deben a la
formación de CO2.
Agar Lisina Hierro (LIA): Permite evidenciar
descarboxilación y desaminación de Lys, también la
producción H2S; mediante el viraje del indicador Púrpura de
Bromocresol que en reacción ácida da color amarillo y en
reacción alcalina, color púrpura; y por la formación de sulfato
ferroso de color negro.
Aquellas enterobacterias que no poseen enzimas producen
una pendiente alcalina y una base, ácida.
Descarboxilación Desaminación
CO3 NH2 H+
pH pH
Es posible introducir un papelito impregnado con
paradimetilaminobenzaldehido (reactivo de KOVAC) en el tubo de
ensayo, sin entrar en contacto con el agar, para evidenciar el uso del
Trp: Prueba del Indol.
Además, para la identificación de enterobacterias se les puede
mocular en tubos con caldo glucosado-lactosado, rojo fenol y
campana de Durham, para evidenciar su capacidad de producir
ácido y gas a partir de azúcares; incluso inocularlas en calcio
peptonado – triptonado agregándole luego 4 gotas de reactivo de
KOVAC’S: paradimetilamino benzaldehído + alcohol amílico que eleva
hacia la superficie el compuesto con indol para que se haga evidente
la reacción.
CAMPANA DE DURHAM
Al examen sexológico de S. typhi en una muestra, si se aglutina el
AgH indica presencia de Ab de una enfermedad pasada y si lo hace el
Ag O indica presencia de la enfermedad, mas no el estadío.
Reacciones:
Escherichia coli
Indol Positivo
Glucosa: +
Lactosa: +
Descarboxilación +
pH: ácido
Gas: positivo
Salmonella typhi
Indol negativo
Glucosa: +
Descarboxilación +
pH: ácido
Gas: negativo
Shiguella
Indol positivo variable
Glucosa: +
Lactosa:-
pH: ácido
Gas: negativo
Vibrium cholerae
Indol positivo
Lactosa: -
Glucosa: +
Descarboxilación +
pH: ácido
Gas: negativo
Kleibsella
Lactosa: +
Glucosa: +
Gas: abundante
Proteus
Producción de hierro
Total alcalinidad
Vibrium cholerae:
- Agente causal del cólera.
- No invade todo el tejido intestinal.
Serotipos : Ogawa , Inaba e Hikojina
Biotipos: El Tor, Clásico (más severo)
PROCEDIMIENTO PARA SU IDENTIFICACIÓN
Obtención de la muestra: heces o hisopado rectal, este último se
coloca en el medio de transporte Cary Blair.
Sembrado en un medio de cultivo: se utiliza el medio TCBS
(Tiosulfato, Citrato, Bilas Sacarosa) que es selectivo, de color verdoso
por contener verde de Malaquita que inhibe el crecimiento de hongos
y grampositivos. Indicador: Azul de Bromotimol.
El inóculo después de 4 horas forma colonias que por fermentar la
sacarosa toman el color amarillo y por no fermentar lactosa en medio
Mc Conkey se ven incoloras.
Crecimiento en medio de MacConkey: Es un medio selectivo para
un grupo amplio de microorganismos, las enterobacterias, por su
contenido en sales biliares, y diferencial por permitir distinguir entre
microorganismos lactosa positivos y lactosa negativos. Contiene un
indicador de pH que vira a rosa fucsia en medio ácido (lactosa
positivos) y a amarillo en medio básico (lactosa negativos) ,
inicialmente es rojo. Se utiliza en placas.
TCBS es un medio selectivo para el aislamiento de Vibrio Cholerae,
ya que este medio contiene sales biliares que inhiben en crecimiento
de enterococos. El tiosulfato se sodio como fuente de azufre y la
sacarosa como fuente de carbohidrato fermentado por los Vibrios
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS:
String Test.- Se obtiene una muestra, usando el asa bacteriológica
del medio TSI y se coloca en una lámina portaobjeto, junto con
Desoxicolato de Sodio. Luego se mueve el preparado sin levantar el
asa por un momento, si al levantarla se forma un cordón (+) se trata
de V. cholerae.
• Es oxidasa positivo (toma un color grosella) en comparación con
las enterobacterias que son negativas (la solución no cambia de
color).
• El biotipo, serotipo y serogrupo son determinadas por pruebas
serológicas.
¿Cómo obtener una muestra de orina?
- Debe tomarse en condiciones de asepsia (buena limpieza)
- Recoger la primera orina de la mañana o después de 4 horas de
retención.
- Separar labios mayores / recoger el prepucio del pene.
- Recoger el chorro intermedio de la orina.
PROCEDIMIENTO PARA EL ANÁLISIS DE LA MUESTRA
1° Coloración GRAM para identificar la presencia de cocos (+) o
bacilos (-)
2° Siembra en Agar sangre si se trata de cocos; o en Agar Mc
Conkey y a la vez 1/10 se esparce en Agar nutritivo, el primero
para saber que bacteria es y el último en 24 horas se hace
conteo de las unidades formadoras de colonias en los 4
cuadrantes y se halla su concentración mediante la siguiente
formula:
mlUFCcuadrantes
cuadranteUFC/
4:#dilución x placa la de Area x /
=∑
Área: πr2 π = 3.14 Dilución: Si es una ⇒ x 10
r = 4.5 son 2 ⇒ x 100
son 3 ⇒ x 1000
3° Evaluar los resultados
Si tiene: 102 UFC/ml, en un varón sintomático ⇒ Infección
103 UFC/ml, en una mujer sintomática ⇒ Infección
104 UFC/ml, en un paciente asintomático⇒Infección
105 a mas UFC/ml, indica mala manipulación de la
muestra o que la persona no se realizó bien la higiene,
por lo tanto es necesario TOMAR OTRA MUESTRA.
MEDIO SS: selectivo para salmonella y shigella; contiene
inhibidor del desarrollo de coliformes; verde brillante,
además de rojo neutro y agar nutritivo.
Mycobacterium
Características.-
• Bacilos aeróbicos, no móviles ni esporulados; con una pared
celular en lípidos (hidrofóbica) lo que los hace resistentes a
muchos desinfectantes y colorantes: Gram – Giemsa
• Resistentes a decoloración con soluciones ácidas (Acido
resistente).
• Dado que su pared celular es muy compleja, la mayoría crece
con lentitud (18 – 24 horas).
Clasificación.- En 3 grupos:
Fotocromógenas: Producen un pigmento de color amarillo-naranja
cuando se cultiva en medio Lowenstein-Jensen y al ser sometidos a
luz intensa.
No fotocromógenas: en presencia de luz no cambian de color: M.
intracellulare y M.aurum → Ambos forman un complejo importante
para producir enfermedades en pacientes con SIDA aunque no tan
severas como la producida por el M. tuberculosis.
De crecimiento rápido.- En el medio Lowensten-Jensen producen
el mismo color que el M. tuberculosis; pero se diferencian de este
que se replica cada 18 - 22 h y se necesita esperar 15 – 30 días para
evidencia colonias en un cultivo.
Medio Lowenstein - Jensen: Esta altamente enriquecido con
huevo, proteínas papa (≈menú), además con VERDE DE MALAQUITA
que inhibe el crecimiento de otros microorganismos.
• Mycobacterium tuberculosis.-
- Forma copoide o bacilo
- No se decolora con alcohol: bacilo ácido – alcohol resistente
(BAAR).
- Posee una capa lipídica muy gruesa con un componente
propio: 6,6 dinicolato de trehalosa que constituye el principal
factor de virulencia: ANTIFAGOCITICO
- Agrupación de manera paralela ≈ cordones
Dx.-
- Baciloscopia (cultivo) la mas importante prueba
- Radiografía del tórax
- Antibiograma (útil)
- Prueba de Elisa (altamente sensible, pero inespecífico ⇒
puede ser falso positivo)
• Muestra para Baciloscopia
Condiciones:
Puede ser sangre, esputo, orina, líquido sinovial, LCR (color
transparente - cristalino ≈ enfermedades virales, pero con otras
bacterias se pone turbio)
- Debe realizarse en un recipiente esteril (de primer uso),
de boca ancha con tapa.
- De preferencia el primer esputo matutino y en caso de
orina se le recolecta por 24 h.
- Luego llevar de inmediato al laboratorio de preferencia se
realiza un misterio seriado (por varios, 4 días)
En el laboratorio:
1° Se destruye la mucosa con HCl ⇒ diluye el moco y libera
la bacteria, pero como se produce un medio ácido es
necesario neutraliza con NaOH IN hasta obtener un pH
neutro.
Las láminas deben ser nuevas para evitar falsos positivos.
a) Fijar bien al calor.
b) Cubrir el frotis con fucsina de Zietil (básica)
c) Calentar suavemente el mechero para disolver el lípido
(dimicolato de trehalosa) hasta que desprenda vapor por
3 veces consecutivas ⇒ penetra el colorante y da a las
bacterias el color fucsia.
d) Eliminar el colorante con agua corriente, luego decolorar
con una solución de Alcohol-Ácido (alcohol 95%, 4Cl
3%) hasta que ya no desprenda más colorante el
preparado. Lavar luego con agua corriente.
e) Agregar al frotis el colorante del contraste, azul de
f) metileno, dejando actuar por 1 min, los microorganismos
que no son mycrobacterias se clorean de azul.
g) Lavar, secar y observar al microscopio con lente de
inmersión.
Mycobacterium tuberculosis
Con la observación microscópica no e determina la
especie, solo el género, pues para ello es necesario
cultivar la bacteria.
“A la desnutrición es un factor muy importante para el
contagio”.
• Factor cordón.- para obtenerlo es necesario cultivar M.
tuberculosis en medio líquido, sin agar (medio base: Lowenstein-
Jensen) al que se le puede agregar sangre.
Procedimiento:
- Frotis en lámina
- Introducir la mitad en el medio de cultivo
- Incubar a 37°C por 7 días en una estufa, para favorecer
el desarrollo.
- Realizar coloración Z – N y observar al microscopio.
Historia natural de la tuberculosis en un individuo
- Tuberculosis bacilífero
- Inhalación de bacilos
- Inflamación pulmonar inespecífica, debido a que el
Mycobacterium tuberculosis tiene muchos antígenos y es
de virulencia variable.
- Fagocitosis de bacilos por macrófagos alveolares.
- Transporte a ganglios hiliares (vía linfática)
- Bacteremia
- Siembras orgánicos posprimarias.
Infecciones del Tracto Genito-Urinario
Neisseria gonorrehoeae
- Diplococo gramnegativo.
- Cultivado en Agar chocolate o en medio Thayer-Martin, colonias
pequeñas.
- Fermentan solo glucosa.
- Antigénicamente heterogéneo, capaz de cambiar su estructura
para evitar defensa del huésped.
Gonorrea: ETS, ITU
Sintomatología:
- Disurea: Sensación de ardor al miccionar en variones,
vulgarmente el infectado dice que se quemó.
- Flujo uretral: Moco en varones, en mujeres exudado semejante
a descenso (asintomático)
Diagnóstico: Gram de secreción uretral
Tratamiento:
- Penicilina a dosis elevadas o de 24000/1 dosis
- Gentamicina 280 mg/1 dosis
- Tetraciclina
- Doxicilina
- Roxocina
Complicaciones:
- Varones: Proceso inflamatorio crónico, uretritis que puede
producir infertilidad por estenosis uretral, en la que dificulta la
salida de orina y mucho más del semen.
- Mujeres: Enfermedad pélvica inflamatoria, ooforitis o
infertilidad por estenosis tubárica que impide que el óvulo
pueda ser fecundado. Además, conjuntivitis gonocócica
neonatal.
Gardnerella vaginalis
- Forma variada: cocobacilo
- Tinción inespecífica
- Infecta células del aparato genitourinario femenino.
- Causa principal de vaginosis bacteriana
Sintomatología:
- Disuria, menor que con Neisseria.
- Dispaurenia, dificultad para el coito.
Signo especial:
- Secreción vaginal con olor fétido a pescado, por presencia de
aminas.
Diagnóstico:
- Gram de secreción vaginal con el hallazgo específico de
CÉLULAS CLAVE.
Tratamiento: Metronidazol