7/16/2019 G13kha

1/32

AKTIVITAS INHIBISI XANTIN OKSIDASE OLEH EKSTRAK

AIR DAN ETANOL ANTING - ANTING (Acalypha indicaL.)

KHAIRRUNNISA

DEPARTEMEN BIOKIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR2013

7/16/2019 G13kha

2/32

7/16/2019 G13kha

3/32

ABSTRAK

KHAIRRUNNISA. Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan

Etanol Anting-anting (Acalypha indica L.). Dibimbing oleh ANNA P ROSWIEMdan WARAS NURCHOLIS

Penyakit gout merupakan suatu penyakit akibat terjadinya penimbunan

kristal mononatrium urat di dalam tubuh sehingga menyebabkan nyeri sendi

(arthritis gout). Anting-anting merupakan tanaman obat asli Indonesia yang biasa

digunakan untuk menurunkan kadar asam urat dalam tubuh. Tujuan dari

penelitian ini adalah mengidentifikasi kandungan fitokimia, menguji aktivitas

sitotoksik, dan inhibisi enzim xantin oksidase secara in vitro oleh ekstrak air dan

etanol anting-anting (Acalypha indica L.). Dalam penelitian ini, pada ekstrak air

dan etanol anting-anting dilakukan uji fitokimia dengan metode Harborne, uji

sitotoksisitas dengan metodeBrine Shrimp Lethality Test(BSLT), dan uji inhibisienzim xantin oksidase secara dengan metode spektrofotometri. Uji fitokimiaekstrak air dan etanol anting-anting, masing-masing memperlihatkan adanya

senyawa flavonoid, tanin, saponin, alkaloid dan steroid. Hasil analisis probit

ekstrak air dan etanol dari anting-anting menunjukkan nilai konsentrasi letal 50

(LC50) masing-masing sebesar 446.619 dan 159.629 ppm. Penghambatan xantin

oksidase tertinggi dilakukan oleh ekstrak air 450 ppm sebesar 66.78%, ekstrak

etanol 150 ppm sebesar 65.84%, dan alopurinol 150 ppm sebesar 74.09%. Ekstrak

etanol anting-anting 150 ppm berpotensi sebagai bahan herba untuk alternatif

pengobatan asam urat.

Kata kunci : xantin oksidase, asam urat, anting-anting, inhibisi

7/16/2019 G13kha

4/32

7/16/2019 G13kha

5/32

ABSTRACT

KHAIRRUNNISA. Xantin Oxidase Inhibitory Activity by Water and Ethanol

Extract ofAnting-anting (Acalypha indica L.). Under the direction of ANNA PROSWIEM and WARAS NURCHOLIS

Gout is a disorder in which sodium urate crystals are deposited in and aroud

joints. Anting-anting is an original plant of Indonesia that often used in gout

therapy The aim of this research for identify phytochemical contents, testing

cytotoxic activity and xanthine oxidase inhibition test by water and ethanol extract

of anting-anting. In this research, it committed phytochemical test by Harborne

Method, cytotoxic test by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), and inhibition test

of xanthine oxidase activity by spectrofotometry method. The phytochemical

assay result of water and ethanol extract ofanting-anting, each of them showed us

an existing flavonoid, tannin, saponin, alkaloid and steroid compound. The resultof probit analysis of the water and ethanol extract of anting-anting indicated thelethal concentration value 50 (LC50) respectively 446.629 and 156.629 ppm.

Highest inhibition by water extract 450 ppm as 66.78%, ethanol extract 150 ppm

as 65.84%, and allopurinol 150 ppm as 74.09%. Ethanol extracts ofanting-anting

still can said to be potential as inhibitor of xantin oksidase and can be use as anti

uric acid herb.

Keywords : xanthine oxidase, gout, anting-anting, inhibition

7/16/2019 G13kha

6/32

7/16/2019 G13kha

7/32

AKTIVITAS INHIBISI XANTIN OKSIDASE OLEH EKSTRAK

AIR DAN ETANOL ANTING - ANTING (Acalypha indicaL.)

KHAIRRUNNISA

Skripsi

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelarSarjana Sains pada

Departemen Biokimia

DEPARTEMEN BIOKIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR2013

7/16/2019 G13kha

8/32

7/16/2019 G13kha

9/32

Judul Skripsi : Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan Etanol

Anting-anting (Acalypha indica L.)Nama : Khairrunnisa

NIM : G84080069

Disetujui,

Komisi Pembimbing

Dr. Anna P Roswiem, MS

Ketua

Waras Nurcholis, S. Si, M. Si

Anggota

Diketahui,

Dr. Ir. I Made Artika, M.App. Sc

Ketua Departemen Biokimia

Tanggal lulus :

7/16/2019 G13kha

10/32

7/16/2019 G13kha

11/32

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas rahmat dan

pertolongan-Nya penulis dapat menyelesaikan penelitian ini. Penelitian ini

berjudul Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan Etanol Anting-

anting (Acalypha indica L.). Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari

sampai dengan Mei 2012 di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka.Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr. Anna P Roswiem, MS

dan Bapak Waras Nurcholis S.Si, M.Si selaku komisi pembimbing atas segalakesabaran dan keikhlasan dalam memberikan bimbingan, arahan, dan masukan

bagi penulis. Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada seluruh staf

Biofarmaka, khususnya Bu Nunuk, Bu Ina, Bu Wiwi, Mas Endi, Mas Nio, dan

Pak Zaim atas bantuan dan arahannya selama melakukan penelitian. Terima kasih

pula penulis ucapkan kepada keluarga, teman-teman Biokimia 45, Sofi, Elsha,

Eka, Wulan yang telah memberikan semangat dan masukannya untuk penelitian

ini. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat dan mampu meningkatkan imandan taqwa kita kepada Tuhan pencipta alam semesta.

Bogor, Januari 2013

Khairrunnisa

7/16/2019 G13kha

12/32

7/16/2019 G13kha

13/32

RIWAYAT HIDUP

Khairrunnisa dilahirkan di Bogor pada tanggal 10 April 1990 dari Ayah

Syamsurizal dan Ibu Aam Aminah. Penulis merupakan anak pertama dari tiga

bersaudara. Penulis menyelesaikan pendidikan jenjang menengah atas di SMA

Negeri 1 Leuwiliang pada tahun 2008. Pada tahun yang sama penulis melanjutkan

pendidikan jenjang perguruan tinggi di Institut Pertanian Bogor (IPB) melaluijalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI IPB). Penulis diterima sebagai

mahasiswa Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu PengetahuanAlam IPB. Pada tahun 2011 penulis melaksanakan kegiatan praktik lapangan di

Balai Lingkungan Pertanian dengan karya ilmiah berjudul Mikrob Tanah Sebagai

Pendegradasi Klorpirifos Dalam Tanah. Penulis dan kawan-kawan mendapat dana

program kreativitas mahasiswa bidang penelitian pada tahun 2011 dengan judul

Inhibisi Xantin Oksidase secara In Vitro oleh Ekstrak Suruhan (Peperomia

pellucida (L.) Kunth) dan dengan judul yang sama kami berhasil menjadi salah

satu peserta PIMNAS XXV di Yogyakarta. Di bidang organisasi, penulis jugapernah menjadi anggota pengurus himpunan profesi Community of Research and

Education in Biochemistry (CREBs) pada periode 2010/2011.

7/16/2019 G13kha

14/32

7/16/2019 G13kha

15/32

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL ........................................................................................... ix

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... ix

PENDAHULUAN ............................................................................................ 1

TINJAUAN PUSTAKA..................................................................................... 1

Anting-anting ............................................................................................... 1

Asam Urat .................................................................................................... 2Xantin Oksidase ........................................................................................... 3

Alopurinol .................................................................................................... 4

Uji Sitotoksisitas denganBrine Shrimp Lethality Test(BSLT) ...................... 4

BAHAN DAN METODE ................................................................................. 4

Bahan dan Alat ............................................................................................. 4

Metode Penelitian ......................................................................................... 5

HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................................... 6

Kadar Air ..................................................................................................... 6

Ekstrak Air dan Etanol Anting-anting ........................................................... 6Fitokimia Ekstrak air dan etanol Anting-anting .............................................. 7

Sitotoksisitas pada Larva Udang .................................................................... 7

Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan Etanol .................... 8

SIMPULAN DAN SARAN .............................................................................. 9

Simpulan ...................................................................................................... 9

Saran ............................................................................................................ 9

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 9

LAMPIRAN ................................................................................................... 13

7/16/2019 G13kha

16/32

7/16/2019 G13kha

17/32

DAFTAR TABEL

Halaman

1 Rendemen ekstrak air dan etanol anting-anting ........................................ 72 Kandungan fitokimia ekstrak air dan etanol anting-anting ....................... 73 Nilai LC50 ekstrak air dan etanol anting-anting ....................................... 84 Daya inhibisi ekstrak air dan etanol anting-anting terhadap enzim xantin

oksidase .................................................................................................. 8

DAFTAR GAMBAR

Halaman1 Tanaman anting-anting ........................................................................... 22 Lintas katabolisme nukleotida purin ....................................................... 33 Pengubahan xantin menjadi asam urat ................................................... 34 Mekanisme inhibisi xantin oksidase oleh alopurinol .............................. 4

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1 Diagram alir penelitian ......................................................................... 142 Prosedur ekstraksi ................................................................................. 153 Kadar air simplisia anting-anting .......................................................... 164 Rendemen ekstrak anting-anting ........................................................... 165 Fitokimia anting-anting......................................................................... 176 Uji sitotoksik menggunakan larva udangA. salina ................................ 187 Hasil perhitungan analisi probit ............................................................ 198 Uji aktivitas inhibisi xantin oksidase ..................................................... 199 Pembuatan kurva standar xantin ........................................................... 2010 Data hasi uji enzimatis ekstrak anting-anting ........................................ 2111 Analisis statistika inhibisi xantin oksidase oleh ekstrak air dan etanol

anting-anting ......................................................................................... 23

7/16/2019 G13kha

18/32

7/16/2019 G13kha

19/32

PENDAHULUAN

Penyakit asam urat (gout) sudah dikenal

sejak 2000 tahun yang lalu dan menjadi salahsatu penyakit tertua yang dikenal manusia.Prevalensi artritis pirai pada populasi di USA

diperkirakan 13.6/100000 penduduk,sedangkan di Indonesia sendiri diperkirakan1.6-13.6/100000 orang, prevalensi ini

meningkat seiring dengan meningkatnya umur(Tjokroprawiro et al. 2007).

Tingginya kadar asam urat dalam darahpada penderita gout maupun hiperurisemiadiakibatkan oleh faktor produksi asam uratberlebihan, obesitas, diabetes yang disertai

dengan tekanan darah tinggi (Utami et al.2009). Asam urat merupakan hasil akhirkatabolisme purin dalam tubuh. Pada kondisi

patofisioligis dapat terjadi peningkatan kadarasam urat dalam darah melewati batas normal,yang disebut hiperurisemia (Edward 2001).

Obat sintetik yang biasa dikonsumsi untukmengobati asam urat adalah alopurinol.Alopurinol merupakan obat medis yang

digunakan untuk menghambat kerja enzimxantin oksidase. Namun penggunaan obat inimemberikan efek samping, seperti reaksi

alergi kulit, nyeri kepala, serta kerusakan hatidan ginjal (Tjay et al. 2002).Oleh karena itu,perlu obat alternatif yang memiliki aktivitas

pengobatan lebih baik dan efek samping yang

rendah.Penelitian penghambat aktivitas xantin

oksidase telah banyak dilakukan padaberbagai tanaman obat yang berpotensisebagai obat antigout. Penelitian yang

dilakukan Kong et al. (2000) melaporkanbahwa ekstrak metanol Cinnamomum cassia,Chrysanthemum indicum, dan Lycopus

europaeus memiliki aktivitas menghambatxantin oksidase lebih besar dari 50%.Senyawa 6-aminopurin yang berasal dari daungandum memiliki daya inhibisi yang kuat

dengan nilai IC50 10.89 M (Hsieh et al.

2007). Hasil penelitian Iswantini danDarusman (2003) menunjukkan peran ekstrakkasar flavonoid herba sidaguri sebagaipenghambat aktivitas xantin oksidase dengan

daya inhibisi terkuat bila dibandingkandengan produk jamu komersial antigoutlainnya yang beredar di pasaran. Kemampuan

ekstrak kasar flavonoid sidaguri sebagaipenghambat aktivitas xantin oksidasemencapai 55.29% melalui mekanisme inhibisikompetitif (Hidayat 2007).

Anting-anting, merupakan gulma yangsangat umum ditemukan tumbuh liar di

pinggir jalan, lapangan rumput, maupun di

lereng gunung (Muslimah 2008). Tanaman inidigunakan oleh masyarakat Indonesia dalamterapi antigout. Hasil penelitian Kartika

(2004), menunjukkan bahwa tanaman anting-anting (Acalypha indica L.) mengandung

saponin, tanin, flavonoid, acalyphine, danminyak atsiri. Kandungan senyawa flavonoiddan alkaloid berpotensi mampu menghambatxantin oksidase (Milian et al. 2004). Namun,kajian ilmiah tentang potensi anting-anting

sebagai inhibitor enzim xantin oksidase belumbanyak dilakukan. Oleh karena itu pada

penelitian ini akan digali potensi ekstraktanaman Anting-anting (Acalypha indica L.)sebagai alternatif obat untuk mengatasi

penyakit asam urat.Tujuan dari penelitian ini adalah

mengidentifikasi kandungan fitokimia,

menguji aktivitas sitotoksik, dan inhibisienzim xantin oksidase secara in vitro olehekstrak air dan etanol anting-anting (Acalypha

indica L.). Hipotesis penelitian ini adalahsenyawa bioaktif dari ekstrak air dan etanoltanaman anting-anting (Acalypha indica L.)

memiliki potensi sebagai inhibitor enzimxantin oksidase. Penelitian ini dilakukanuntuk memberi informasi ekstrak air dan

etanol anting-anting (Acalypha indica L)dapat digunakan sebagai obat alternatifpenyakit gout.

TINJAUAN PUSTAKA

Anting-anting (Acalypha indicaL.)

Anting-anting (Gambar 1) merupakangulma yang sangat umum ditemukan sebagai

tumbuhan liar di pinggir jalan, lapanganrumput maupun lereng gunung. Herbasemusim, tegak, tinggi 30-50 cm, bercabang.

Helaian daun berbentuk bulat telur sampailanset, tipis, ujung dan pangkal runcing, tepibergerigi, panjang 2-8 cm, lebar 1,5- 3,5 cm,

berwarna hijau, bunga majemuk, berkelamin

satu, keluar dari ketiak daun, kecil-kecildalam rangkaian berbentuk bulir, buahnyakotak, bulat, hitam. Biji bulat panjang,berwarna coklat. Akarnya tunggang, berwarnaputih kotor. Anting-anting ini dapat

diperbanyak dengan biji (Dalimartha 2006).Anting-anting termasuk dalam divisi

Spermatophyta, subdivisi Angiospermae,

kelas Dicotyledoneae, ordo Euphorbiales,family Euphorbiaceae, genus Acalypha, danspesies Acalypha indica L. (Kartesz 2000).Herba anting-anting ini memiliki berbagai

nama diantaranya ceka mas (Melayu), lelatang,

kucing-kucingan, rumput kekosongan (Sunda),

7/16/2019 G13kha

20/322

7/16/2019 G13kha

21/32

rumput bolong-bolongan, anting-anting (Jawa)(Dalimartha 2006).

Daun, batang, dan akar tanaman ini

mengandung saponin dan tanin. Batangnyajuga mengandung flavonoid dan daunnya

mengandung minyak atsiri. Bagian yangdigunakan adalah seluruh bagian tumbuhansebagai obat, baik dalam bentuk kering atausegar. Herba ini bermanfaat sebagaiantiradang, antibiotik, diuretik, pencahar, dan

penghenti pendarahan (Dalimartha 2006).Penelitian yang telah dilakukan berkaitan

dengan tanaman anting-anting antara lainpenelitian Hermawan (2002) mengatakanbahwa rebusan akar anting-anting memiliki

aktivitas hipoglikemik yang lebih besardibandingkan obat pembanding (Daonil) padatikus Sprague dawley yang dinduksi aloksan.

Menurut Armansyah et al (2010), ekstraketanol daun Acalypha indica L. berpotensisebagai hepatoprotektif. Ekstrak dengan dosis

50, 100, dan 200 mg/ kg bb dapat menurukankadar SGPT dan SGOT pasca pemberianparasetamol.

Gambar 1 Tanaman anting-anting

Asam Urat

Asam urat termasuk asam lemah danmerupakan kristal putih yang tidak berbau,

tidak berasa, dan sangat sukar larut dalam air(Price & Wilson 2006). Menurut Wisesa danSuastik (2006), asam urat diketahui memiliki

fungsi sebagai antioksidan dan mungkinmerupakan antioksidan yang paling pentingdalam plasma dengan kontribusi sampai 60%

dari seluruh aktivitas pembersihan radikalbebas dalam serum manusia.

Urat yakni bentuk asam urat yang larutdalam darah dapat menangkap superoksida,radikal hidroksil, oksigen tunggal dan jugamempunyai kemampuan untuk kelasi logam-

logam transisi (Johnson et al. 2003). Namundemikian asam urat juga bersifat prooksidatifpada kondisi tertentu, khususnya bila

antioksidan lain berada dalam level yangrendah. Diketahui asam urat dapatmerangsang oksidasiLow Density Lipoprotein(LDL) in vitro yang merupakan langkah kunci

dalam progresivitas arterosklerosis. Efek

merusak asam urat pada sel endoteldiperkirakan melalui aktivasi leukosit danterdapat korelasi yang konsisten antara

peningkatan konsentrasi asam urat denganmarker inflamasi di sirkulasi (Johnson et al.

2003).Gout didefinisikan sebagai penyakit atau

sindrom yang disebabkan oleh adanyapembengkakan atau inflamasi karenamenumpuknya kristal mononatrium urat pada

tulang sendi sebagai akibat dari tingginyakadar asam urat dalam darah (Johnstone

2005). Penyakit asam urat umumnyamenyerang lebih banyak laki-laki daripadaperempuan. Perempuan memiliki hormon

estrogen yang ikut membuang asam uratmelalui urin (Mansjoeret al. 2004). Pada laki-laki, sebelum pubertas kadarnya sekitar 3.5

mg/dL. Setelah pubertas, kadarnya meningkatsecara bertahap dan dapat mencapai 5.2mg/dL (Price & Wilson 2006). Pada

perempuan kadar asam urat biasanya tetaprendah, baru pada usia pramenopausekadarnya di dalam darah rata-rata sekitar 4

mg/dL. Setelah menopause, kadarnyameningkat lagi sampai 4.7 mg/dL.Hiperurisemia adalah peningkatan kadar asam

urat serum di atas nilai normal, pada laki-lakidi atas 7 mg/dL dan pada perempuan di atas 6mg/dL (Price & Wilson 2006). Hiperurisemiadapat menimbulkan penyakit gout

(Dalimartha 2006).Nukleotida purin, di dalam tubuh manusia

akan diuraikan melalui suatu lintasmetabolisme yang ditunjukkan oleh Gambar2. Pelepasan gugus fosfat pada adenosin mono

fosfat (AMP) dilakukan oleh enzim5nukleotidase. Adenilat menghasilkanadenosin, yang kemudian mengalamideaminasi menjadi inosin. Inosin kemudian

dihidrolisis menghasilkan basa purinhipoxantin dan d-ribosa. Hipoxantindioksidasi berturut-turut menjadi xantin dan

kemudian asam urat oleh xantin oksidase(Nelson & Cox 2004).

Katabolisme guanosin mono fosfat (GMP)juga menghasilkan urat sebagai produk akhir(Gambar 2). GMP pertama-tama dihidrolisismenghasilkan nukleosida guanosin, yang

kemudian diuraikan menghasilkan guaninbebas. Guanin mengalami pembebasanhidrolitik gugus aminonya menghasilkan

xantin, yang diubah menjadi asam urat olehxantin oksidase (Nelson & Cox 2004).

Asam urat adalah produk akhir yang

diekskresi dari katabolisme purin pada hewanprimata. Akan tetapi, pada banyak vertebratalainnya, asam urat mengalami degradasi

7/16/2019 G13kha

22/323

7/16/2019 G13kha

23/32

lanjutan menjadi alantoin, oleh enzim uratoksidase (Nelson & Cox 2004).

Gout dikelompokan menjadi dua, yaitu

primer dan sekunder. Gout primer disebabkanoleh kelainan metabolik. Gout sekunder

disebabkan oleh keadaan hiperurisemia akibatpenyakit, penurunan fungsi ginjal, peningktandegradasi asam nukleat, peningkatan produksipurin, konsumsi alkohol, atau karena obat-obatan tertentu (Murray et al. 2003).

Pengobatan gout, didasarkan pada usahauntuk menurunkan produksi asam urat atau

meningkatkan ekskresi asam urat oleh ginjalsehingga obat-obatan tersebut dapatdigolongkan menjadi dua, yaitu golongan

urikostatik (inhibitor xantin oksidase) danurikosurik (Price & Wilson 2006).

Contoh obat golongan urikostatik adalah

alopurinol. Efek samping alopurinol adalahmual, muntah, dan diare. Selain itu dapat jugamenimbulkan neuritis perifer, depresi sumsum

tulang, dan kadang-kadang anemia aplastik(Katzung 2010).

Probenesid dan sulfinpirazon merupakan

obat urikosurik yang digunakan untukmenurunkan kadar asam urat melaluipeningkatan ekskresi asam urat di tubulus

ginjal dengan menghambat reabsorbsinya.Efek samping yang sering terjadi padapengobatan dengan terapi urikosurik adalahiritasi saluran pencernaan, dermatitis alergi,

dan ruam kulit (Katzung 2010).

Gambar 2 Lintas katabolisme nukleotida purin(Nelson & Cox 2004).

Xantin Oksidase

Peristiwa timbulnya gout tak terlepas dari

peran serta enzim xantin oksidase. Enzim inimampu mengubah xantin menjadi asam uratmelalui reaksi oksidasi seperti ditunjukkan

oleh Gambar 3. Xantin oksidase merupakansuatu kompleks enzim yang terdiri darimolibdenum, FAD dan Fe2S2 sebagai pusat

reaksi redoks. Enzim ini terdiri dari duasubunit identik yang saling berhadapan,memiliki 1332 residu asam amino denganbobot molekul sekitar 270000 Da. Selainfungsi katalisis mengubah hipoxantin menjadixantin maupun xantin menjadi asam urat,

telah ditemukan fungsi lain dari enzim inidalam mengkatalisis reduksi nitrat dan nitritmenjadi nitrit oksida (Millar et al. 2002) dan

sekaligus menyebabkan pembentukan radikalsuperoksida yang dapat menyebabkanperadangan (Bodamyali et al. 2002).

Xantin oksidase berperan penting dalamkatabolisme purin. Enzim ini mempunyai 2bentuk, yaitu xantin oksidase dan xantin

dehidrogenase. Enzim xantin dehidrogenasedapat dikonversi menjadi xantin oksidase padamamalia, baik dalam reaksi reversibel maupun

ireversibel. Enzim xantin oksidase merupakanenzim yang tersebar luas dalam beberapaspesies, dari bakteri hingga manusia. Enzim

xantin oksidase di dalam tubuh manusia

terdapat pada hati, jika enzim ini terdapatdiluar hati mengindikasikan kerusakan fungsi

hati (Hille 2006).Enzim xantin oksidase mengatalisis

oksidasi hipoxantin menjadi xantin lalu

menjadi asam urat yang berperan pentingdalam penyakit gout (Gambar 3). Pada saatbereaksi dengan xantin untuk membentuk

asam urat, atom oksigen ditransfer darimolibdenum ke xantin. Perombakan pusatmolibdenum yang aktif terjadi denganpenambahan air. Selama proses oksidasi,

molekul oksigen bertindak sebagai akseptor

elektron menghasilkan radikal superoksida(O2*) dan hidrogen peroksida (Rhamdani2004).

Gambar 3 Pengubahan xantin menjadi asamurat (Hille 2006).

7/16/2019 G13kha

24/32

4

7/16/2019 G13kha

25/32

Alopurinol

Alopurinol berguna untuk mengobati gout

sekunder. Obat ini bekerja denganmenghambat xantin oksidase, yang mengubahhipoxantin

menjadi xantin

dan selanjutnya

menjadi asam urat. Mekanisme umpan balikalopurinol menghambat sintesis purin yangmerupakan prekusor xantin. Alopurinol

sendiri mengalami biotransformasi oleh enzimxantin oksidase menjadi aloxantin yang masaparuhnya lebih panjang daripada alopurinol,itu sebabnya alopurinol yang masa paruhnyapendek cukup diberikan satu kali sehari(Gunawan & Sulistia 2007).

Alopurinol merupakan suatu analoghipoxantin (dengan atom N dan C pada posisi7 dan 8 saling bertukar), digunakan secara

luas untuk mengatasi penyakit pirai (Stryer2000). Mekanisme kerja alopurinol, awalnyabertindak sebagai substrat dan kemudian

sebagai inhibitor xantin oksidase. Oksidase iniakan menghidroksilasi alopurinol menjadialoxantin (oksipurinol). Sintesis urat dari

hipoxantin dan xantin segera menurun setelahpemberian alopurinol. Oleh karena itu,konsentrasi hipoxantin dan xantin serum

meningkat, sedangkan kadar urat menurun,xantin dan hipoxantin ini lebih mudah larut(dalam urin) (Stryer 2000). Mekanisme

inhibisi xantin oksidase oleh alopurinol

terlihat pada Gambar 4.Tjay et al. (2002) menyatakan bahwa obat

ini mempunyai efek samping terutama reaksialergi kulit, nyeri kepala, serta kerusakan hatidan ginjal. Selain itu, Pacher et al. (2006)

menyebutkan efek samping alopurinol yangumum adalah gastrointestinal distess, reaksihipersensitif, dan skin rash. Reaksi

hipersensitif terjadi setelah beberapa bulanatau tahun setelah pengobatan. Efek ini biasaterjadi pada individu dengan kelainan ginjal.Gejala keracunan alopurinol meliputi demam,

rash vaskulitis, eosinofilia, dan kerusakan

fungsi ginjal.

Gambar 4 Mekanisme inhibisi xantin oksidase

oleh alopurinol (Stryer 2000).

Uji Sitotoksisitas dengan Bri ne Shrimp

Lethali ty Test(BSLT)

Uji potensi hayati dapat dilakukan denganmenggunakan metode BSLT. Metode inisering digunakan untuk menentukan nilai

sitotoksisitas dari suatu bahan alam. Melaluiuji BSLT dapat diketahui nilai LethalConcentration (LC50) senyawa bioaktif pada

sampel terhadap larva udang. Nilai LC50adalah konsentrasi yang dibutuhkan untukmematikan 50% dari populasi larva udangtotal (Meyeret al.1982).

Metode uji potensi hayati BSLT memilikibeberapa keunggulan, diantaranya waktu

pelaksanaan cepat, biaya relatif murah,sederhana, tidak memerlukan teknik aseptis,tidak memerlukan peralatan khusus, dan

hanya membutuhkan sedikit sampel uji(Meyeret al.1982).Pertimbangan pemilihan larva udang

sebagai hewan uji didasarkan karena telurArtemia memiliki daya tahan yang lama(dapat tetap hidup dalam kondisi kering,

selama beberapa tahun). Disamping itu, telurArtemia lebih cepat dan mudah menetasdalam waktu 48 jam, sehingga dapat

dihasilkan larva udang dalam jumlah besaryang siap untuk diuji (Carballo et al. 2002).Alasan lain yang menyebabkan dipilihnya

larva udang sebagai hewan uji adalah, karena

larva udang memiliki membran kulit yangtipis, sehingga kematian suatu larva akibat

efek sitotoksik dari senyawa bioaktif dapatdianalogikan dengan kematian sebuah seldalam organisme (Fenton 2002).

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang digunakan adalahcampuran daun dan batang tanaman anting-anting (Acalypha indica L.) yang berasal dari

daerah Ciawi (Bogor), akuades, etanol 70%,

kloroform, NH4OH, H2SO4 2 M, pereaksiMeyer, pereaksi Wagner, pereaksiDragendorf, asam asetat anhidrat, H2SO4pekat, serbuk Mg, HCl pekat, amil alkohol,larutan besi(III) klorida, NaOH 1N, telur

Artemia salina L., bufer fosfat 0.05 M pH7.5, xantin, enzim xantin oksidase, HCl 0.58M, alopurinol.

Alat yang digunakan adalah neracaanalitik, tabung reaksi, gelas piala, labu takar,pipet volumetrik, cawan porselin, oven,eksikator, rotary evaporator, pinggan

porselin, penangas air, vial, mikropipet, kaca

pembesar, dan spektofotometer UV-VIS.

7/16/2019 G13kha

26/32

5

7/16/2019 G13kha

27/32

Metode Penelitian

Penyiapan SampelBahan baku anting-anting diperoleh dari

daerah Ciawi, Bogor. Kegiatan sortasi basahyang merupakan tahap awal penelitian ini,

bertujuan memisahkan kotoran atau bahan-bahan asing lainnya dari tanaman yang akanditeliti. Pekerjaan dilanjutkan dengan

pencucian untuk menghilangkan tanah danpengotor lainnya yang masih menempel padabahan yang sudah disortasi basah. Tahapberikutnya adalah perajangan pada daun danbatang tanaman anting-anting yang bertujuanmempermudah proses pengeringan. Daun dan

batang anting-anting kemudian dikeringkanmenggunakan oven pada suhu 50C. Daun danbatang anting-anting kemudian dihaluskan

hingga diperoleh simplisia anting-antingkering berukuran 80 mesh.

Penentuan Kadar Air (AOAC 1984)Cawan porselin dikeringkan dalam oven

pada suhu 105C selama 30 menit, lalu cawandidinginkan di dalam eksikator selama 30menit dan ditimbang bobot kosongnya.Sampel ditimbang sekitar 3 g dan dimasukkan

ke cawan porselin. Sampel beserta cawannyadipanaskan pada suhu 105C selama 3 jam di

dalam oven. Setelah didinginkan dalameksikator selama 30 menit, cawan besertaisinya ditimbang. Penentuan kadar air

dilakukan sebanyak 3 kali ulangan sampaidiperoleh bobot konstan.

Kadar air =

x 100%

keterangan :A = bobot sampel awal (g)B = bobot sampel sesudah dikeringkan (g)

Ekstraksi Air dan Ekstraksi Etanol (BPOMRI 2004)

Simplisia anting-anting diekstraksi dengannisbah sampel dan pelarut (air atau etanol70%) = 1:10, menggunakan metode maserasi

selama 24 jam sambil sekali-sekali diadukselama 6 jam pertama. Maserat dipisahkandan proses diulangi 2 kali dengan jenis dan

jumlah pelarut yang sama. Semua maseratdikumpulkan dan diuapkan dengan rotaryevaporator dengan suhu 40C hingga

diperoleh ekstrak kental.

Uji Fitokimia (Harborne 1987)

Uji Alkaloid. Sebanyak 0.05 g ekstrak

anting-anting dilarutkan dalam 10 mLkloroform dan 4 tetes NH4OH, kemudiandisaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam

tabung reaksi bertutup. Ekstrak kloroform

dalam tabung reaksi dikocok dengan 6 mLH2SO4 2 M dan lapisan asamnya dipisahkanke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan

asam ini diteteskan pada lempeng tetes danditambahkan pereaksi Meyer, Wagner, dan

Dragendorf yang akan menimbulkan warnaberturut-turut putih, coklat, dan merah jingga.

Uji Triterpenoid dan Steroid. Sebanyak0.05 g ekstrak anting-anting dilarutkan dengan25 mL etanol panas 50C, kemudian disaring

ke dalam pinggan porselin dan diuapkansampai kering. Residu dilarutkan dengan eter

dan dipindahkan ke dalam tabung reaksi, laluditambahkan 3 tetes asam asetat anhidrat dan1 tetes H2SO4 pekat (Uji Lieberman

Burchard). Warna merah atau ungumenunjukkan adanya triterpenoid dan warnahijau atau biru menunjukkan adanya steroid.

Uji Flavonoid. Sebanyak 0.05 g ekstrakanting-anting ditambahkan 100 mL air panaskemudian dididihkan selama 5 menit dan

disaring. Filtrat yang diperoleh kemudiandiambil sebanyak 5 mL, ditambah denganserbuk Mg 0.05 g, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL

amil alkohol. Campuran kemudian dikocokkuat-kuat. Uji positif ditandai denganmunculnya warna merah, kuning, atau jingga

pada lapisan amil alkohol.Uji Saponin. Sebanyak 0.05 g ekstrak

anting-anting ditambahkan 100 mL air panaskemudian dididihkan selama 5 menit dan

disaring. Sebanyak 5 mL filtrat dikocok dalamtabung reaksi tertutup selama 10 detikkemudian dibiarkan selama 10 menit. Adanyasaponin ditunjukkan dengan terbentuknyabuih stabil.

Uji Tanin. Sebanyak 0.05 g ekstrakanting-anting ditambahkan 100 mL air panaskemudian dididihkan selama 5 menit dandisaring. Sebagian filtrat yang diperoleh

ditambah larutan besi(III) klorida.Terbentuknya warna hitam kehijauanmenunjukkan adanya tanin.

Uji Sitotoksisitas Terhadap A. salina(Meyer et al. 1982)

Penetasan Telur. Telur A. salinaditimbang sebanyak 50 mg kemudian

dimasukkan ke dalam wadah yang berisi airlaut yang sudah disaring. Setelah diaerasi,kista dibiarkan selama 48 jam di bawah

pencahayaan lampu agar menetas sempurna.

Uji Sitotoksisitas pada A. salina.Sebelum dilakukan uji sitotoksisitas, terlebihdulu dibuat larutan ekstrak standar dengan

konsentrasi 2000 ppm. Sebanyak 10 ekorlarva A. salina dimasukkan ke dalam vial

yang berisi air laut lalu ditambahkan larutan

7/16/2019 G13kha

28/32

6

7/16/2019 G13kha

29/32

ekstrak (air dan etanol) sehingga konsentrasiakhirnya menjadi 10, 100, 500, dan 1000 ppm(Lampiran 6). Pengamatan dilakukan setelah

24 jam dengan menghitung jumlah larva yangmati dari total larva yang dimasukkan ke

dalam vial. Pengolahan data persen mortalitaskumulatif digunakan analisis probit LC50dengan selang kepercayaan 95%.

Uji Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase

Secara In Vitro(Tamta et al. 2005 yang

dimofikasi)Kurva Standar. Larutan substrat (xantin)

dibuat pada berbagai konsentrasi (0.1, 0.2,0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 mM), kemudian diukur

serapannya menggunakan spektrofotometerUV pada panjang gelombang 293 nm. Kurvahubungan antara konsentrasi dan serapan

dibuat. Persamaan kurva linear tersebutdigunakan untuk menghitung aktivitas xantinoksidase.

Inhibisi Aktivitas Xantin Oksidase. Ujidaya inhibisi ekstrak air dan etanol anting-anting pada xantin oksidase dilakukan pada

kondisi optimumnya seperti yang dilaporkanoleh Iswantini & Darusman (2003). Kondisioptimum tersebut adalah pada suhu inkubasi

20C, pH 7.5, konsentrasi xantin oksidase 0.1unit/ml, konsentrasi xantin 0.7 mM, waktuinkubasi selama 45 menit, dan pada panjang

gelombang 293 nm.

Ekstrak dimasukkan ke dalam tabungreaksi dengan variasi konsentrasi berdasarkan

hasil uji BSLT. Variasi konsentrasi untukekstrak etanol adalah 150, 300, dan 450 ppmsedangkan untuk ekstrak air adalah 50, 150,

dan 300 ppm. Ekstrak tersebut kemudianditambah larutan bufer kalium fosfat 50 mMpH 7.5 sebanyak 1.9 mL. Campuran kemudian

ditambah 1 mL xantin 0.7 mM dan xantinoksidase 0.1 unit/mL sebanyak 0.1 mL laludiinkubasi pada suhu 20C selama 45 menit.Setelah diinkubasi, campuran segera

ditambahkan HCl 0.58 M sebanyak 1 mL

untuk menghentikan reaksinya. Campurandiukur serapannya menggunakanspektrofotometer UV pada panjanggelombang 293 nm untuk melihat seberapa

besar sisa xantin yang tidak bereaksi dalamsampel uji. Daya inhibisi dibandingkandengan alopurinol dengan konsentrasi 150

ppm.

Analisis Data.Data kuantitatif yang diperoleh diuji

dengan analisis sidik ragam (ANOVA) untukmengetahui pengaruh perlakuan terhadap

parameter yang diukur. Penentuan beda nyatadiantara perlakuan digunakan uji beda nyata

Duncans Multiple Range Test(DMRT) padataraf uji 5% (Mattjik & Sumertajaya 2006).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kadar Air

Sampel yang digunakan pada penelitian iniadalah simplisia dari campuran daun danbatang anting-anting. Penentuan kadar air

berguna untuk menyatakan kandungan zatdalam tumbuhan sebagai persen bahan kering.Menurut Winarno (2002), kadar air yang baikadalah kurang dari 10%. Kadar air rerata yangdiperoleh dari simplisia anting-anting adalah4.21% (Lampiran 3). Dengan demikian,

simplisia dengan kadar air tersebut dapatdisimpan dalam jangka waktu cukup lama,

karena kemungkinan bahan rusak oleh jamurpada saat penyimpanan sangat kecil.

Ekstrak Air dan Etanol Anting-anting

Isolasi senyawa yang terkandung dalamsimplisia anting-anting dilakukan melaluiekstraksi pelarut dengan cara maserasi.Pelarut yang digunakan pada penelitian iniadalah air dan etanol 70%. Kedua pelarut ini

dipilih berdasarkan ketertarikan senyawa aktifyang diduga dapat menginhibisi xantinoksidase yang ingin diambil dari anting-anting,

yakni alkaloid dan flavonoid. Kedua senyawatersebut dapat bersifat polar atau semipolar,sehingga digunakan air yang bersifat polar

dan etanol 70% yang bersifat semipolar.Alasan lain adalah adanya peraturan yangdikeluarkan oleh BPOM RI (2010) mengenaicairan penyari untuk keperluan farmakologimenyebutkan hanya boleh menggunakan airatau etanol.

Hasil penelitian ini, menunjukkan bahwarendemen ekstrak air dan etanol anting-anting,adalah sebesar 19.04% dan 14.85% (Tabel 1).

Rendemen ekstrak air yang lebih tinggi jikadibandingkan rendemen ekstrak etanol,menunjukkan bahwa senyawa metabolit

sekunder pada anting-anting lebih banyakyang bersifat polar dibandingkan senyawayang bersifat semipolar.

Sriwahyuni (2010) menyebutkanrendemen anting-anting yang diekstrakdengan etil-asetat, diklorometana, dan

petroleum eter, masing-masing sebesar 14.9%,13.3%, dan 6.3%. Nilai ini lebih rendah darirendemen ekstrak air dan etanol yang

diperoleh pada penelitian ini. Perbedaanrendemen yang diperoleh dapat disebabkan

oleh perbedaan metode ekstraksi yangdilakukan, perbedaan usia anting-anting yang

7/16/2019 G13kha

30/32

7

digunakan dan perbedaan kandungan uji Uji steroid menunjukkan hasil positif pada

7/16/2019 G13kha

31/32

digunakan, dan perbedaan kandunganmetabolit sekunder yang terdapat pada anting-anting.

Tabel 1 Rendemen rerata ekstrak air danekstrak etanol 70% anting-anting

Sampel Rerata rendemen (%)

Ekstrak air 19.04 9.25

Ekstrak etanol 70% 14.85 1.50n = 3

Fitokimia Ekstrak Air dan Etanol

Anting-anting

Uji fitokimia bertujuan untuk mengujikeberadaan golongan senyawa metabolit

sekunder seperti alkaloid, flavonoid, saponin,tanin, steroid, dan triterpenoid dalam sampel.Uji pendahuluan ini dilakukan untuk

mengetahui ada tidaknya flavonoid dansenyawa-senyawa lain yang diduga dapat

berperan dalam menginhibisi xantin oksidase.Hasil penelitian ini, menunjukkan bahwa

baik ekstrak air maupun etanol anting-antingkeduanya positif mengandung flavonoid, tanin,

alkaloid, steroid, dan saponin serta negatifuntuk trierpenoid (Tabel 2). Meskipunkandungan kimia pada kedua ekstrak anting-

anting adalah sama, namun sifat dari senyawakimia pada kedua ekstrak tersebut berbeda.Senyawa kimia pada ekstrak air bersifat polar

sedangkan senyawa kimia pada ekstrak etanol

bersifat semipolar. Kartika (2004)menyebutkan bahwa ekstrak kasar daun

anting-anting mengandung flavonoid, alkaloid,saponin, tanin, acalyphine, minyak atsiri, danasam galat. Menurut Hermawan (2002),

ekstrak kasar metanol air akar anting-antingmengandung triterpenoid dan tanin, ekstrakair akar mengandung alkaloid dan ekstrak etil

asetatnya mengandung tanin, alaloid, dansteroid.

Uji fitokimia memberikan tanda hasil yangspesifik untuk setiap ujinya (Lampiran 5). Ujialkaloid menunjukkan hasil positif untukkedua ekstrak. Hasil positif ditandai dengan

terbentuknya endapan berturut-turut berwarnaputih, cokelat, dan merah setelah penambahanpereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf. Uji

positif bahan mengandung tanin, ditandaidengan terbentuknya warna hitam setelahpenambahan FeCl3, sedangkan uji positif

untuk saponin ditandai dengan terbentuknyabuih yang stabil dalam waktu 10 menit setelahpengocokkan.

Uji triterpenoid kedua ekstrakmenunjukkan hasil negatif. Keduanya tidakmenunjukkan perubahan warna menjadi

merah atau ungu setelah penambahan pereaksi

uji. Uji steroid menunjukkan hasil positif padakedua ekstrak yang ditandai denganterbentuknya warna hijau. Steroid bisa

terdapat dalam bentuk glikosida (Harborne1987). Adanya gula yang dapat larut dalam

air, maka dalam ekstrak air dapatteridentifikasikan steroid bila steroid dalamsampel terdapat dalam bentuk glikosida.

Flavonoid merupakan metabolit sekunderyang terdapat pada vakuola tanaman.

Flavonoid memiliki banyak fungsi padatanaman, salah satunya sebagai zat warna

pada bunga. Peran lain dari flavonoid adalahsebagai antioksidan yang mampumengkompleks logam berat, juga mampu

mengikat protein dengan spesifitas yang tinggi(Andersen & Markham 2006). Hasil ujifitokimia menunjukkan ekstrak anting-anting

mengandung flavonoid.Senyawa bioaktif dari beberapa jenis

tanaman obat dilaporkan mempunyai aktivitas

biologis yang berguna dalam pengobatanpenyakit gout melalui inhibisi enzim xantinoksidase. Penelitian Yulianto (2008)

menyebutkan bahwa rosela yang memilikikandungan bioaktif flavonoid, saponin, tanin,serta ciplukan yang mengandung alkaloid,

saponin, tanin, flavonoid, dan steroid mampumenghambat aktivitas xantin oksidase.Berdasarkan hasil penelitian tersebut dan hasiluji ekstrak anting-anting pada penelitian ini,

maka, diduga komponen bioaktif dari anting-anting yang memiliki aktivitas antigoutmelalui inhibisi enzim xantin oksidase padapenelitian ini adalah flavonoid dan alkaloid.

Tabel 2 Kandungan fitokimia ekstrak air danetanol anting-anting

Uji fitokimiaEkstrak

Air Etanol 70%

Flavonoid + ++Tanin + +Alkaloid + ++

Triterpenoid - -

Steroid + ++Saponin ++ ++

Keterangan : tanda (+) menunjukkan senyawa metabolit

sekunder serta tingkat intensitas warna sedangkan (-)

menunjukkan tidak terdapat senyawa metabolit sekunderpada ekstrak

Sitotoksisitas pada Larva Udang

Pengujian sitotoksisitas dari ekstrak air

dan etanol anting-anting diperoleh nilaikonsentrasi letal 50 (LC50) masing-masingsebesar 446.619 dan 159.629 ppm (Tabel 3).Nilai LC50 ini menunjukkan bahwa ekstraktersebut memiliki potensi bioaktif karena

7/16/2019 G13kha

32/32