Fernanda Rocha Gustavo Garcia Tiago Medina HIV X Imunoterapia.
Transcript of Fernanda Rocha Gustavo Garcia Tiago Medina HIV X Imunoterapia.
Fernanda Rocha
Gustavo Garcia
Tiago Medina
HIV X Imunoterapia
-HIV- (human imunodeficiency virus):
• Familia: Retroviridae
•Gênero: Lentivirus
•HIV-1 – (Subtipos de A-J)
•HIV-2
-Sintomas:-Semelhante gripe comum
HIV- Vírus da Imunodeficiência Humana
Partículas do HIV-1 na superfície de macrófagos infectados
Total: 33.3 million [31.4 million – 35.3 million]
Western & Central Europe
820 000[720 000 – 910 000]
Middle East & North Africa460 000
[400 000 – 530 000]
Sub-Saharan Africa22.5 million
[20.9 million – 24.2 million]
Eastern Europe & Central Asia1.4 million
[1.3 million – 1.6 million]
South & South-East Asia4.1 million
[3.7 million – 4.6 million]
Oceania57 000
[50 000 – 64 000]
North America1.5 million
[1.2 million – 2.0 million]
Central & South America1.4 million
[1.2 million – 1.6 million]
East Asia770 000
[560 000 – 1.0 million]Caribbean240 000
[220 000 – 270 000]
População infectada com HIV
Estimativa de novos casos de infecção pelo HIV
Western & Central Europe
31 00031 000[23 000 – 40 000]
Middle East & North Africa75 00075 000
[61 000 – 92 000]
Sub-Saharan Africa1.8 million1.8 million
[1.6 million – 2.0 million]
Eastern Europe & Central Asia
130 000 130 000 [110 000 – 160 000]
South & South-East Asia270 000270 000
[240 000 – 320 000]
Oceania45004500
[3400 – 6000]
North America70 000
[44 000 – 130 000]
Central &South America
92 00092 000[70 000 – 120 000]
East Asia82 00082 000
[48 000 – 140 000]
Caribbean17 000
[13 000 – 21 000]
Total: 2.6 million [2.3 million – 2.8 million]
Abaixo de 200 células/ml: Muito vulnerável, tratar imediatamente;
Entre 200 e 350 células/ml: Vulnerável, deve ser iniciado o tratamento
Entre 350 e 500 células/ml: Pouco vulnerável, pode começar a critério médico;
Acima de 500: Saudável, não precisa começar o tratamento.
Cinética da infecção pelo HIV
Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)/ Ann Intern Med. 1996 Apr 1;124(7):654-63.
Formas de terapias para o controle da infecção viral
Sistema Imune versus Infecção Viral
Nature Reviews Immunology 10, 11-23 (January 2010)
Propagação do HIV
Pontos de intervenção por drogas antivirais
Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)
Resposta imune durante infecção viral
-100µg/kg de IL7 por 9 dias
-ATR+ 100µg/kg de IL7 por 26 dias
8dpi – 10µg de IL7 ou PBS por 2 semanas
-3 ou 10 μg/kg de IL-7; 3x/semana por 16 dias
IL-7 administration drives T cell-cycle entry and expansion in HIV-infection
Objetivo: Verificar a atividade biológica da IL-7 recombinante humana administrada em pacientes infectados com HIV.
1 4 14 28 56
rhIL-7/placebo
toxicidade Teste para anticorpos anti-IL-7
A rhIL-7 é tóxica para pacientes infectados com HIV?
A concentração de 30 g/kg de rhIL-7 é a máxima tolerada pelos pacientes.
plasma
ELISA
Qual o perfil farmacocinético da rhIL-7 após seu único inóculo subcutâneo?
0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 4, 8, 12, 24, 48 e 72h
rhIL-7
Dose única
Os níveis de IL-7 no plasma aumentaram de modo dependente da dose. O perfil farmacocinético torna-se não linear com o aumento da
dose.
PlaceboPlacebo
IL-7 (3IL-7 (3g/Kg)g/Kg)
IL-7 (10IL-7 (10g/Kg)g/Kg)
IL-7 (30IL-7 (30g/Kg)g/Kg)
IL-7 (60IL-7 (60g/Kg)g/Kg)
Como os linfócitos circulantes se comportam após administração de rhIL-7?
PBMC
Citometria de Fluxo
0, 1, 2, 4, 14, 28 dias
rhIL-7
Dose única
Uma única dose de IL-7 induziu um aumento no número de linfócitos T CD4+ e CD8+ circulantes.
PBMC
Citometria de Fluxo
0, 1, 2, 4, 14, 28 dias
rhIL-7
Dose única
A administração da IL-7 induziu o aumento linfocitário de alguma sub-população específica?
O aumento de linfócitos foi predominante entre os linfócitos T de memória central.
PlaceboPlacebo
IL-7 (3IL-7 (3g/Kg)g/Kg)
IL-7 (10IL-7 (10g/Kg)g/Kg)
IL-7 (30IL-7 (30g/Kg)g/Kg)
IL-7 (60IL-7 (60g/Kg)g/Kg)
A administração de rhIL-7 induz proliferação de linfócitos?
Linfócitos
Proliferação celular
0, 1, 4, 14, 28 dias
rhIL-7
Ki67 proteína nuclear expressa em todas as fases do ciclo celular, exceto na fase de repouso
Dose única
Treg
A administração de rhIL-7 induziu os linfócitos T a entrarem em ciclo celular, exceto a subpopulação de células T reguladoras.
rhIL-7 induz proliferação e ativação de linfócitos?
PlaceboPlacebo
IL-7 IL-7
A administração de rhIL-7 induziu ativação dos linfócitos T no mesmo período que eles iniciaram ciclo celular.
A administração de rhIL-7 induz ativação de linfócitos?
Linfócitos
Ativação celular
0, 1, 4, 14, 28 dias
rhIL-7
Dose única
Qual o efeito da rhIL-7 sobre as células T CD8+ específicas ao antígeno viral?
PBMC
Citometria de Fluxo
0, 4, 28 dias
rhIL-7
Dose única
Uma única dose de rhIL-7 aumentou o recrutamento não seletivo de células T CD8+ de memória específicas ao antígeno em ciclo celular.
Tetrâmero + Peptídeos Citomegalovirus;Epstein-Barr virus;Influenza virus;HIV
Qual o efeito da rhIL-7 sobre os linfócitos B?
ImaturaImatura TransiçãoTransição
CD21CD21lowlow
CD21CD21highhigh
PBMC
Citometria de Fluxo
0, 4, 28 dias
rhIL-7
Dose única
O número de células B
circulantes não foi
alterado
A administração de rhIL-7 induziu a emergência de células B de imaturas para uma fase de transição.
ImaturImatur
aa
TransiçTransiç
ãoão
A IL-7 possui um perfil favorável para o desenvolvimento terapêutico para pacientes com HIV ou outras linfopenias.
MemóriMemóri
a a
centralcentral
Objetivo: Investigar o potencial terapêutico da IL-7 na infecção crônica pelo LCMV, na tentativa de reverter a exaustão celular.
O tratamento com IL-7 aumenta o número de células no baço durante a infecção com LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Quantificação do número de células no baço em diferentes dias
Houve aumento de linfócitos T CD4, T CD8 e linfócitos B após tratamento com IL-7
C57BL/6
O tratamento com IL-7 aumenta o número de células T CD8 específicas para o LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Citometria – células TCD8 específicas para TetGP33+, TetGP276+ e TetNP396+
A IL-7 promoveu o aumento de células T CD8 específicas para o LCMV
Remoção do baço(Marcação com tetrâmero)
O aumento no número de células também é observado em outros órgãos?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Histologia do fígado
Após o tratamento com IL-7, houve aumento no infiltrado de células totais e específicas para o vírus no fígado, cérebro, pulmões e rins
29° dia
Fígado
Citometria para TCD4 e TCD8 totais e específicas para os tetrâmeros
O aumento no número de células obtidas após o tratamento com IL-7 se traduz em ganho funcional?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Citometria – células TCD4 e TCD8 específicas para o vírus
29° dia
As células T CD4 e TCD8 expandidas pela IL-7 são funcionais.
... Células T de camundongos infectados com o clone 13 de LCMV possuem altos níveis de PD-1 (Barber et al., 2006).
Os níveis de PD-1 nas células T estão diminuídos após o tratamento com IL-7?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
FACS - Expressão de PD-1 nas células TCD4 e TCD8
29° dia
O tratamento com IL-7 diminuiu a expressão de PD-1 nas células T CD4 e T CD8
Camundongos tratados com IL-7 eliminam eficientemente o vírus?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Titulação viral em vários dias – Contagem de placa viral
A IL-7 facilitou a eliminação viral dos reservatórios crônicos (baço, fígado, rins e cérebro)
Quais citocinas estão elevadas durante o tratamento com IL-7?Infecção com o
clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Dosagem de citocinas séricas - ELISA
Citocinas do padrão Th1 e Th17 estão aumentadas durante o tratamento com IL-7. IL-10 aumenta após a eliminação do vírus
O tratamento com IL-7 induz dano tecidual decorrente da resposta imune inflamatória?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Dosagem de AST e ALT no soro
O tratamento com IL-7 não aumenta os níveis séricos das enzimas indicativas de dano hepático
A produção de IL-22 está aumentada durante o tratamento com IL-7?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
Dosagem de IL-22 no soro - ELISA
29° dia
O tratamento com IL-7 também aumenta a produção sérica de IL-22
O dano hepático limitado foi consequência do efeito citoprotetor da IL-22?
A IL-22 produzida durante o tratamento com IL-7 impede os danos celulares no fígado
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3
semanas
FACS – Tregs no baço e no fígado
O tratamento com IL-7 altera o número de células T reguladoras?
O número absoluto de Tregs aumenta após o tratamento com IL-7, mas a frequência está diminuída em relação ao número total de células T
A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7 altera o número de células T totais e específicas para o LCMV?
A depleção de Tregs aumentou o número de células T CD4 e T CD8 totais e específicas para o vírus.
O aumento de células T em animais depletados de Tregs está relacionado com aumento de IL-2?
Dosagem de citocinas no soro
A maior produção de IL-2 induzida pelo tratamento com IL-7 promove o aumento no número de células T.
A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7 provocou danos hepáticos?
Dosagem de AST no soro
A depleção de células T reguladoras não provocou danos hepáticos
Socs3 é expresso durante a infecção crônica por LCMV?
Infecção crônica com o clone 13
- LCMV
Infecção aguda - cepa Armstrong
de LCMV
OU
Sorting das células T
Western Blotting – Expressão de Socs3
Socs3 é altamente expresso na infecção crônica causada por LCMV
O tratamento com IL-7 inibe a expressão de Socs3 durante a infecção crônica por LCMV?
Sorting das células T
Western Blotting – Expressão de Socs3
Infecção com o clone 13 - LCMV
8° dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 5
dias
A expressão de Socs3 nas células T foi inibida após tratamento com IL-7
Socs3 é o principal inibidor da resposta imune contra a infecção crônica por LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
Remoção do baço
Socs3wt/wtLck-Cre- Socs3fl/flLck-Cre+
Infecção com o clone 13 - LCMV
FACS – Células TCD8 específicas para
NP396, GP276 e GP33
Socs3 inibe a resposta imune específica contra o LCMV
As células T permanecem funcionais após a deleção condicional de Socs3?
Infecção com o clone 13 - LCMV
Remoção do baço
Socs3wt/wtLck-Cre- Socs3fl/flLck-Cre+
Infecção com o clone 13 - LCMV
FACS – Células TCD4 e TCD8 produtoras de
citocinas
As células T CD4 e TCD8 continuam funcionais na ausência de Socs3
O vírus é eliminado de órgãos reservatórios na ausência de Socs3?
A deficiência de Socs3 propiciou a eliminação viral de vários órgãos reservatórios
Conclusão