91271761 Fassio Pascual Suarez Introduccion a La Metodologia de La Investigacion
Fassio cefar 2011
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Health & Medicine
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Valutazione della introduzione della diagnostica Microarray in allergologia dal punto di vista tecnico-
analitico e possibili risvolti clinici
Maria Totaro Filippo Fassio
Con il patrocinio di
SIBioCSocietà Italiana di Biochimica Clinicae Biologia Molecolare Clinica
AOU-CareggiImmunologia e Terapie CellulariDirettore Prof. E. Maggi
Corso di AggiornamentoXX^ Edizione Corso CEFARLE PROTEINE:dal laboratorio alla clinica20 ottobre 2011 Firenze
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Diagnostica allergologica - Cronologia
1880 1967 1988-91 1995-1999 2000
In-vivo testing
In-vitro testing
Provocation test
Caratterizzazione delle IgE
2007
RAST*
Primi allergeni clonati
Pannelli con allergeni ricombinanti
Primo biochip con determinanti allerg.
Diffusione mondiale
ImmunoCAP ISAC ®
Component-resolved diagnosis
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Cos'è un biochip ?
E’ un supporto solido sul quale differenti molecole native e ricombinanti sono state fissate in una precisa disposizione così da formare un array microscopico.
Questo permette il monitoraggio simultaneo e in parallelo delle Interazioni biologiche con piccole quantità di campione e di reagenti.
~ 100 picogrammi allergene / spot> 100 allergeni / cm²
~ 200 µm
Array = disposizione, matriceMicro = microscopica
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Component Resolved Diagnosis
Gli estratti allergenici contengono sia molecole allergeniche che non allergeniche e sono difficili da standardizzare.
I cosidetti pan-allergeni sono presenti in diverse fonti allergeniche e inducono cross-reattività tra gli estratti allergenici.
Le singole molecole allergeniche sono markers di una reale sensibilizzazione nei confronti di una fonte allergenica.
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Il microarray: nella pratica…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare
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Discriminare tra co-sensibilizzazione e cross-reazione
Identificare i pazienti più idonei all’immunoterapia
CRD: allergopatie respiratorie…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
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CRD: allergopatie respiratorie…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Michele, 47 anni, soffre da alcuni anni di rinocongiuntivite nel periodo primaverile. Il suo
medico lo invia all’allergologo, che effettua prick test.
Graminacee +++Betulla ++Olivo ++
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…co-sensibilizzazione o cross-reazione?
CRD: allergopatie respiratorie…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
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Co-sensibilizzazione!(Graminacee, Olivo, Betulla)
CRD: questa “ovviamente” è…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
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Cross-reazione!(solo Graminacee con Phl p 12: Profilina)
CRD: oppure no?
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Il microarray: nella pratica…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare
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CRD: latex… Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Marta, paziente di 38 aa, lavora come cuoca.Soffre di asma bronchiale di grado lieve, con sporadici
attacchi d’asma in vari momenti della giornata, sia a casa che al lavoro.
Marta sa già di essere allergica ad alcuni pollini ed all’acaro della polvere, ma….
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CRD: latex… Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
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Il microarray: nella pratica…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare
![Page 15: Fassio cefar 2011](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061218/54822a0db4af9f3c208b47d2/html5/thumbnails/15.jpg)
CRD: allergeni meno frequenti…
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Franco, 44 anni, con rinite ed asma bronchiale, giunge all’osservazione per recente peggioramento della sintomatologia
Continua la tp già in atto da 3 anni con CCS nasali ed associazione CCS + beta2agonista inalatorio, che fino a pochi mesi prima aveva garantito un ottimo
controllo della sintomatologia
Il PT conferma le precedenti polisensibilizzazioni a pollini ed acari, senza sostanziali modifiche
Il paziente nega sostanziali modifiche al proprio stile di vita (casa,lavoro, sport, hobbies…)
CRD: allergeni meno frequenti…
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Sarebbe emersa la positività senza un test multiplex?
CRD: allergeni meno frequenti…
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Il microarray: nella pratica…
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Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare
![Page 19: Fassio cefar 2011](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061218/54822a0db4af9f3c208b47d2/html5/thumbnails/19.jpg)
CRD: allergia alimentare…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Una giovane paziente si rivolge allo specialista allergologo a causa di episodi recidivanti di
angioedema...
gli episodi erano iniziati fin dall’infazia ed erano scatenati dall’assunzione di frutta con guscio...
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CRD: allergia alimentare…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Il prick test è risultato positivo per:
• Nocciola (+++)• Noce (+/-)
• Pinolo (+/-)
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CRD: allergia alimentare…
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Dosaggio IgE totali (RIST): 37 kU/l
Dosaggio IgE specifiche per inalanti: tutte < 0.10 kUI/l
Dosaggio IgE specifiche per alimenti:
• Nocciola 3,07 kUI/l• Noce 0,12 kUI/l
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CRD: allergia alimentare…
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Cor a 1: Bet v 1-homologue (PR-10)
Cor a 2: profilina (omologo Bet v 2)
Cor a 8: LTP
Cor a 9: 11S globulin (omologo Ara h 3)
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CRD: allergia alimentare…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
A cosa è allergica la paziente?
Cor a 1
Cor a 8
Cor a 2
Cor a 9
![Page 24: Fassio cefar 2011](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061218/54822a0db4af9f3c208b47d2/html5/thumbnails/24.jpg)
CRD: allergia alimentare…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
…ed il risultato esatto è…
Negativo!
…confermato su ImmunoCAP(Cor a 1, Cor a 8, Bet v 2)
![Page 25: Fassio cefar 2011](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061218/54822a0db4af9f3c208b47d2/html5/thumbnails/25.jpg)
CRD: allergia alimentare…
Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
…perché 103 molecole sono molte…
…ma in natura ce ne sono DI PIU’…
![Page 26: Fassio cefar 2011](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061218/54822a0db4af9f3c208b47d2/html5/thumbnails/26.jpg)
Ed alla fine…Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
vs
…alla prossima puntata…
![Page 27: Fassio cefar 2011](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061218/54822a0db4af9f3c208b47d2/html5/thumbnails/27.jpg)
Grazie!
Università degli Studi di Firenze SOD Immunoallergologia Winter School SIAIC 20 Febbraio 2010