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Objetivos
Diferencias las caracterisitcas bioqumicas de cada cepa conservada
Diferenciar las especies mas importantes de Stafilococcus en humanos asi como sus
caractristicas bioqumicas,
Reconocer las especies de estreptococos y las enfermedades que generan
Estafilococo
Procedimiento:
Sobre una placa Con Agar ADN se hizo siembra dibujando una estra simple
Luego de incubar por 24 horas cobre las colonias de estafilococo se aadi solucin de 1 N de HCl.
Y se observ lo siguiente, opacidad y halo circundante a la colonia del estafilococo debido a la
precipitacin del ADN polimerizado despus de agrega el HCl.
Estafilococo Agar ADN
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Estreptococo beta-hemoltico
MATERIALES
Cepa conservada de Streptococcus B hemoltico
Mechero
Lmina porta
Batera de coloracin Gram
Microscopio ptico
Isopos estriles
Medios de cultivo: Agar sangre y Agar azida
PROCEDIMIENTO
1. Con el isopo estril, tomar muestras de secrecin farngea y sembrarlo en
la placa de agar azida y agar sangre.
2. Efectuar extendidos en lminas porta objetos
3. Colocar la lmina con la materia de coloracin Gram, siguiendo la tcnica.
4. Secar y observar al microscopio ptico.
RESULTADOS
Se observa el halo transparente en las muestras de agar azida y agar
sangre.
Se trata de un estreptococo beta hemoltico y por lo tanto tiene la propiedad
de causar lisis total de los eritrocitos.
El agar azida es un medio de cultivo que favorece el crecimiento de las
bacterias gram positivas, por eso fomenta esta reaccin.
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AGAR azida estreptococo
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LECTURA A LAS 24 HORAS
Objetivos
Difereniar las caractersticas microscpicas del streptococus penumonia y del
Streptococus sp.
S. Pneumoniae Streptococus sp.
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MBRA DE MUESTRAS BIOLGICAS PARA EL AISLAMIENTO DE NEISSERIA
1. PROCEDIMIENTO:
Se sembr la cepa conseguida sobre el agar Thayer Martin
2. RESULTADOS
AGAR THAYER MARTINA)
No se observ crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.
TINCION GRAM
Uno de los mejores mtodos para identificar infecciones de areas
genitales de gonococo.
Hombres (secrecin uretral), evidencia diplococos gran negativos
intracelulares en los PMNs , es diagnostico (97-98%).
Mujeres (muestras cervicales), puede mostrar falsos positivos, porque flora
normal tan bien esta presentes diplococos negativos.
Se us una lmina preparada anteriormente en el laboratorio de
Microbiologa de la UNFV, y se observ.
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Se observan bacterias en forma de diplococos, gram negativos (Neisseria
Gonorrhoeae) en la todo el campo de observacin de la lmina brindada.
PRUEBA BIOQUMICA (DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS) PARA
IDENTIFICAR LAS ESPECIES DE NEISSERIA
- Manera de diferenciar Neisseria Gonorrhoeae (fermenta solo glucosa) y
Neisseria Meningitidis (fermenta glucosa y maltosa)
Caractersticas Crecimiento a 22 C
Fermentacin de azcares
Especies Glucosa Maltosa Sacarosa Lactosa
N. Meningitidis - + + - -
N. Gonorrhoeae - + - - -
N. Lactmica - + / - + - +
Moraxella catarrhalis + - - - -
N. Sicca + + + + -
N. Flavescens + - - - -
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ESTUDIO DEL GENERO BRUCELLAE
Objetivos
Reconocer las caractersticas microscpicas de este genero
Reconocer las caractersticas bioqumicas de este genero
PROCEDIMIENTO
El rpocedimiento fue segn la gua de practica de microbiologa medica
Resultados
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ESTUDIO DE LOS GENEROS HAEMOPHILUS Y BORDETELLA
GNERO HAEMOPHILUS
1. Procedimiento:
En agar sangre:
- Sembrar por agotamiento y por puntura la muestra de Haemophilus y de
Staphilococcus aureus, para lo cual se necesit la secrecin farngea de dos
alumnos y se dividi la placa en dos.
2. Resultados
Agar chocolate
Agar sangre: Fenmeno de satelitismo
Tincin Gram:
Se obtuvo la siguiente imagen al microscopio con aumento de 100X
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3. Interpretacin:
En agar sangre:
La cepa de Haemophilus influenzae creci en la zona hemoltica creada por Staphylococcus
aureus en la placa. La hemlisis de los eritrocitos por S. aureus libera nutrientes para el
crecimiento de H. influenzae (NAD o factor V). El NAD se difunde por el medio y estimula el
crecimiento de Haemophilus en la periferia de Staphylococcus.
H. influenzae no crecer fuera de la zona hemoltica de Staphylococcus aureus. Esto es
conocido como SATELITISMO.
En agar Chocolate:
Crecimiento macroscpico de Haemophilus influenzae se observan colonias, pequeas, blancas
y brillantes sobre agar chocolate, en ambas muestras esto se debe a que este microorganismo
requiere para su crecimiento los factores V (NAD) y X (hemina) de los glbulos rojos, componentes
del medio de cultivo agar chocolate que contiene sangre hemolizada.
Al microscopio:
Las especies de Haemophilus se tien de color rosado.
Aparece como bacilos o cocobacilos pequeos gram (-).
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GNERO BORDETELLA
Bordetella pertussis es el agente etiolgico e la tos ferina, enfermedad prevenible con la
vacunacin, que afecta exclusivamente al humano y se localiza en las vas areas superiores.
Pertenece al gnero Bordetella y fue aislada por primera vez en un cultivo puro en 1906 por
Bordet y Bengou
AGAR DE BORDET BENGOU:
La base de agar BordetGengou es una modificacin del medio originalmente descrito por Bordet y
Gengou para el cultivo de Bordetellapertussis
Caractersticas del medio de cultivo:
Las colonias de BORDETELLA PERTUSSIS son prcticamente transparentes, poco definidas,
brillantes y de dimetro inferior a 1 mm con un estrecho halo de hemlisis tipo: beta.
BORDETELLA PARAPERTUSSIS tiene un crecimiento ms rpido. Las colonias son similares y
dan una coloracin verde oscura al medio.
El medio se debe incubar en aire a 35C y en una cmara humidificada durante 7-12 das
LMINA OBSERVADA EN PRACTICA
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AISLAMIENTO DE ENTEROPATOGENO COPROCULTIVO
Objetivos Identificar los entero-patgenos ms frecuentes en los coprocultivos
Identificar mediante la diferenciacin bioqumica los diferentes entero.patogenos
Identificacin presuntiva y rpida de bacterias entricas gram negativas por los medios TSI
y LIA
Procedimiento Se us una muestra, proporcionada por el laboratorio de microbiologa, en medio de transporte
CARY Y BLAIR (CB) y se procedi a la siembra.
1ero. se realiza un aislamiento primario a partir de la muestra problema en los siguientes medios
Medio Mac Conkey (MC)
Medio Salmonella Shiguella (SS)
Caldo selenito
2do en base a los resultados obtenidos en el aislamiento primario se siembra en los medios:
Tubos de TSI (3)
Tubos de LIA (3)
Resultados:
1. Procedimiento bsico primario
1 se realiza un aislamiento primario a partir de la muestra problema
Estra por agotamiento
Puntura
Puntura Para mantener un cultivo extra de las
cepas (Enterobacterias)
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Medio Mac Conkey colonias Medio Salmonella Shiguella colonias negras y blancas
2do. Siembra en tubos TSI y LIA
Se har la siembra de la siguiente manera
MEDIO / COLONIAS TSI LIA
Agar Salmonella Shiguella colonias negras Tubo A Tubo A Agar Mac conkey Tubo B Tubo B Agar Salmonela Shiguella colonias blancas Tubo C Tubo C
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2. identificacin bacteriana .
TUBO A
MEDIO TSI Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): Las colonias fermenta glucosa (+),
lactosa (+) y sacarosa (+)
Ausencia de ennegrecimiento del medio indica que las colonias no producen cido
sulfhdrico: cido sulfrico (-)
No hay presencia de gas. Gas (-)
MEDIO LIA Pico violeta / fondo violeta (superficie alcalina / profundidad alcalina): Descarboxilacin
de la lisina (+)
Ausencia de color rojo vino en el pico: Desanimacin negativa (-)
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TUBO B
MEDIO TSI Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): Las colonias fermenta glucosa (+),
lactosa (+) y sacarosa (+)
Presencia de ennegrecimiento del medio indica que las colonias producen cido
sulfhdrico: cido sulfrico (+)
No hay presencia de gas. Gas (-)
MEDIO LIA Pico violeta / fondo violeta (superficie alcalina / profundidad alcalina): Descarboxilacin
de la lisina (+)
Pico violeta
(medio
alcalino):
desanimacin
(-)
Pico amarillo
(medio cido):
sacarosa (+)
y lactosa (+)
Fondo
amarillo
(medio cido):
Glucosa (+)
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Ausencia de color rojo vino en el pico: Desanimacin negativa (-)
TUBO C
MEDIO TSI Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): Las colonias fermenta glucosa (+),
lactosa (+) y sacarosa (+)
Ausencia de ennegrecimiento del medio indica que las colonias no producen cido
sulfhdrico: cido sulfrico (-)
presencia de gas. Gas (+)
MEDIO LIA Pico violeta / fondo violeta (superficie alcalina / profundidad alcalina): Descarboxilacin
de la lisina (+)
Pico violeta
(medio
alcalino):
desanimacin
(-)
Cuerpo violeta
(medio alcalino):
Descarboxilacin
(+)
Pico amarillo
(medio cido):
sacarosa (+)
y lactosa (+)
Fondo
amarillo
(medio cido):
Glucosa (+)
cido sulfrico
(+)
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ausencia de color rojo vino en el pico: Desanimacin negativa (-)
3.- Tipificacin Bacteriana: Se hizo la lectura segn la tabla de la gua que es un patrn de laboratorio.
PATRON LABORATORIO En TSI:
Citrato de
Simons
Gas H2S Indol Lisina Motilidad Ornitina Sacarosa Ureasa Lactosa Gelatinasa Glucosa
Klebsiella V V - V V - - V V + - +
salmonella V V V - V + V - - - - +
echerichia V + - + + V V V - + - +
Cuerpo violeta
(medio alcalino):
Descarboxilacin
(+)
Pico amarillo
(medio cido):
sacarosa (+)
y lactosa (+)
Fondo
amarillo
(medio cido):
Glucosa (+)
Pico violeta
(medio
alcalino):
desanimacin
(-)
Gas (+)
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INDOL (+) INDOL (-)
DESCARBOXILACION Escherichia coli
Edwarsiella
Salmonella typhi
Arizona
Klebsiella serratia
Enterobacter
DESAMINACION Proteus vulgaris
Providencia
Proteus mirabilis
NEGATIVO
Citrobacter
Yersinia
Shigella
Escherichia coli
Yersinia
Serratia
Shigella
Enterobacter
RESULTADOS DE TUBO EN LABORATORIO
Citrato de
Simons
Gas H2S Indol Lisina Motilidad Ornitina Sacarosa Ureasa Lactosa Gelatinasa Glucosa
Tubo A
- - - + + - +
Tubo B
- + + + - +
Tubo C
+ - + + + - +
En LIA:
TUBO A TUBO B TUBO C
DESCARBOXILACION Positivo
positivo positivo
DESAMINACION Negativo
negativo negativo
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4.- Conclusiones (Diagnostico en laboratorio) Finalmente con todas estas caractersticas arrojadas, se logr tipificar a la bacteria:
Tubo A: Klebsiella, una enterobacter gram (-), anaerobia facultativa
Tubo B: Salmonella, una enterobacter gram (-), anaerbico facultativo
Tubo C: Escherichia, una enterobacter gram (-), anaerbica facultativa
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ESTUDIO DE BACILOS AEROBICOS ESPORULADOS: BACILLUS
Objetivos
Diferenciar las 2 especies de este gnero: Bacillus anthracis y Bacillus
subtilis.
Reconocer las diferencias bioqumicas del Bacillus subtilis con
respecto a la accin sobre el almidn, presencia de hemolisis, accin
sobre las protenas (gelatina) y movilidad.
Observar las caractersticas estructurales frente al microscopio.
Bacillus subtilis Agar almidn: hidrolisis (+)
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ESTUDIO DE BACILOS AEROBICOS NO ESPORULADOS: CORYNEBACTERIUM
Objetivos
Observar la formacion de colonias negras por la reduccin del componente telurito del
agar.
Observar la caractersticas gentica y morfolgica: grnulos metacromaticos
Corynebacterium diphterieae Agar ATK
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BACILOS ANAEROBICOS ESPORULADOS: GENERO CLOSTRIDIUM
OBJETIVOS
Determinar la condicin de un medio anaerbico
Verificar el crecimiento lento de este genero
La capacidad de crecer en un medio reductor como el caldo de
carne(bifsico)
Clostridium sp. Caldo de carne
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FAMILIA PSEUDOMONADACEAE
OBJETIVOS
Reconocer el medio selectivo para las Pseudomonas
Reconocerlos frente al microscopio
PROCEDIMIENTO
Se inoculo el agar cetrimida (medio selectivo) para la inoculacin por medio de estra por
agotamiento.
Resultados
Se obtuvo colonias transparentes, redondas, lisas de bordes irregulares; Estas colonias producen
un pigmento verde (pioverdina)
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FAMILIA SPIROCHAETACAE y LEPTOSPIRACEAE
OBJETIVOS
Identificar las caractersticas microscpicas de la Borrelia y Leptospiras
Diferenciar las caractersticas propias de cada genero
PROCEDIMIENTO
Se obtuvo sarro dentario de un alumno voluntario, esta muestra se fij mediante un extendido en
una lmina porta objetos.
Al extendido se le aplico la tincin gram y se llev al microscopio.
Resultados
leptospira Borrelia
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GENERO MICOBACTERIUM
OBJETIVOS
Determinar el medio selectivo para el crecimiento de BK: Lowenstein Jensen
Observar y reconocer microscpicamente la especie tuberculosis
Reconocer los diferentes exmenes para la deteccin del Micobacterium tuberculosis
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OBSERVACIN DE LMINAS COLOREADAS CON RICKETTSIAS. COLORACIN
DE MACHIAVELLO
OBJETIVOS
Reconocer microscpicamente la bacteria
Identificar la epidemiologia de las rickettsiosis
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OBSERVACION DE CULTIVO Y LMINAS COLOREADAS CON BARTONELLA
OBJETIVOS
Reconocer el gnero Bartonella en el microscopio
Reconocer e identificar la morfologa bacilar y cocoide frente a los
hemates.