Extracción de Adn de Células de La Mucosa Bucal Presentes en La Saliva
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EXTRACCIÓN DE ADN DE CÉLULAS DE LA MUCOSA BUCAL PRESENTES EN LA SALIVA OBJETIVO Extraer el ADN de las células de la mucosa bucal y observar su estructura fibrilar y el alto grado de empaquetamiento que éste tiene dentro del núcleo celular. FUNDAMENTO El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Para poder extraerlo es necesario romper las células y separar el núcleo para después romper éste y liberar el ADN. Una vez liberado se debe separar de las proteínas y precipitarlo para su extracción. MATERIAL - Alcohol de 96º. - Un tubo de ensayo. - Varilla de vidrio. - Vaso de precipitados de 50 ml - Solución de detergente al 25% - Solución de NaCl al 6% PROCEDIMIENTO 1. Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico de 96º. 2. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células de descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la acción de los enzimas contenidos en ella) 3. En el mismo vaso añadir 20 ml de agua y 1 gramo de NaCl junto a un par de gotas de detergente de lavavajillas removiendo suavemente sin que se forme espuma. 4. Expulsar el agua de enjuague en el vaso de precipitados sobre la solución anterior y remover con
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EXTRACCIN DE ADN DE CLULAS DE LA MUCOSA BUCAL PRESENTES EN LA SALIVA
EXTRACCIN DE ADN DE CLULAS DE LA MUCOSA BUCAL PRESENTES EN LA SALIVAOBJETIVO
Extraer el ADN de las clulas de la mucosa bucal y observar su estructura fibrilar y el alto grado de empaquetamiento que ste tiene dentro del ncleo celular.
FUNDAMENTO
El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para formar la cromatina. Para poder extraerlo es necesario romper las clulas y separar el ncleo para despus romper ste y liberar el ADN. Una vez liberado se debe separar de las protenas y precipitarlo para su extraccin.MATERIAL
- Alcohol de 96.- Un tubo de ensayo.- Varilla de vidrio.- Vaso de precipitados de 50 ml
- Solucin de detergente al 25%
- Solucin de NaCl al 6%
PROCEDIMIENTO
1. Preparar un tubo de ensayo con alcohol etlico de 96.
2. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enrgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor nmero posible de clulas de descamacin de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la accin de los enzimas contenidos en ella)
3. En el mismo vaso aadir 20 ml de agua y 1 gramo de NaCl junto a un par de gotas de detergente de lavavajillas removiendo suavemente sin que se forme espuma.
4. Expulsar el agua de enjuague en el vaso de precipitados sobre la solucin anterior y remover con la cucharilla suavemente durante varios minutos sin que se forme espuma.
5. Aadir la solucin suavemente al tubo de ensaye que contiene el alcohol dejndola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, ms denso que el alcohol y algo turbio se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formar un sobrenadante por encima de la fase acuosa en la que se encuentra el ADN en disolucin provocando que ste precipite.6. Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-agua formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un frumo de aspecto algodonoso.
