Evolución Dirigida de Lipasa de Pseudomonas Aeruginosa Para
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18/04/2023
Evolución dirigida de lipasa de Pseudomonas aeruginosa
para la mejora de la actividad en la hidrólisis de
amidasCINÉTICA QUÍMICA Y ENZIMÁTICA
Jose Luis Rodrigo Loyola Llori
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Características generales
• Triacilglicerol hidrolasas (EC 3.1.1.3).
• Serin-hidrolasas.• Amplia especificidad
de sustrato.• Preparación de
productos químico puros y fármacos ópticamente activos.
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Sitio activo• Ser-His-Asp/Glu.• Parecido a serin-
proteasas (espejo).• Escasa actividad
amidasa.• Resonancia
estabilizada de las amidas.
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Serin-proteasas
• Actividad amidasa disminuye, mientras actividad esterasa aumenta cuando ocurren cambios.
• Las proteasas son mas evolucionadas que las lipasas. • ¿Por qué las lipasas no
hidrolizan amidas a pesar de su similitud con las serin-proteasas?
• ¿Las lipasas pueden evolucionar para hidrolizar amidas?
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ObjetivoEvolución dirigida de una lipasa de
Pseudomonas aeruginosa para mejorar la actividad amidasa.
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Ensayo de actividad amida- y ester-hidrolasa
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• 1 U de actividad amidasa: cantidad de lipasa que liberó 1 umol de 2-naftil amina por minuto.
• 1 U de actividad esterasa: cantidad de lipasa que liberó 1 umol de 2-naftol por minuto.
Ensayo de actividad amida- y ester-hidrolasa
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Fundamento