Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia
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Lic. Tecnólogo MédicoAlejandro Bustamante del Río
Servicio de Hemoterapia y Banco de Sangre
Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen
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Conjunto de Actividades procesos y procedimientos previos para cumplir los requisitos mínimos para alcanzar la calidad.
Programa de Control Calidad.
Programa de Garantía de Calidad
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SGC Calidad totalGarantía de CalidadSatisfacción del usuario◦Aseguramiento de la calidad.
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Controlar y validar todos los materiales, insumos y equipos que intervengan o se utilicen para lograr desarrollar una labor o tarea en un área especifica.
El punto de partida de todo Sistema de Control de Calidad es el conocimiento detallado de la metodología de cada reactivo empleado. El control de calidad debe realizarse diariamente.
Reactivos deben de ser de procedencia confiable y tener licencia de la FDA o de la CE o similar.
Instrucciones de uso. Certificado de Origen y Calidad.
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AVIDEZ: Es la velocidad e intensidad de la reacción Ag-Ac al inicio de la aglutinación se mide en segundos.
ESPECIFICIDAD: Es la capacidad del Ac. para reconocer únicamente a su Ag. correspondiente.
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TITULO: Es la dilución en la que reacciona el Antisuero (Ac.) con su respectivo Antígeno se realiza en tubo y se cuantifica en cruces de ½ + a 4 + se considera el titulo hasta 1+
SCORE: Es la puntuación que se le da a cada una de las reacciones de las diluciones.
4+ : 10 ptos
3+ : 8 ptos2+ : 6 ptos1+ : 4 ptos½+: 3 ptos
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EquiposReactivosPersonal
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El equipamiento que debe tener un laboratorio debe ser el adecuado para el uso al que está destinado. Para garantizar su correcto funcionamiento es necesario cumplir las siguientes normas:
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La empresa suministradora deberá proporcionar al personal la capacitación necesaria para su uso.
Cada equipo deberá de tener una ficha donde se consignara detalles mínimos de su uso, y anotaran todos los incidentes, mantenimiento preventivo y correctivo.
En el momento de adquirir un equipo y después de hacerle reparaciones importantes, es necesario someterlo a un control o una calibración. (centrífugas, incubadoras de temperatura, lavadora de Coombs, etc.)
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Es preciso contar con un plan de mantenimiento periódico interno, realizado dentro del propio laboratorio, que comprenderá actividades de limpieza y de índole menor, así como un control externo para aquellos aparatos que se consideran críticos para garantizar la validez de los resultados.
El control externo será realizado preferentemente por la empresa que lo suministró y debe ser programado, según la actividad a la que esté sometido el aparato.
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Centrifugas para Inmunohematología. Baño María. Pipetas automáticas. Visor con lente de aumento. (Aglutinoscopio)
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VELOCIDAD RPM : Tacómetro TIEMPOS : Cronómetro CALIBRACION : Comportamiento
de GR en diferentes medios. METODOS
◦ CENTRIFUGACION INMEDIATA◦ LAVADOS Y ANTIGLOBULINA HUMANA
PARAMETROS◦ TIEMPO OPTIMO: El menor tiempo en que el,
sobrenadante se muestre transparente, y el botón celular definido y de fácil resuspensión◦ REACTIVIDAD 1+
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CONTROL DE TEMPERATURA: Diario RANGO ACEPATABLE : + 1ºC AGUA DESTILADA : Nivel y Cambio CALIBRACION: Termómetro Certificado
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Tubos de vidrio neutro Pipetas automáticas Punteras descartables Pipetas Pasteur Aglutinoscopio.
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El control de calidad debe estar diseñado de tal manera que garantice el funcionamiento adecuado de los equipos en las pruebas para las que se utilizan
Lo ideal es contar con los equipos adecuados centrifugas de inmunohematologia, baño maría, visor con luna de aumento.
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EquiposReactivosPersonal
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Todas los Bancos de Sangre deben de adquirir los reactivos que van a utilizar después de comprobar que cumplen sus especificaciones técnicas. Ello no significa, que no deban someterse a controles por parte del usuario, que deben abarcar:
Control de Reactivos, Sueros hemoclasificadores, suero de coombs, celulas, potenciadores, sueros raros, etc.
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Se debe registrar, en el momento de la recepción de los reactivos, que las condiciones de transporte, temperatura y fecha de expiración sean las adecuadas.
Se deberá de evaluar cada lote nuevo antes de usarlo en el laboratorio.
Se deberá cumplir con las instrucciones del fabricante para garantizar resultados correctos.
Se deberá realizar a diario controles internos apropiados para garantizar la repetitibilidad de los resultados.
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ANTISUEROS TIPIFICADORES POTENCIADORES y ENZIMAS ANTIGLOBULINAS GLOBULOS ROJOS
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Parámetros que se deben controlar
Requerimientos de calidad
Frecuencia de control
Control Ejecutado
por
Apariencia Ausencia de precipitado o partículas por inspección visual
Diario T.M responsable del área
Reactividad y
especificidad
No hemólisis inmune, ni formación de Rouleaux ni fenómeno prozona.
Reacciones claras con GR que contengan los antígenos correspondientes, no reacciones falsas
Cada lote nuevo
T.M responsable del área
Potencia Suero no diluido debe dar una reacción 3+ - 4+ usando suspensión GR 3% en solución salina temperatura ambiente. Los títulos deben ser 128 dils para anti-A, anti-B y anti-AB con A1- y células B; 64 dils con A2 y A2B
Cada lote nuevo
T.M responsable del área
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Parámetros a revisar
Requerimientos de calidad
Frecuencia de control
Control Ejecutados
por
Apariencia Similar a antisuero ABO
Diario T.M responsable del área
Reactividad y
especificidad
Similar a antisuero-ABO
Cada lote nuevo
T.M responsable del área
Potencia Suero no diluido debe dar una reacción de 3+ a 4+ en prueba designada para cada suero y un título de 16dils para anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-e y anti-CDE usando GR heterocigotos apropiados
Cada lote nuevo
T.M responsable del área
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Analizar el Anti-A y Anti-B con hematíes A1 y B
Para evaluar el Anti-AB deben incluirse hematíes grupo OLos hematíes reactivos A1 y B deben analizarse con un anticuerpo que reaccione a centrifugación inmediata
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Controles positivos y negativos
Hematíes de detección ( pantalla )
Hematíes D negativo A o B para grupo inverso
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Controles positivos y negativos.Controles positivos con expresión heterocigoto del antígeno.Debe realizarse el día de su uso.
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Registro de EvaluaciónRegistro de Evaluación
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Registro de EvaluaciónRegistro de Evaluación
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Antisuero Células Titulo Avidez
Anti A A1A2
256 dils128 dils
15 seg30 seg
Anti AB A1BA2B
128 dils 64 dils
30 seg45 seg
Anti B B 256 dils 15 seg
Anti Rho (D)
R1R1/DCeR2R2/DcE
32 dils 32 dils
60 seg60 seg
Valores Referenciales
Datos referenciales de valores en sueros humanosActualmente se trabaja con sueros de origen monoclonal
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ANTISUEROS TIPIFICADORES POTENCIADORES Y ENZIMAS ANTIGLOBULINAS GLOBULOS ROJOS
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Potenciadores◦ Albumina bovina 22% (proteinograma electrof)◦ Polietilenglicol PEG ◦ Solución Liss.
* Control negativo cada día que se useConsiderar las indicaciones de fabricante
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Enzimas◦ Bromelina◦ Papaina◦ Ficina◦ Tripsina
* Control positivo y negativo* Anticuerpo Rh diluido (bajo titulo)* Anticuerpo Duffy, M, N, S y s
Las enzimas rompen las cadenas de las Glicoforinas exponiendo los Ags de membrana a la superficie del GR.
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Parámetros que se deben
controlar
Requerimientos de calidad
Frecuencia de control
Control Ejecutado
por
Apariencia No precipitados, partículas o formación de gel a la inspección visual
Diario T.M responsable del área
Pureza Más de 98% en albúmina por determinación electroforética.
Cada lote nuevo
T.M responsable del área
Reactividad No aglutinación de GR desensibilizados; no actividad hemolítica; no fenómeno prozona o de "encolamiento" .
Diario T.M responsable del área
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ANTISUEROS TIPIFICADORES POTENCIADORES Y ENZIMAS ANTIGLOBULINAS GLOBULOS ROJOS
![Page 35: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/35.jpg)
Cada día que se usen.Controles positivos y negativos.Poliespecífico-control para Anti-IgGHematíes sensibilizados con IgG (CCC)
* Confirman la actividad de la antiglobulina* Verifican el lavado adecuado de la pruebaHematíes revestidos con C3d
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Parámetros que se deben controlar
Requerimientos de calidad Frecuencia de control
Control Ejecutado
por
Apariencia No precipitados, ni partículas en la inspección visual
Diario T.M responsable del área
Reactividad y especificidad
a. No actividad hemolítica; no aglutinación de GR desensibilizados de cualquier grupo ABO
b. Aglutinación de GR sensibilizados con suero anti-D, conteniendo no más de 10 ng/ml de actividad de anticuerpos
c. Aglutinación de GR sensibilizados con aloanticuerpos que fije complemento (ej.: anti-Jka) a un título mas elevado en presencia que en la ausencia del complemento
Diario T.M responsable del área
Diario
Cada lote nuevo
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1. Seleccionar de 3 a 5 unidades de GR de grupo “O positivo”. Tomar las muestras de un fragmento de la tubuladura distal.
2. Colocar las muestras en un único tubo y realizar 3 lavados con solución fisiológica. Al decantar el sobrenadante en el último lavado se obtendrá un volumen de paquete globular y se diluirá al 50% con solución salina.
3. Preparar un volumen igual al obtenido de GR al 50% de reactivo anti D diluido 1/10. Mezclar ambas soluciones e incubar a 37°C durante 1 hora. Mesclando por inversión cada 15 min.
4. Realizar 3 a 4 lavados con solución salina, y preparar una suspensión al 2-5%.
5. Colocar una gota de la suspensión en un tubo y centrifugar 15 segundos a 3500 rpm.
Observar el patrón de aglutinación: si se observa aglutinación, continuar con los lavados hasta obtener una suspensión de glóbulos rojos que NO aglutine al ser centrifugada
![Page 38: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/38.jpg)
6. Una vez obtenida dicha suspensión globular, enfrentar una gota de esta con una gota de suero de Coombs . Centrifugar 15 segundos a 3500 rpm. Observar aglutinación. Para considerar que el resultado ha sido el esperado la aglutinación deberá ser positiva (2 + o 3+).
7. Pasar la muestra obtenida a un frasco con gotero. Registrar en la etiqueta del mismo:” Células para Control de Coombs”, concentración, fecha de elaboración y fecha de vencimiento (15 días a partir de la fecha de elaboración).
8. Almacenar a 2º a 4°C
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ANTISUEROS TIPIFICADORES POTENCIADORES Y ENZIMAS ANTIGLOBULINAS GLOBULOS ROJOS
![Page 40: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/40.jpg)
Parámetros que se deben controlar
Requerimientos de calidad
Frecuencia de control
Control Ejecutados
por
Apariencia No hemólisis ni turbidez en el
sobrenadante por inspección visual
Diario T.M responsable del área
Reactividad y especificidad
Reacciones claras con antisueros
selectivos contra antígenos de
glóbulos rojos
Cada nuevo lote en el primer y
último día de la vida de
almacenamiento
T.M responsable del área
![Page 41: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/41.jpg)
Inspección visual* Hemólisis* Cambio de colorReactividad de los antígenosPruebas con suero/plasma de pacientes o con un Ac de bajo titulo.
![Page 42: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/42.jpg)
Ni Hemolisis Expiración Suspensión adecuada Especificidad Fenotipo conocidos No Coombs Directo +
![Page 43: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/43.jpg)
EquiposReactivosPersonal
![Page 44: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/44.jpg)
El personal deberá tener los títulos apropiados y la adecuada formación en la especialidad que garantice los resultados obtenidos a nivel profesional y técnico.
El personal debe saber no solo cómo realizar las pruebas, sino el porqué de las mismas y las consecuencias de no seguir los procedimientos normatizados.
Antes de encomendarle la responsabilidad de una determinada tarea a un miembro del personal, es necesario que este haya superado una formación adaptada a su puesto y algunas pruebas de pericia.
![Page 45: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/45.jpg)
Se establecerá una formación continuada de capacitación en forma periódica y una formación específica ante variaciones de las tareas, la aplicación de nuevas técnicas, o cualquier otro cambio.
El personal deberá firmar siempre el trabajo que realiza y estará sujeto a auditorias internas para el mejoramiento y aseguramiento de la calidad en las pruebas.
Los no conformidades serán motivo de capacitación adicional.
![Page 46: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/46.jpg)
Competencia- La capacidad de la persona de realizar ciertas tareas
Proficiencia- Determina el grado de pericia del personal en la resolución de problemas.
(palabra de origen Ingles proficiency que se refiere al dominio de una lengua)
![Page 47: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/47.jpg)
Disminución de errores Documentación de la capacidad de realizar
las pruebas Identificación de debilidades del personal Aumento en la productividad
![Page 48: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/48.jpg)
Personal puede sentirse amenazado.
Puede causar resentimiento entre el personal y la persona a cargo del programa.
![Page 49: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/49.jpg)
INTERNO FORMACION CONTINUA EVALUACION INTERNA MUESTREO CIEGO PRECISION EXACTITUD
EXTERNO ORGANIZACIONES SALUD
MUESTREO CIEGO
CIRCULOS CALIDAD
ACREDITACION
![Page 50: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/50.jpg)
Qué se va a evaluar? Qué método de evaluación se va a
emplear? Quién será evaluado y con que frecuencia? Quién revisará los resultados? Cómo se documentarán los resultados?
![Page 51: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/51.jpg)
El objeto principal de las pruebas de Control de Calidad en el laboratorio es asegurar que los resultados obtenidos son correctos
Debe mantenerse lo más simple posible
![Page 52: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/52.jpg)
Son varios los aspectos que deben controlarse para conseguir resultados correctos. En esta búsqueda de la calidad desempeñan un papel determinante factores tales como los reactivos utilizados, la precisión de los equipos, las técnicas utilizadas y, desde luego, la formación y destreza del personal que las ejecuta
![Page 53: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/53.jpg)
Cometer errores es parte consustancial de la condición humana, pero a su vez es algo que en la práctica no se puede permitir. Por esta razón, la organización y los métodos de trabajo de cualquier centro deben tener como objetivo establecer barreras contra posibles fuentes de error. Toda organización debe recoger y analizar los errores observados, así como los que estuvieron a punto de cometerse, porque de su estudio deben nacer las medidas encaminadas a evitar que se repitan. Las causas de error más frecuentes en un laboratorio de inmunohematología suelen ser de origen organizativo o técnico:
![Page 54: Evaluacion de La Calidad en Inmunohematologia](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022061320/5572108c497959fc0b8d5779/html5/thumbnails/54.jpg)
Identificación incorrecta de las muestras. Puede no estar indicado el origen del tubo de sangre piloto o el de la unidad de sangre correspondiente, o bien el del tubo piloto y la identidad del paciente al que se le debe transfundir la sangre. Para evitar errores de identificación se debe usar de modo rutinario un sistema numérico que debe ser bien conocido por todos los miembros de la organización encargados de ejecutar tareas transfusionales, sea o no informatizado el sistema. En el caso de las unidades de sangre, siempre se deberá proceder a analizar los grupos ABO y D por duplicado, una vez con la sangre del tubo que acompaña a la bolsa de sangre y otra con el tubo piloto, anotando cuidadosamente la identidad de ambos.
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Errores en la transcripción de los resultados a los registros, sean estos informáticos o manuales.
En el caso de registros informáticos se evitan los errores en los procesos que se realizan automáticamente mediante conexiones en línea. Cuando la transcripción es manual, el T.M. que hace el análisis y transcribe los resultados está obligado a firmar y su firma sirve como comprobante. Aunque la existencia de protocolos obliga a todos los técnicos a realizar las pruebas de una misma manera, no se recomienda que una persona inicie una técnica y que otra la termine y registre el resultado.
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Los reactivos. Los problemas pueden deberse, por
ejemplo, a la caducidad de los reactivos o a su alteración por almacenamiento en condiciones poco idóneas. Es necesario realizar un control de la reactividad de los mismos con una o más muestras conocidas.
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Las muestras. La calidad de las muestras puede verse afectada por las técnicas de extracción y de conservación.
El equipo. Los instrumentos empleados pueden ser defectuosos.
Los métodos. Pueden surgir errores debido, entre otras cosas, a prácticas inadecuadas o a no seguir las instrucciones del fabricante de los reactivos usados.
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