Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées...
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Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et
HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza
humains et animaux.
MASTER 2 GBC – 29-30 JUIN 2009UCBL
VIRPATHCNRS FRE 3011
DR MANUEL ROSA-CALATRAVAPR BRUNO LINA
JEAN-CHRISTOPHE LE BAYON
ED 341 – E2M2
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2
•Virus Parainfluenza de type 2
•Entrée du virus
•État de l’art
État de l’art
•Caractérisation des mutations
Projet
•Encadrement
•Projet professionnel
Adéquation
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3
hPIV2 ET NDVFamille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus
Avulavirus
Terr
ier e
t al.
(200
8)
•Maladies respiratoires•Pas de vaccins/antiviraux•Virus enveloppé Ø 200nm •ARN négatif, simple brin
L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN
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MEMBRANE FUSION
F HN
Viral envelope
Cellular membrane
F1
HN
S
S
F2
C N
NC
Fusion peptide
Cytoplasmic tail
Extracellular domain
Transmembrane region
HR1
HR2
F
Taki
mot
o et
al.
(200
2)
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5
OBJECTIVES•hPIV-2 variants with increased cell-cell fusion:T96A mutation (Terrier et al., 2008)
•PIV-5 “HN-independent” F :L22P, K132E and V290A (Ito et al., 1998, 2009)
•PIV5 / hPIV2 F sequences: 51% identity
Functional characterization of F GP hPIV2 mutants :T96A and mutations transposed from PIV-5
Role in fusion and HN-F activation mechanisms ?
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6
T96A: favorise l’activation par HN
I24P: F “indépendante” de HN
K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion
I294A: favorise l’activation par HN
CONCLUSIONT
ête
Tig
e
I24PI294A
T96A
K133E
2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN
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7
PROJET DE THÈSE
Expression de glycoprotéines (WB, FACS)Interactions entre F et HN(CoIP)Comportement des mutants dans un contexte viral ou pseudo-viral (VLP and Reverse Genetics)Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-mix assay)Caractérisation de nouveaux mutants grâce à des variants (sequencing, fusion assay)
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Comprendre le mécanisme d’entrée du virus dans la cellule
→ Design de nouvelles molécules anti-virales
CONTRIBUTION SCIENTIFIQUE DU PROJET
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ACKNOWLEDGMENTS
Dr Olivier TerrierDr Manuel Rosa-CalatravaPr Bruno LinaChristelle Godard and Gaëlle Cartet for their technical support
All VirPath team for their support