Estudios in Vitro
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Estudios Invitro e In vivo
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Existen dos clases de ensayostoxicológicos, los ensayos in vitro (queson realizados sobre tejidos, células uórganos) y los ensayos in vivo (enorganismos vivos).
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En la medida de lo posible los ensayosin vivo recurrirn al menor número deindividuos posible e in!igirn elmínimo sufrimiento necesario.
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"os ensayos in vivo son imprescindibles,pues aunque los modelos biológicos empleados tienen signi#cativasdi$erencias con el modelo &umano, sonun aporte crítico de información.
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"as pruebas in vivo requieren de unaevaluación exitosa para poderconsiderarse idóneas y poder serllevadas a cabo.
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"os estudios in vitro se realizangeneralmente en las células o tejidosanimales o &umanos $uera del cuerpo.
'ienen la ventaja de que no con$rontaproblemas de tipo ético y adems
permite un estudio ms preciso delmecanismo de acción en s mismo.
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"a expresión in vitro (en vidrio) se re#ere a losprocedimientos que se realizan sobre matarialvivo o componentes de material vivo en placaspetri o en tubos de ensayo en condicionesde#nidas.
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estos ensayos no permiten un estudio de lasposibles inter$erencias debidas al metabolismodel resto del organismo ni tampoco tienen encuenta la capacidad de absorción del tóxico, yese el motivo por el cual, a pesar de los
problemas éticos, los ensayos in vivo no puedenser sustituidos.
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uando se trata de un ensayo in vivo y quieredemostrarse la toxicidad de un compuesto se &ade corroborar en dos especies (roedor y noroedor), pero con precaución, por qué no todaslas especies estn igual de admitidas a la &ora de
aceptarse para ensayo toxicológico.
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*urante el desarrollo del experimentose tendr en cuenta el principio de lamnima dosis
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'ambién se tiene en cuenta la gradualidad, se
realizan pruebas de detección sistemtica o unn+mero limitado de estudios de toxicidadcomunes, que pueden bastar para determinar elriesgo o sealar la necesidad de realizar otras
investigaciones.
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El estudio realizado en los ensayos toxicológicosestar muy condicionado a la #nalidad misma delensayo, no todos los ensayos buscan determinarla toxicidad general de una sustancia, algunosensayos buscan in$ormación sobre un aspecto enparticular
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-e realizarn dos modos de observación a largoplazo, durante una parte mayoritaria del ciclo devida del organismo con el que se realiza elexperimento, y a corto plazo.
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-e realizarn ambos para determinar la toxicidadgeneral de un compuesto, estos estudiospermiten identi#car los órganos diana del tóxico ypueden indicar la necesidad de realizar otrostipos pruebas o pruebas ms espec#cas
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El modo de exposición debe asemejarse en loposible a la exposición que se dar en los seres&umanos, no es lo mismo que un tóxico se nosadministre va intravenosa que por va oral oin&alada, puesto que se llevan a cabo una serie
de modi#caciones y se traspasan una serie debarreras dependiendo que se trate de una va uotra.
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'ambién es importante medir los e$ectos sobre la
capacidad reproductora y los e$ectosteratogénicos.
-e deben medir los e$ectos agudos, semi/crónicosy crónicos, seg+n la cantidad de dosis en elperiodo de tiempo en el que se administran, quepuede ser una sola vez, a lo largo de semanas o alo largo de una parte importante de la vida
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-e comienza la investigación con un punto de
inicio donde no se observen e$ectos adversos,012E".
El diseo del experimento debe permitir irconociendo los e$ectos de la sustancia acrecientes concentraciones del mismo.
'ambién es muy importante la con#rmación delas dosis administradas reales
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El peso de los resultados obtenidos se determinaa partir de todos los datos disponibles deexperimentos, los datos de todos los estudiosdisponibles en los que se &ayan estudiadolquidos, células, tejidos u órganos iguales o
$uncionalmente relacionados.
"os resultados similares en di$erentes estudios yla demostración de relaciones dosis/respuesta ledan un valor agregado a la caracterización delpeligro.
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3no o ms resultados positivos en laspruebas in vitro generalmente exigen unseguimiento mediante pruebas in vivo. "osresultados positivos en los bioensayos exigen
una interpretación cuidadosa respecto delmecanismo de acción, las posiblesdi$erencias entre especies en relación con laincidencia de base y con la respuesta, ytambién de la extrapolación de los datos
obtenidos con altas dosis a las dosis bajas.
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Ensayos de citotoxicidad
in vitro 3n ensayo &abitual es el rojo neutro, se
realiza en células en cultivo, y en la mayorade las aplicaciones las células puedenmantenerse en placas de cultivo quecontiene 45 pocillos, cada uno de 5.6 mm dedimetro.
'ras el tratamiento con di$erentes
concentraciones, se lavan y se tien con rojoneutro, un colorante que puede absorber yretener +nicamente las células vivas.
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7rueba 8''.
El 8'' (bromuro de 9(6,:/di/metiltiazol/;/il)/;,:/die$eniltetrazolio) es un colorante de
tetrazolio que se reduce a color azul por laacción de enzimas mitocondriales.
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'oxicidad en órganos diana
-uelen utilizarse también en los ensayos invitro para evaluar la toxicidad en órganosdiana espec#cos.
8uc&as veces, cuando las células seextraen de animales y se ponen en cultivo,tienden a degenerarse rpidamente odesdi$erenciarse, es decir a perder susespecializaciones $uncionales (como si$uera un órgano).
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