Establecimiento de límite y evaluación de resultados

Los límites de acción por lo general son los límites establecidos por farmacopeas o entidades según la calidad

del agua y el uso que se le va a dar.

Límite de acción Se define como un valor numérico que, una vez excedido,

indica que el proceso está operando fuera de los parámetros normales.

Límite de alerta Se define como un valor numérico que cuando es

excedido indica que el proceso podría operar fuera de los parámetros normales.

Métodos alternativos Bioluminiscencia.Citometría de flujo y en fase sólida.La Epifluorescencia. La PCR.

Citómetria de flujo La citometria de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparametrico 

cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas  (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado.

La citometría de flujo es una tecnología (proceso) que permite la medida simultánea de múltiples características físicas de una sola célula. Estas medidas son realizadas mientras las células (partículas) pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de medida en una corriente de fluido (1).

La Epifluorescencia El microscopio de epifluorescencia es un

microscopio óptico. En un microscopio óptico convencional la luz atraviesa la muestra estudiada, mientras que en un microscopio de epifluorescencia la luz que incide sobre la muestra estudiada no la atraviesa sino que el mismo lente ilumina y recibe la luz emitida por la muestra.

Se observa un esquema de funcionamiento del microscopio de epifluorescencia. La luz procedente de la fuente (lámpara de mercurio o xenón), atraviesa un primer filtro que selecciona la longitud de onda capaz de excitar al fluorocromo, antes de incidir sobre la muestra. Esta luz se refleja en un espejo dicromático (o dicroico) e incide sobre la muestra, excitando al fluorocromo, el que emite fotones de una longitud de onda mayor que la incidente. La luz emitida por la muestra no se refleja sino que atraviesa el espejo dicroico y llega a un segundo filtro que selecciona la longitud de onda de emisión del fluorocromo. Finalmente, la luz ingresa a un fotomultiplicador que la convierte en una señal eléctrica.

La PCRes una técnica de biología molecular desarrollada en 1986

 por Kary Mullis,1 .Su objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.

Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.

Termociclador: aparato en el que se efectúa la PCR convencional.

Monitoreo del sistema de producción y distribución de agua de uso farmacéutico y cosméticoEl propósito del monitoreo del sistema de agua es:

Asegurar la estabilidad y el control del proceso de todo el equipamiento de generación, almacenamiento y distribución del sistema, y el control de calidad para una asegurar que consistentemente se cumplen los requerimientos microbiológicos, de endotoxinas bacterianas y la pureza química del agua.

Asegurar que el control de los parámetros críticos son adecuados para asegurar que pequeños cambios no afectan al sistema.

Proveer la garantía de la efectividad de los procesos de mantenimiento, limpieza y sanitización.

Los datos del monitoreo son capaces de identificar tendencias y un alerta temprano de desviación del estado de control y de aumento de la contaminación.

Salvo para el monitoreo del agua para inyectables (WFI), el cual debe ser diario, no existe una normativa que establezca la frecuencia del monitoreo microbiológico de aguas de uso farmacéutico, la frecuencia debe ser suficiente para asegurar que la calidad del agua cumpla con los criterios de aceptación según el tipo de agua y el uso que se le va a dar.

Investigación de resultadosLa interpretación e investigación de los resultados del análisis microbiológico de aguas puede ser dificultosa debido a:

La formación de biofilms, que puede desprenderse parcialmente en forma discontinua, obteniéndose recuentos erráticos, que no siguen una tendencia.

Por lo general el sistema de aguas opera en forma continua, y no hay un lote definido.

Es posible que en el sistema en diferentes momentos durante el día haya cambios de temperatura, concentración de ozono -si lo hubiera-, cantidad de agua utilizada o caudal de agua que se repone, u otra variable que pueda afectar a la calidad microbiológica del agua en algún punto de muestreo.

Las muestras de agua no pueden conservarse hasta obtener el resultado – utilizando los métodos tradicionales con medios de cultivo-, por lo que no es posible el reanálisis de una muestra similar a la original.

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/citometria.htm

http://iie.fing.edu.uy/investigacion/grupos/gti/timag/trabajos/2007/proteus/epifluorescencia.html