Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira Estudo...
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Érika Carvalho Silva
Disciplina: Termogênese nos seres vivosProfessora: Ana Maria Landeira
Estudo do papel da proteína CIDEA
no controle do estresse oxidativo
celular
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Família Cide
(Liang et al., 2003)
(Cory, 1998)
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Cidea e Cideb como indutoras de apoptose
(Inohara et al., 1998)
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Cide3 como indutora de apoptose
(Liang et al., 2003)
293T controle 293T CIDEB 293T CIDE3
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Expressão das proteínas Cide em humanos
(Inohara et al., 1998)
(Liang et al., 2003)
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Camundongos knockout
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CIDEA e UCP1
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AMPK e suas vias de sinalização
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AMPK e Cidea
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Modelo proposto
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
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Knockout
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
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MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
Knockout
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Superexpressão
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
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MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
Superexpressão
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MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
H+
H+ H+ H+ H+ H+H+H+
Superexpressão
![Page 16: Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira Estudo do papel da proteína CIDEA no controle do estresse oxidativo.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022070508/570638631a28abb82390144b/html5/thumbnails/16.jpg)
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
H+
H+ H+ H+ H+ H+H+H+
ROS
Superexpressão
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MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
H+
H+ H+ H+ H+ H+H+H+
ROS
Superexpressão
Morte celular!!!
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Objetivo
Caracterizar o papel da proteína Cidea no
controle do estresse oxidativo
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1) Estabelecimento do modelo
Linhagem Jurkat de célula T e células primárias
• Western blot para Cidea e UCP2
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2) Colocalização e inibição de UCP2 por Cidea
• Microscopia confocal
• Imunoprecipitação de proteínas • FACS para DiOC6
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3) Efeito do estresse oxidativo: tratamento com H2O2
• Célula Cidea-KO é mais resistente ao tratamento com peróxido de hidrogênio?
• Célula UCP2-KO produz mais espécies reativas de oxigênio?
• Após o tratamento com peróxido de hidrogênio, ocorre diminuição da interação entre
Cidea e UCP2?
• Doses celulares letais de peróxido de hidrogênio associado a tratamento com FCCP
em Cidea-KO inibe essa morte?
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AMPK na proteção celular do estresse oxidativo
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AMPK na proteção celular do estresse oxidativo
![Page 24: Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira Estudo do papel da proteína CIDEA no controle do estresse oxidativo.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022070508/570638631a28abb82390144b/html5/thumbnails/24.jpg)
4) Papel de Cidea na regulação de AMPK e outras vias metabólicas• Ocorre fosforilação de AMPK após tratamento com peróxido?
• Cidea é capaz de ubiquitinar AMPK e levá-la para a degradação?
• Não degradação de AMPK necessária para sobrevivência após tratamento com
peróxido?
• O que ocorre com enzimas da via glicolítica?
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5) Cidea como sensor redox?
• Modelagem molecular e localização das cisteínas.
• Mutagênese sítio-dirigida das cisteínas para avaliar capacidade de responder ao
estresse oxidativo.
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![Page 27: Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira Estudo do papel da proteína CIDEA no controle do estresse oxidativo.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022070508/570638631a28abb82390144b/html5/thumbnails/27.jpg)
Aceito para The Journal of Biologial Chemistry
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Outra proposta!
Será um inibidor das proteínas CIDE um
futuro medicamento anti-obesidade???