Enzimi Kbh Fs 2008
description
Transcript of Enzimi Kbh Fs 2008
-
Prof. dr. Ivana epelak
Ak.god. 2007/2008.
-
KliniKlinikaka
enzimologijaenzimologija kkorioritenje podataka o aktivnostima tenje podataka o aktivnostima enzimaenzima
uu
dijagnostidijagnostike svrheke svrhe
1. 1. Uroene greUroene greke metabolizma ke metabolizma
nasljedne, nasljedne, genetski uvjetovane bolesti (genetski uvjetovane bolesti (enzimopatijeenzimopatije))
22. . SteSteeni deficit enzima eni deficit enzima
obiobino zbog promjene no zbog promjene funkcije organa funkcije organa ((sinteza)sinteza)
33. . Razna patoloRazna patoloka stanja ka stanja
ooteteenje stanica i enje stanica i izlazak enzima u izlazak enzima u izvanstaniizvanstaninunu
tekutekuinu inu ((
aktivnostaktivnost))
-
Enzimi u stanicamaEnzimi u stanicama
a)a)
konstitutivni konstitutivni (sintetiziraju se stalnom brzinom (sintetiziraju se stalnom brzinom
nprnpr. . kreatinkreatin kinazakinaza,CK,CK proporcionalna masi miproporcionalna masi miiinih stanica, pojava u serumu nih stanica, pojava u serumu
uglavnom posljedica nekroze )uglavnom posljedica nekroze )
b)b)
InducibilniInducibilni
(sinteza enzima mijenja se u ovisnosti o (sinteza enzima mijenja se u ovisnosti o koncentraciji supstrata; najkoncentraciji supstrata; najeee enzimi koji pregrauju tvari e enzimi koji pregrauju tvari apsorbirane iz probavnog trakta; apsorbirane iz probavnog trakta; glukokinazaglukokinaza))
-
Enzimi Enzimi u u
serumuserumu
MiMiiinanaaktivnostaktivnost
Tkivn
a
Tkivn
a
sekre
cija
sekre
cija
Krvne
Krvne stanice
stanice
Obnova
Obnova stanica
stanica
Endo
tel
Endo
tel
ilaila
-
SadrSadraj enzima u krvi u svakom aj enzima u krvi u svakom trenutku uzimanja uzorka krvi rezultat trenutku uzimanja uzorka krvi rezultat
je:je:
oslobaanja iz stanicaoslobaanja iz stanica
nanaina ulaska u cirkulacijuina ulaska u cirkulaciju
nanaina eliminacije iz cirkulacijeina eliminacije iz cirkulacije
-
StaniStanini enzimi dospijevajuni enzimi dospijevajuu plazmu kao posljedica u plazmu kao posljedica obnove stanicaobnove stanica
StaniStanini enzimi pojani enzimi pojaanoanodospijevaju u plazmu kao dospijevaju u plazmu kao posljedica oposljedica oteteenja ilienja iliproliferacije stanicaproliferacije stanica
-
oslobaanje iz stanicaoslobaanje iz stanica
Plazma membrana (ALP, GGT)Plazma membrana (ALP, GGT)
Citoplazma (ALT, AST, LD, CK)Citoplazma (ALT, AST, LD, CK)
Mitohondrij (GLD, AST, CK)Mitohondrij (GLD, AST, CK)
Lizosom (ACP, NAG)Lizosom (ACP, NAG)
Mikrosomi (GGT)Mikrosomi (GGT)
-
oslobaanje iz stanicaoslobaanje iz stanica
Normalna stanica
Oteenje stanice
Smrt stanice
-
SadrSadraj enzima u krvi u svakom aj enzima u krvi u svakom trenutku uzimanja uzorka rezultat je:trenutku uzimanja uzorka rezultat je:
oslobaanja iz stanicaoslobaanja iz stanica
nanaina ulaska u cirkulacijuina ulaska u cirkulaciju(Mr, stupanj sinteze,stupanj o(Mr, stupanj sinteze,stupanj oteteenja stanice)enja stanice)
nanaina eliminacije iz cirkulacijeina eliminacije iz cirkulacije
-
nanaini ulaska u cirkulacijuini ulaska u cirkulaciju
vrlo permeabilna direktno
jetrabazalna membrana ulaze u slezena
stanica blizu kapilare krv
semi-permeabilna djelomino
srcebazalna membrana ili potpuno
guteraa stanica dalje od kapilare putem limfe
prostata
nepermeabilna obvezno
skeletnibazalna membrana putem
miii stanica daleko od kapilare limfe
-
MrMr
dijagnostidijagnostiki vaki vanih enzimanih enzima
LipazaLipaza 48 00048 000 AmilazaAmilaza 50 00050 000 KreatinKreatin kinazakinaza,CK,CK 80 00080 000 AspartatAspartat--aminotransferazaaminotransferaza, AST, AST 90 00090 000 AlaninAlanin--aminotransferazaaminotransferaza, ALT, ALT 180 000180 000 Kisela Kisela fosfatazafosfataza, ACP, ACP 100 000100 000 LaktatLaktat--dehidrogenazadehidrogenaza, , LDLD 140140 000000 Alkalna Alkalna fosfatazafosfataza, ALP, ALP 140 000140 000 --glutamilglutamil transferazatransferaza, GGT, GGT 82 000, 300 000, 82 000, 300 000,
1 000 1 000 000000
-
SadrSadraj enzima u krvi u svakom aj enzima u krvi u svakom trenutku uzimanja uzorka rezultat je:trenutku uzimanja uzorka rezultat je:
oslobaanja iz stanicaoslobaanja iz stanica
nanaina ulaska u cirkulacijuina ulaska u cirkulaciju
nanaina eliminacije iz cirkulacije;ina eliminacije iz cirkulacije;(RES, eliminacija bubrezima(RES, eliminacija bubrezima--manje znamanje znaajna)ajna)
-
nanaini eliminacije iz cirkulacijeini eliminacije iz cirkulacijeOTPUOTPUTANJETANJE
RASPODJELARASPODJELADIFUZIJADIFUZIJA
ELIMINACIJAELIMINACIJA
indirektno direktno
Intersticijskotkivo krv
limfa
mokraaOrgani za eliminaciju
-
Bioloki poluivot
enzima u plazmi
LDLD11 53 53
173 sata173 sataLDLD55 8 8
12 sata12 sata
CKCK 15 sati15 sati
ASTAST 12 12
22 sata22 sata
ALTALT 37 37
57 sata57 sata
ALPALP 3 3 7 dana7 dana
GGTGGT 3 3 7 dana7 dana
-
Enzimi kao Enzimi kao tkivnitkivni
biljezibiljezi
Osjetljivost:Osjetljivost: proizlazi iz odnosa proizlazi iz odnosa aktivnosti enzima u plazmi i pojedinim aktivnosti enzima u plazmi i pojedinim stanicama, odnosno tkivimastanicama, odnosno tkivima
SpecifiSpecifinost:nost: organorgan--specifispecifini enzimi (ni enzimi (i i izoenzimiizoenzimi)) /organ nespecifi/organ nespecifini enzimini enzimi
-
enzimi kao enzimi kao tkivnitkivni biljezibiljezi
ASTASTALTALTLDLDCKCK
SerumSerum EritrocitiEritrociti JetraJetra SrceSrce MiMiii
TkivnaTkivna
osjetljivostosjetljivost TkivnaTkivna
specifispecifinostnost
Enzimski profilEnzimski profil
-
Podjela enzima prema mjestu djelovanjaPodjela enzima prema mjestu djelovanja
Aktivnost u serumuAktivnost u serumuStaniStanini enzimini enzimi(AST, ALT, LD, GLD,(AST, ALT, LD, GLD,aldolazaaldolaza, CK, GGT i , CK, GGT i drdr.).)
U pravilu se poveU pravilu se poveavaavaprilikom oprilikom oteteenja stanica koje ihenja stanica koje ihsadrsadre.e.
Sekrecijski enzimiSekrecijski enzimiDjeluju u krvnoj plazmi (Djeluju u krvnoj plazmi (kolinesterazakolinesteraza, , Smanjuje se zbog funkcionalneSmanjuje se zbog funkcionalnefaktori koagulacije)faktori koagulacije)
insuficijencijeinsuficijencije
uzrokovaneuzrokovaneooteteenjem stanicaenjem stanica. .
Djeluju u probavnom traktu (Djeluju u probavnom traktu (amilazaamilaza, , lipazalipaza,,pepsinpepsin, , tripsintripsin
i i drdr.).)
PovePoveava seava sezbog ozbog oteteenja stanica u kojima seenja stanica u kojima seenzimi sintetiziraju, ili se smanjuje zbogenzimi sintetiziraju, ili se smanjuje zbogfunkcionalnog ofunkcionalnog oteteenja organa.enja organa.
-
Enzimi u plazmiEnzimi u plazmi
Enzimi iz Enzimi iz jetrejetreUloga u cirkulacijiUloga u cirkulaciji
Plazma specifiPlazma specifini enzimini enzimi Plazma nespecifiPlazma nespecifini enzimini enzimi
SerinSerin
proteazeproteaze::trombintrombin, faktor XII, faktor XIIFibrinolitiFibrinolitikiki
enzimienzimi
Enzimi sekrecijeEnzimi sekrecijeLipazaLipazaAmilazaAmilaza
ProstatiProstatinana
kisela kisela fosfatazafosfataza
StaniStanini enzimini enzimiLD, AST, ALTLD, AST, ALT
-
Plazma specifiPlazma specifini enzimini enzimi
Djeluju u plazmiDjeluju u plazmi Sintetiziraju se u Sintetiziraju se u jetrijetri U plazmi su prisutni u veU plazmi su prisutni u veim koncentracijama nego im koncentracijama nego
u tkivuu tkivu KliniKliniki znaki znaajna:ajna:aktivnostaktivnost Promjene Promjene pokazatelj funkcije pokazatelj funkcije jetrejetre
-
Plazma nespecifiPlazma nespecifini enzimini enzimi (aktivnosti (aktivnosti
u plazmi nego u tkivima)u plazmi nego u tkivima)
a)a)
enzimi sekrecijeenzimi sekrecije
egzokrineegzokrine
ljezdeljezde
(pankreas, prostata, (pankreas, prostata, mukozamukoza
eludca); eludca);
klinikliniki znaki znaajno: ajno: , zbog poja, zbog pojaane sinteze ili oteane sinteze ili oteaneaneeliminacije)eliminacije)KliniKliniki znaki znaajno: ajno:
(stanice o(stanice oteteene ili nekrotiene ili nekrotine)ne)
b)b)
Enzimi Enzimi intermedijarnogintermedijarnog
metabolizmametabolizma
koncentracije u koncentracije u tkivima vrlo visoke; otkivima vrlo visoke; oteteenje ili nekroza stanica enje ili nekroza stanica omoguomoguuje uje bijegbijeg
enzima u plazmu (CK, LD, AST, enzima u plazmu (CK, LD, AST,
ALT....)ALT....)
-
Referentni intervali za enzimeReferentni intervali za enzime
99 vrijeme uzimanja uzorka krvi vrijeme uzimanja uzorka krvi
99 dobdob
99 spolspol
99 rasarasa
99 fizifizika aktivnostka aktivnost
-
Promjene Promjene katalitikatalitikeke
aktivnosti enzima u serumuaktivnosti enzima u serumu
PojaPojaana sintezaana sinteza
PoremePoremeaj propusnosti staniaj propusnosti stanine membranene membraneNekroza staniceNekroza stanice
Smetnje u izluSmetnje u izluivanjuivanju
Smanjena sintezaSmanjena sinteza
PojaPojaana eliminacija uz normalnu sintezuana eliminacija uz normalnu sintezu
-
Uzroci oUzroci oteteenja stanicaenja stanica
HipoksijaHipoksija (gubitak krvi, anemije,...)(gubitak krvi, anemije,...) KemikalijeKemikalije ((iva, olovo, .....)iva, olovo, .....) Fizikalna oFizikalna oteteenjaenja ((smrzotine, opekotine, radijacija...)smrzotine, opekotine, radijacija...) MikrobioloMikrobioloki agensiki agensi (bakterije, gljivice, virusi...)(bakterije, gljivice, virusi...) ImunoloImunoloki mehanizmiki mehanizmi ((citotokicitotokinostnost)) Nutritivni Nutritivni imbeniciimbenici (nedostatak proteina, vitamina, (nedostatak proteina, vitamina,
minerala...)minerala...)
-
Glavni enzimiGlavni enzimi--klinikliniko znako znaenjeenje
Kisela Kisela fosfatazafosfataza
, ACP, ACP
karcinom prostatekarcinom prostateALTALT
bolesti bolesti jetrejetre
ALPALP
bolesti bolesti jetrejetre
i kostijui kostijuAmilazaAmilaza
akutni akutni pankreatitispankreatitis
ASTAST
infarkt infarkt miokardamiokarda,,bolesti bolesti jetrejetre, mi, miiinene
bolestibolestiCKCK
infarkt infarkt miokardamiokardamimiiine bolestine bolesti
GGTGGT
bolesti bolesti jetrejetreLipazaLipaza
akutni akutni pankreatitispankreatitis
LDLD
karcinom, infarkt karcinom, infarkt miokardamiokardabolesti bolesti jetrejetre
PseudokolinesterazaPseudokolinesteraza
otrovanja otrovanja organofosfornimorganofosfornimspojevimaspojevima
-
LAKTAT DEHIDROGENAZA (LD)LAKTAT DEHIDROGENAZA (LD)EC 1.1.1.27.EC 1.1.1.27.
LL--laktatlaktat: NAD: NAD++
oksidoreduktazaoksidoreduktaza
CH3HCOHCOOH
+ NAD+pH 8.8-9.8 LD
pH 7.4-7.8
CH3C = OCOOH
+
NADH+H+
infarktinfarkt
miokardamiokarda
megaloblastimegaloblastika ka anemijaanemija
akutnoakutno
oboljenjeoboljenje
jetrejetre
akutnoakutno
oboljenjeoboljenje
bubregabubrega
((mokramokraa)a)
infarktinfarkt
plupluaa
razlirazliitiiti
tipovitipovi
oboljenjaoboljenja
mimiiiaa
maligna maligna oboljenjaoboljenja
-
HH44
HH33
MM
HH22
MM22
HH11
MM33
MM44
LDLD11
LDLD22
LDLD33
LDLD44
LDLD55
EnzimEnzim
se se sastojisastoji
odod
4 4 polipeptidnapolipeptidna
lancalanca
kojikoji pripadajupripadaju
tiputipu
H (H (heartheart--srcesrce) i M () i M (musclemuscle--mimiii))
5 5 izoenzimaizoenzima--organ organ specifispecifinini
izoenzimiizoenzimi
-
ASPARTAT AMINOTRANSFERAZA (AST)ASPARTAT AMINOTRANSFERAZA (AST)EC 2.6.1.1.EC 2.6.1.1.; ; LL--aspartataspartat--22--oksoglutarat oksoglutarat aminotransferazaaminotransferaza
UuUunutarnutar
stanicestanice
nalazinalazi
se u se u citoplazmicitoplazmi
((izoenzimizoenzim
C; AST I; 35%) IC; AST I; 35%) Immmitohondrijimamitohondrijima
((izoenzimizoenzim
M; AST II; 65%)M; AST II; 65%)
infarktinfarkt
miokardamiokarda
virusnivirusni
hepatitishepatitis, , infektivniinfektivni
hepatitishepatitis,,
T tokT tokoksioksinni hepatitisi hepatitis, , cirozaciroza, , primarniprimarni
i i metastatskimetastatski
tumoritumori
jetrejetre,,muskularnamuskularna
distrofijadistrofija
LL--aspartataspartat
+ + --ketoglutaratketoglutarat
ASTAST
ooksalacetatksalacetat
+ L+ L--glutamatglutamatreverzibilna reakcija !reverzibilna reakcija !
-
AALANINLANIN
AMINOTRANSFERAZA (AAMINOTRANSFERAZA (ALLT)T)EC 2.6.1.EC 2.6.1.22..; ; LL--alaninalanin--22--oksoglutarat oksoglutarat aminotransferazaaminotransferaza
UuUunutarnutar
stanicestanice
nalazinalazi
se u se u citoplazmicitoplazmi
virusnivirusni
hepatitishepatitis, , infektivniinfektivni
hepatitishepatitis, , toksitoksikiki
hepatitishepatitis,,cirozaciroza
komplikacijekomplikacije
nakon infarkta, akutni nakon infarkta, akutni pankreatitispankreatitis
LL--alaninalanin
+ + --ketoglutaratketoglutarat
AALLTT
piruvatpiruvat
+ L+ L--glutamatglutamatreverzibilna reakcija !reverzibilna reakcija !
-
KREATIN KINAZA (CK)KREATIN KINAZA (CK)EC 2.7.3.2.EC 2.7.3.2.; ; ATPATP--kreatin Nkreatin N--fosfotransferazafosfotransferaza
EnzimEnzim
u u citoplazmicitoplazmi
stanicastanica
je je aktivanaktivan
kaokao
dimer dimer polipeptidpolipeptidaa
tipatipa
M (M (musclemuscle) i ) i polipeptidapolipeptida
tipatipa
B (B (brainbrain))
3 3 izoenzimaizoenzima
CKCK--BBBB
(CK(CK--1)1), , CKCK--MBMB
(CK(CK-- 2)2)
i CKi CK--MMMM
(CK(CK--3)3)
KliniKlinikiki
je je znaznaajnaajna
razlirazliita ita raspodjelaraspodjela
izoenzimaizoenzima
u u skeletnimskeletnim
i i srsranomanom
mimiiiu (CKu (CK--MB)MB)
-
KREATIN KINAZA, CKKREATIN KINAZA, CK
U citoplazmi ili membrani (CKU citoplazmi ili membrani (CK--MtMt) ) mitohondrijamitohondrija stanica stanica skeletnih miskeletnih miiia, srca, mozga (prostate, uterusa), a, srca, mozga (prostate, uterusa),
KreatinKreatin + ATP + ATP pH 9 pH 9 kreatinkreatin--P + ADPP + ADP
pH 6,7 pH 6,7
bbolesti skeletnih miolesti skeletnih miiiaa,b,bolesti srcaolesti srca, t, traumeraumecentralnog nervnog sustava, centralnog nervnog sustava, ttumori pluumori plua,a,prostate, mjehura, dojkeprostate, mjehura, dojke
......
-
ALKALNA FOSFATAZA (ALKALNA FOSFATAZA (ALPALP))EC 3.1.3.1.EC 3.1.3.1.; ; OrtofosfatOrtofosfat
monoester monoester fosfohidrolazafosfohidrolaza
AlkalneAlkalne
fosfatazefosfataze
(optimalni pH 9,8(optimalni pH 9,8--10,5)10,5)
susu
skupinaskupina glikoproteinaglikoproteina
smjesmjetenatena
uglavnomuglavnom
unutarunutar
stanistaninene
membranemembrane.
osteoblastiosteoblasti
kostijukostijustanicstanicee
hepatobilijarnoghepatobilijarnog
traktatrakta
stijenstijenkaka
crijevacrijevatubuli tubuli bubregabubrega
placentplacentaa. Bolesti kostijuBolesti kostiju(rahitis, (rahitis, PagetPaget))
Bolesti Bolesti jetrejetre(opstruktivne)(opstruktivne)Maligne bolesti Maligne bolesti
-
ALPALP
Djeluje na Djeluje na monoesteremonoestere fosforne fosforne kiseline stvarajukiseline stvarajui alkohol i fosfati alkohol i fosfat
Prirodni supstrat za ALP joPrirodni supstrat za ALP jo uvijek uvijek nepoznat; mnogo sintetskih supstratanepoznat; mnogo sintetskih supstrata
RazliRazliiti iti izoenzimskiizoenzimski oblici oblici ((elektroforezaelektroforeza, , izoelektriizoelektrinono fokusiranje, inaktivacija toplinom...)fokusiranje, inaktivacija toplinom...)
-
Kisela Kisela fosfatazafosfataza, ACP, ACP EC 3.1.3.2; EC 3.1.3.2; ortofosfatortofosfat
monoestermonoester
fosfohidrolazafosfohidrolaza
FosfatazeFosfataze s optimalnim pH
-
Ovisno o porijekluOvisno o porijeklu::
Inhibicija Inhibicija izoenzimaizoenzima
L(+) L(+) taratarattaratarat
formladehidformladehid
ProstataProstata
potpunapotpuna
minimalnaminimalna
EritrocitiEritrociti
minimalnaminimalna
znaznaajnaajna
Ostala tkivaOstala tkiva
znaznaajnaajna
umjerenaumjerena
!!! Tartarat
rezistentna ACP-
podrijetlom iz osteoklasta
(TR-ACP)
-
GLUTAMIL TRANSFERAZA (GLUTAMIL TRANSFERAZA (--GT)GT)EC 2.3.2.2.EC 2.3.2.2.; ; --glutamilglutamil--peptid:aminokiselinapeptid:aminokiselina
--glutamiltransferazaglutamiltransferaza
--glutamilglutamil
transferazatransferaza
((--GT) GT) najvinajvie se e se nalazinalazi
u u bubregububregu, , jetrijetri, , pankreasupankreasu
i i bilijarnombilijarnom
traktutraktu
PkataliziraPkatalizira
reakciju prijenosa reakciju prijenosa glutamilglutamil
skupine sa skupine sa supstrata davatelja na supstrat primateljsupstrata davatelja na supstrat primatelj
kKkKlinilinikiki
znaznaajnoajno
je je odreodreivanjeivanje
u u serumuserumu bolesnikabolesnika::
oboljenjaoboljenja
jetrejetre, , lijekovilijekovi, , alkoholalkohol
((indukcijaindukcija enzimaenzima))
-
AMILAZAAMILAZAEC 3.2.1.1.EC 3.2.1.1.; ; --1,41,4--glukan,4glukan,4--glukano glukano hidrolazahidrolaza
AmilazaAmilaza
u u serumuserumu
uglavnomuglavnom
potjepotjee e iziz
acinarnihacinarnihstanicastanica
guguteraterae, e, lijezdalijezda
slinovnicaslinovnica
((testisatestisa, , ovarijaovarija, ,
pluplua i a i masnogmasnog
tkivatkiva))
AmilazaAmilaza
ima ima malumalu
molekulskumolekulsku
masumasu
pa je pa je jedanjedan
odod
enzimaenzima iziz
serumaseruma
kojikoji
se se normalnonormalno
nalazinalazi
ii
u u mokramokraii
--amilazaamilaza
((endoamilazaendoamilaza) ) nalazinalazi
se u se u ljudiljudi
i i ivotinjaivotinja
a a hidrolizirahidrolizira
linearnelinearne
iliili
razgranaterazgranate
ugljikohidrateugljikohidrate
sastavljenesastavljene
odod
--D D glukozeglukoze
bilobilo
gdjegdje
u u lanculancu
stvarajustvarajui i brzobrzo
smjesusmjesu
dekstrinadekstrina, , maltozemaltoze
i i glukozeglukoze..
-
KOLINESTERAZA (ChE)KOLINESTERAZA (ChE) EC 3.1.1.8 EC 3.1.1.8 acilkolinacilkolin
acilhidrolazaacilhidrolaza
Dvije Dvije kolinesterazekolinesteraze, , tzvtzv. nespecifi. nespecifina ili na ili pseudokolinesterazapseudokolinesteraza, ChE, ChE((acilkolinacilkolin--acilhidrolazaacilhidrolaza) ili ) ili butirilkolinesterazabutirilkolinesteraza
i tragovi specifii tragovi specifinene
kolinesterazekolinesteraze, , AChEAChE
((acetilkolinacetilkolin--acetilacetil
hidrolazahidrolaza, EC. 3.1.1.7;, EC. 3.1.1.7;kolinesterazakolinesteraza
I). Dva enzima pokazuju razliI). Dva enzima pokazuju razliitu specifiitu specifinost premanost prema
raznim supstratima.raznim supstratima.
ChE u serumu potjeChE u serumu potjee pretee preteno od enzima koji se sintetizira u no od enzima koji se sintetizira u jetrijetri
i lui luiiu krv. u krv.
PseudokolinesterazaPseudokolinesteraza
je preteje preteno no tetramertetramer, a o, a okombinaciji kombinaciji podjedinicapodjedinica
ovisi njen ovisi njen izoenzimskiizoenzimski
sastav. Inhibira sesastav. Inhibira se
organofosfornimorganofosfornim
spojevima, spojevima, kvarternimkvarternim
amonijevimamonijevim
solima isolima idrugim drugim inhibitorimainhibitorima. .
-
ChE ChE hidrolizirahidrolizira razne estere razne estere kolinakolina, a najve, a najveu u aktivnost pokazuje prema aktivnost pokazuje prema butirilkolinubutirilkolinu
U dijagnostiU dijagnostike svrhe aktivnost ChE u serumu ke svrhe aktivnost ChE u serumu odreuje se prvenstveno kod jetrenih bolestiodreuje se prvenstveno kod jetrenih bolesti, , zatim kao indikator moguzatim kao indikator mogueg trovanja eg trovanja insekticidima te u otkrivanju bolesnika s atipiinsekticidima te u otkrivanju bolesnika s atipinim nim oblicima enzima, kod kojih postoji rizik oblicima enzima, kod kojih postoji rizik produproduenog odgovora na neke mienog odgovora na neke miiine ne relaksanserelaksanse((nprnpr. . sukcinildikolinsukcinildikolin, , mivakuriummivakurium) prilikom ) prilikom operativnih zahvata.operativnih zahvata.
. aktivnost !!!. aktivnost !!!
-
LIPAZALIPAZA EC 3.1.1.3; EC 3.1.1.3; triacilgliceroltriacilglicerol
acilacil
hidrolazahidrolaza
LipazaLipaza
hidrolizirahidrolizira
estere estere glicerolaglicerola
i i dugolandugolananihanih
masnih kiselina (u masnih kiselina (u --polopoloaju, na 1. i 3. C atomu). Aktivna je u kompleksu s aju, na 1. i 3. C atomu). Aktivna je u kompleksu s kolipazomkolipazom, a, aaktiviraju je aktiviraju je uune soli, kalcij i albumin.. ne soli, kalcij i albumin..
aktivnost u akutnom i kroniaktivnost u akutnom i kroninom nom pankreatitisupankreatitisu, , ileusileus, akutni , akutni kolecistitiskolecistitis, nekroza pankreasa, nekroza pankreasa
-
LipazaLipaza
se smatra organse smatra organ--specifispecifinim enzimomnim enzimompankreasa, iako je nepankreasa, iako je neto ima i u to ima i u elucu, sluznici tankogelucu, sluznici tankogcrijeva, leukocitima, masnim stanicama i mlijeku. crijeva, leukocitima, masnim stanicama i mlijeku. Nema je u mokraNema je u mokrai, jer iako se zbog male molekularnei, jer iako se zbog male molekularnemase filtrira u mase filtrira u glomerulimaglomerulima, potpuno se , potpuno se reapsorbirareapsorbira
uu
proksimalnimproksimalnim
tubulimatubulima..
-
enzimi kao enzimi kao tkivnitkivni biljezibiljezi
Karakteristike profila enzima u infarktu miokarda
satisati danidani
-
Metode za odreivanje Metode za odreivanje katalitikatalitikeke
aktivnosti enzimaaktivnosti enzima
O kojim O kojim imbenicima ovisi imbenicima ovisi katalitikatalitikaka aktivnost enzima ???aktivnost enzima ???
-
pH, pH, vrstevrste
i i ionskeionske
jakostijakosti
puferapufera
temperaturetemperature
koncentracijekoncentracije
supstratasupstrata
koncentracijekoncentracije
aktivatoraaktivatora
koncentracijekoncentracije
inhibitorainhibitora
Metode Metode kontinuiranog kontinuiranog
mjerenjamjerenja
Metode Metode diskontinuiranog diskontinuiranog
mjerenjamjerenja
Metode za odreivanje katalitiMetode za odreivanje katalitike aktivnosti enzimake aktivnosti enzima
-
Metode Metode kontinuiranog kontinuiranog
mjerenjamjerenja
Metode Metode diskontinuiranog diskontinuiranog
mjerenjamjerenjaMetode Metode
jedne ili (dvije) tojedne ili (dvije) tokeke
OptiOptiki testki test
Metode s umjetnim supstratimaMetode s umjetnim supstratima
Metode za odreivanje katalitiMetode za odreivanje katalitike aktivnosti enzimake aktivnosti enzima
-
Metode Metode kontinuiranog kontinuiranog
mjerenjamjerenja
OptiOptiki testki test
Metode s umjetnim supstratimaMetode s umjetnim supstratima
OptiOptiki test 1. stupnjaki test 1. stupnja
OptiOptiki test 2. stupnjaki test 2. stupnja
OptiOptiki test 3. stupnjaki test 3. stupnja
Metode za odreivanje katalitiMetode za odreivanje katalitike aktivnosti enzimake aktivnosti enzima
-
Kataliziraju istu kemijsku reakcijuKataliziraju istu kemijsku reakciju
Imaju razliImaju razliite fizikalnoite fizikalno--kemijske kemijske osobineosobine
(izozimi, izoforme, varijante enzima, subfrakcije, podtipovi, (izozimi, izoforme, varijante enzima, subfrakcije, podtipovi, podoblici...)podoblici...)
-
RazliRazliiti oblici istog enzimaiti oblici istog enzima
Izoenzimi (pravi)Izoenzimi (pravi) monomono--ili ili eee multimerni e multimerni izoenzimi nastali pod kontrolom genaizoenzimi nastali pod kontrolom gena
Multipli enzimski obliciMultipli enzimski oblici nastali posttranslacijskim nastali posttranslacijskim mehanizmima mehanizmima in vivoin vivo ili ili in vitroin vitro
-
KovalentneKovalentne//nekovalentnenekovalentne
modifikacije modifikacije (u organizmu, tijekom pro(u organizmu, tijekom proiiavanja, izolacije, pohranjivanja..)avanja, izolacije, pohranjivanja..)
DeamidacijaDeamidacija DjelomiDjelomino cijepanje no cijepanje polipeptidnogpolipeptidnog lancalanca PromjenjenaPromjenjena fosforilacijafosforilacija AcilacijaAcilacija Promjene u ugljikohidratnom dijelu lancaPromjene u ugljikohidratnom dijelu lanca AgregacijaAgregacija Povezivanje s drugim Povezivanje s drugim biomolekulamabiomolekulama ((makroenzimimakroenzimi)) KoinozimiKoinozimi....
-
Razlike i sliRazlike i slinostinosti
Pravi Pravi izoenzimiizoenzimi
MultipliMultipli
oblicioblici
RazliRazliiti po iti po katalitikatalitikimkim
i i imunokemijskimimunokemijskim, nema razlika u , nema razlika u katalitikatalitikimkimsvojstvima, stabilnosti, naboju,svojstvima, stabilnosti, naboju,
svojstvima, svojstvima, imunokemijskiimunokemijski
susu
vrlo male razlike u vrlo male razlike u MrMr
slislini, male razlike uni, male razlike ustabilnosti, razlike u naboju,stabilnosti, razlike u naboju,velike razlike u velike razlike u MrMr
-
IzoenzimiIzoenzimi
u kliniu klinikoj praksikoj praksi
KreatinKreatin kinazakinaza LaktatLaktat dehidrogenazadehidrogenaza Alkalna Alkalna fosfatazafosfataza Kisela Kisela fofatazafofataza** AmilazaAmilaza KolinesterazaKolinesteraza GlukozaGlukoza--66--fosfat fosfat dehidrogenazadehidrogenaza** NN--acetilacetil--betabeta--DD--glukozaminidazaglukozaminidaza FosfoglukomutazaFosfoglukomutaza** AspartatAspartat aminotransferazaaminotransferaza GamaGama--glutamiltransferazaglutamiltransferaza AdenozinAdenozin deaminazadeaminaza*....*.... ...................... ____________________________________________________ * * sudska medicinasudska medicina
-
LaktatLaktat
dehidrogenazadehidrogenaza
(LD(LD
11--55
))
--
akutni infarkt akutni infarkt miokardamiokarda, , hemolitihemolitikeke
bolesti, toksibolesti, toksini ni hepatitishepatitis
--
virusni hepatitis, progresivna mivirusni hepatitis, progresivna miiina distrofija, infektivna na distrofija, infektivna mononukleozamononukleoza, maligne bolesti, maligne bolesti
akutni infarkt akutni infarkt miokardamiokarda
(LD(LD11
))bolesti bolesti jetrejetre
(LDH(LDH44
i LDHi LDH55
))progresivna miprogresivna miiina distrofija na distrofija (LD(LD55
))maligne bolesti maligne bolesti (LD(LD55
/LD/LD11
< 1,3< 1,3))
-
ElektroforetskaElektroforetska
slika slika izoenzimaizoenzima
LDH LDH (celuloza(celuloza--acetatni gel)acetatni gel)
-
KreatinKreatin
kinazakinaza
(3 (3 izoenzimaizoenzima))
MrMr
80 00080 000
CKCK--MMMM**
CKCK--MM1, CKMM1, CK--MM2, MM2, CKCK--MM3MM3CKMBCKMB**
CKCK--MB1, MB1, CKCK--MB2MB2
CKCK--BB BB CKCK--BBBB, , (pseudo(pseudo--MB)MB)
MrMr
> 200 000> 200 000
a) CKa) CK--imunoglobuliniimunoglobulini
makroCKmakroCK
tip 1tip 1
(autoimune bolesti)(autoimune bolesti)
b) CKb) CK--MiMiMiMi
makroCKmakroCK
tip 2tip 2
) ) maligne bolesti)maligne bolesti)((dimerdimer))
((oligomeroligomer))
-
Alkalna Alkalna fosfatazafosfataza
izoenzimiizoenzimi
izoEizoE genetska kontrolagenetska kontrola MrMr______________________________________________________________________________________________________PlacentaPlacenta
odvojeni genodvojeni gen
7400074000
intestinalnaintestinalna
odvojeni genodvojeni gen
9200092000
kokotana/tana/
9400094000jetrena/jetrena/
9240092400bubrebubrenana
zajednizajedniki genki gen
9580095800__________________________________________________________________________________________________________! Samo u slu! Samo u sluaju aju placentarnogplacentarnog
izoEizoE--
alelnealelne
varijacije; kod ostalih,varijacije; kod ostalih,heterogenost je posljedica heterogenost je posljedica posttranslacijskihposttranslacijskih
modifikacija enzimske molekulemodifikacija enzimske molekule
--
-
Alkalna Alkalna fosfatazafosfataza izoenzimiizoenzimi
StarostStarost
ALP ALP izoenzimiizoenzimi
(%)(%)kostkost
jetrajetra
ostali (intestinalni)ostali (intestinalni)________________________________________________________________________________________________________________________DjecaDjeca
8585
55
< 10< 10
OdrasliOdrasli
4545
4545
< 10< 10
Starije osobeStarije osobe
3030
6060
< 10< 10______________________________________________________________________________________________________________________normalna raspodjela normalna raspodjela
-
ZnaZnaenje enje razlirazliithith
oblika istog enzimaoblika istog enzima
Bez obzira na mehanizam nastanka Bez obzira na mehanizam nastanka izoenzimaizoenzima
osiguravaju poveosiguravaju poveane ane
mogumogunosti u diferencijalnoj nosti u diferencijalnoj dijagnostici razlidijagnostici razliitih bolesti !!!itih bolesti !!!
-
SluSluajaj--1.1.
54 godi54 godinji munji mukarac s karac s povjepovjeuu
infarktainfarktamiokardamiokarda
primljen je u bolnicu nakon akutneprimljen je u bolnicu nakon akutne
grudne boli 3 sata grudne boli 3 sata predhodnopredhodno. Rezultati EKG su. Rezultati EKG subili dvosmisleni. Rezultati za enzime su:bili dvosmisleni. Rezultati za enzime su:
VrijemeVrijemeCK CK 1150 1150 (
-
ODGOVOR:ODGOVOR:
PovePoveanje CK je bilo vrlo umjereno i brzo.anje CK je bilo vrlo umjereno i brzo.Bolesniku je dana Bolesniku je dana intramuskularnointramuskularno
injekcijainjekcija
analgetika (njegov lijeanalgetika (njegov lijenik) prije nego jenik) prije nego jehospitaliziran i to mohospitaliziran i to moe uzrokovati odreenoe uzrokovati odreenopovepoveanje enzima. Ne postoje drugi dokazianje enzima. Ne postoje drugi dokaziinfarkta infarkta miokardamiokarda..
-
SluSluaj 2aj 2..
65 godi65 godinji munji mukarac dolazi u ambulantu s vidljivom karac dolazi u ambulantu s vidljivom uticom kojauticom kojaje intenzivne boje. Nema bolova ali je zamijetio da gubi teje intenzivne boje. Nema bolova ali je zamijetio da gubi teinu iinu ida je njegova stolica blijeda. On umjereno pije i nije na nikakvda je njegova stolica blijeda. On umjereno pije i nije na nikakvojojterapiji lijekovima. Njegovi funkcijski jetreni testovi su:terapiji lijekovima. Njegovi funkcijski jetreni testovi su:
BilirubinBilirubin 250 250 mol/L (mol/L (33--20 20 mol/L)mol/L) ASTAST 87 U/L (87 U/L (1111--38)38) ALTALT 92 U/L 92 U/L (12(12--48)48) ALPALP 850 U/L 850 U/L (60(60--142)142)
to bi bila diferencijalna dijagnoza?to bi bila diferencijalna dijagnoza? Koja druga ispitivanja bi bila od pomoKoja druga ispitivanja bi bila od pomoi za postaviti dijagnozu?i za postaviti dijagnozu?
-
ODGOVOR:ODGOVOR:
U ovom sluU ovom sluaju najvjerojatnija dijagnoza je karcinomaju najvjerojatnija dijagnoza je karcinomglave pankreasa koji opstruira zajedniglave pankreasa koji opstruira zajedniki ki uuni kanal.ni kanal.To klasiTo klasino daje bezbolnu no daje bezbolnu uticu s bilirubinom od okouticu s bilirubinom od oko250 250 umolumol/L. To je nekomplicirana opstruktivna /L. To je nekomplicirana opstruktivna uticauticakoja je karakterizirana s aktivnokoja je karakterizirana s aktivnou ALP koja je viu ALP koja je vieenego tri puta iznad gornje referentne vrijednosti. ASTnego tri puta iznad gornje referentne vrijednosti. ASTi ALT ne pokazuju tei ALT ne pokazuju teko ko hepatocelularnohepatocelularno
ooteteenje.enje.
Daljnja korisna ispitivanja ukljuDaljnja korisna ispitivanja ukljuuju slikanjeuju slikanjestruktura u blizini glave pankreasa i struktura u blizini glave pankreasa i zajdnizajdnikogkog
uunognog
kanala da se vidi uzrok opstrukcije.kanala da se vidi uzrok opstrukcije.
-
SluSluaj 3.aj 3.
5454--godigodinja nja ena ena dovedoveenaena
je u hitnuje u hitnusluslubu s akutnom abdominalnom boli ubu s akutnom abdominalnom boli utrajanju od 4 sata. Bol je trajanju od 4 sata. Bol je epigastriepigastrinana
i i iri seiri se
u lea Kod ispitivanja bolesnica je bolna iu lea Kod ispitivanja bolesnica je bolna ihipotenzivnahipotenzivna, postoji , postoji epigastriepigastrinana
mekomekoa.a.
Ispitivanja pokazuju da je Ispitivanja pokazuju da je amilazaamilaza
u serumuu serumu6 500 U/L 6 500 U/L (23(23--91 U/L).91 U/L).
Koja je najvjerojatnija Koja je najvjerojatnija
dijagnozadijagnoza
-
ODGOVOR:ODGOVOR:
Postoje mnogi uzroci povePostoje mnogi uzroci poveanja serumske anja serumske amilazeamilaze, ali, alivrijednosti 10x vevrijednosti 10x vee od gornje granice normale sue od gornje granice normale sugotovo uvijek uzrokovane akutnim gotovo uvijek uzrokovane akutnim pankreatitisompankreatitisom, pa, paje klinije klinika slika u ovom sluka slika u ovom sluaju sukladna ovoj dijagnozi.aju sukladna ovoj dijagnozi.Umjerenije poveUmjerenije poveanje (>5x) moanje (>5x) moe biti uzrokovanoe biti uzrokovanopankreatitisompankreatitisom
ali i drugim uzrocima abdominalne boli,ali i drugim uzrocima abdominalne boli,
kao perforiranim kao perforiranim peptipeptikimkim
irom. Blago poveirom. Blago poveanjeanjevidljivo je u bubrevidljivo je u bubrenom poremenom poremeaju, buduaju, budui se i se amilazaamilazaisti bubrezimaisti bubrezima..
-
Hvala na paHvala na panji !nji !
Slide Number 1Klinika enzimologijakoritenje podataka o aktivnostima enzima u dijagnostike svrheEnzimi u stanicamaSlide Number 4Slide Number 5Slide Number 6Slide Number 7Slide Number 8Slide Number 9Slide Number 10Mr dijagnostiki vanih enzimaSlide Number 12Slide Number 13Slide Number 14Enzimi kao tkivni biljeziSlide Number 16Podjela enzima prema mjestu djelovanjaSlide Number 18Plazma specifini enzimiPlazma nespecifini enzimi(aktivnosti u plazmi nego u tkivima)Slide Number 21Promjene katalitike aktivnosti enzima u serumuUzroci oteenja stanicaGlavni enzimi-kliniko znaenje Slide Number 25Slide Number 26Slide Number 27Slide Number 28Slide Number 29KREATIN KINAZA, CKSlide Number 31ALPKisela fosfataza, ACPEC 3.1.3.2; ortofosfat monoester fosfohidrolazaOvisno o porijeklu:Slide Number 35Slide Number 36KOLINESTERAZA (ChE)EC 3.1.1.8 acilkolin acilhidrolazaSlide Number 38LIPAZAEC 3.1.1.3; triacilglicerol acil hidrolazaSlide Number 40Slide Number 41Metode za odreivanje katalitike aktivnosti enzimaSlide Number 43Slide Number 44Slide Number 45Slide Number 46Slide Number 47Slide Number 48Slide Number 49Kovalentne/nekovalentne modifikacije (u organizmu, tijekom proiavanja, izolacije, pohranjivanja..) Razlike i slinostiIzoenzimi u klinikoj praksiLaktat dehidrogenaza (LD 1-5)Elektroforetska slika izoenzima LDH (celuloza-acetatni gel)Kreatin kinaza (3 izoenzima)Alkalna fosfataza izoenzimiAlkalna fosfataza izoenzimiZnaenje razliith oblika istog enzimaSluaj-1.ODGOVOR:Sluaj 2.ODGOVOR:Sluaj 3.ODGOVOR:Slide Number 66