Electrophorèse des Protéines Plasmatiques - afvpz.com · • élevage rationnel (volaille chair...
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Electrophorèse des Protéines
Plasmatiques
Equipement de Labovet Analyses
au 1er trimestre 2009
cf le PhD de Y Roman et la thèse
vétérinaire de D Ordonneau
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Electrophorèse des protéines
• Mise dans un champ électrique des protéines plasmatiques qui se séparent dans un gradient proportionnel à la charge et inversement proportionnel àl’encombrement stérique
• Protéines– Albumine(s)– Globulines
• mise en évidence de syndromes inflammatoires
c1
Diapositive 2
c1 albumine la plus rapide et va le plus loin
affection hépatique = défaut de synthèseaffection rénale = fuite de protéinespic monoclonaux de lignées tumorales du systeme immunitairec.facon; 02/05/2007
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Positionnement de la réponse dans le temps
Temps de réponse de l’EpP pour détecter une inflammation après un traumatisme :
le rapport
Albumine
Globuline
diminue
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Méthodes
• Prélèvement sanguin sur anticoagulant = Lithium Héparine (tube vert)
• EpP réalisé sur plasma :
– moins d’hémolyse (Hb migre en β et gêne la lecture)
– évaluation des globulines et du pic de fibrinogène
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Electrophorèse des protéines sur sérum et sur plasma
pic de fibrinogène
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oie à tête barrée
paon
pigeon
perroquet
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Expression des résultats
• Quantité d’Albumine circulante (g/l ou %)
• Quantité et qualité des Globulines circulantes (g/l ou %)
• Qté albumine et qté globulines : normalement équivalents = rapport A/G ~ 1
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inflammatoire
Pathologie
inconnu
non inflammatoire
Arbre décisionnel inflammatoire
parasitaire et fongique
bactérien
viral inconnu
toxiquetraumatique
métabolique
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Présentation
Charles FACON, Toulouse 2002
1. Outarde Houbara, ECWP Missour Maroc
2. Labovet, Les Herbiers (85), Réseau Cristal
• 14 vétérinaires, plus de 50 collaborateurs
• élevage rationnel (volaille chair et ponte, lapin, porcs, ruminants lait et engrais)
• laboratoires (santé animale, agro-alimentaire)
• consultant auprès de la fauconnerie du Puy du Fou (JL Liegeois)
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Un réseau de compétences…
• organisation en commissions de vétérinaires spécialisés (volaille, laboratoire, …)
• mise en commun de moyens pour les laboratoires :
1. bactériologie de santé animale dans tous les cabinets vétérinaires (~25 sites)
2. bactériologie COFRAC et AA, sérologie, PCR dans des sites centralisés (3 sites)
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… qui permet
• un volume d’analyses important pour être performant (25 000 bactériologie salmonelle / an)
• un volume d’analyses important pour investir dans de nouveaux outils (PCR, EpP)
• une expertise dans l’interprétation des résultats
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l’AFVPZ, un véritable réseau de compétences
• les échanges techniques en réunion et par courriel
• les projets en commun
• la défense des intérêts de praticiens de PZ par une même voix (arrêt Riaucourt)
le fonctionnement en réseau de l’AFVPZ est gage de son succès
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Cas cliniques :
intérêt des électrophorèses des protéines plasmatiques
1. coccidiose en élevage
2. reproduction chez des canes Pékin en élevage
3. cas clinique métabolique en élevage
4. cas clinique viral en élevage
5. cas d’intoxination en élevage
6. cas clinique à la fauconnerie du Puy du Fou
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Développement d’une analyse: monitoring de la coccidiose
• Des critères objectifs d’autopsie sont développés en poulet et en dinde (scores lésionnels de 0 à 4)
• Ils n’existent pas dans les espèces mineures (pintade, canard, faisan, perdrix)
Question : l’EpP correspond t-elle aux scores objectifs utilisés classiquement en poulet et en dinde ? pourra t-onl’utiliser dans d’autres espèces ?
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E Acervulina(doc CEVA)
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E Tenella(doc CEVA)
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Développement d’une analyse coccidiose
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Développement d’une analyse coccidiose
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effet LESION
Développement d’une analyse coccidiose
LABOVET FORMATION 85500 Les Herbiers Tous droits de reproduction réservésLH3189
Fuite protéique àpartir de l’indice 3
Développement d’une analyse : coccidiose
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effet DOSE
Développement d’une analyse : coccidiose
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effet DOSE
Développement d’une analyse : coccidiose
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effet TEMPS
Développement d’une analyse : coccidiose
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Reproduction : interprétation des chutes
de ponte
Dans quel état inflammatoire sont les femelles responsables de la chute de ponte dans un lot ?
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42,3
50,0
57,3
48,0
femelles en ponte sans inflammation
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56,6
55,3
71,8
femelles en ponte avec inflammation
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Reproduction : interprétation des chutes
de ponte
Pour distinguer :
état inflammatoire = infection virale, infection bactérienne, infestation parasitaire, traumatisme
état non inflammatoire = trouble alimentaire ou métabolique, perturbation zootechnique (lumière)
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Cas clinique métabolique en élevage
13 MARS 2008 appel éleveur
MOTIF : canetons mulards de 15 jours quelques sujets se couchent sur le sol puis
après quelques heures repartent ; petite mortalité 6 hier, 4 aujourd'hui
ambiance un peu saturée en ammoniaque, pas de lésions spécifiques décrites
sinon bon état du lot
CONSEIL : a remis des radians, a ventilé un peu plus pour améliorer l'ambiance.
surveiller l’évolution sur 24-48 h
TRAITEMENT : Forcil voire rehydrax
autopsie le 13 mars 2008 LH1176 avec absence de lésion, défaut de coagulation et
bactérioscopie négative
hypothèse retenue : PMP sur un lot avec très bon démarrage >> Cholarainol avec
réponse thérapeutique mais rechute
autres hypothèses : troubles nutritionnel / botulisme / septicémie / virose
c2
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Cas clinique
visite TG : animaux en PUPD, pas de symptômes de
botulisme
on hésite à mettre de l'amoxicilline
retour le 17 mars LH1208 congestion splénique et
hépatique, minéralisation normale, recherche bactério =
E Coli nég (sg intracardiaque)
visite CF : reprise des symptômes, paralysie pattes,
polydipsie, stimulation = reprise démarche normale,
mortalité ~ 20 sujets / j
retour à la normale avec le changement d’aliment
c3
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Cas clinique
On montre que les sujets ataxiques ne sont pas inflammatoiresla réalisation rapide aurait permis de se concentrer sur les troubles
métaboliques ou les intoxications et d’éliminer les hypothèses infectieuses
c4
Diapositive 29
c3
bisalbuminémie possiblec.facon; 19/04/2007
Diapositive 30
c4
bisalbuminémie possiblec.facon; 19/04/2007
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Pathologie virale
Volailles souffrant d’une virose pure, sans surinfection bactérienne
EpP très homogènes
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Intoxication : botulisme
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Buse Harris
4 buses de Harris de spectacle, mises en hivernage dans une même volière
1 mortalité > autopsie (systématique) puis 2 autres mortalités successives
Absence de symptômes / niveau sanitaire excellent / alimentation poussin frais ad libitum
1 seul oiseau rescapé
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Buse Harris
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Buse Harris
Autopsies :
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Buse Harris
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Buse Harris
bactériologies : des E Coli non typables
interprétation difficile : pathogénicité primaire (possible) ou surinfection secondaire ?
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Buse Harris
le profil d’EpP est modifié, plutôt erratique, par rapport à une buse de Harris physiologique
rem technicien : plasma patho lactescent
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Source d’artefacts
plasmas hémolysés ou lipémiques
D’après « Protein electrophoresis of psittacine plasma » C Cray et al. Vet Clin Path Vol.36/No.1/2007
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Buse Harris
Le 4e oiseau est isolé dans une quarantaine avec un régime alimentaire contrôlé. Un hépatoprotecteur est donné.
Buse en parfaite santé aujourd’hui
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Buse Harris
Ma conclusion :
un changement brutal de régime alimentaire (état appétit > ad libitum) + le regroupement d’oiseaux pour la période d’hivernage = entraîne une compétition entre les animaux et un syndrome de gavage
images d’autopsie = lésions septicémiques certes mais de foie gras également
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Buse Harris
L’EpP montre une possible inflammation ou est tronquée par la lipémie
L’isolement de colibacilles est la surinfection qui tue l’oiseau mais on a pu identifier les causes primaires
Plan d’action :
faire admettre l’étiologie aux fauconniers
contrôler la reprise d’aliment pendant la transition alimentaire
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Conclusion
• Une analyse simple et rapide
• Une analyse faiblement spécifique (une vaccination modifie A/G), qui se pose en amont des autres examens complémentaires
• Un frein à son développement est l’absence de référentiel, or le profil est une caractéristique d’espèce
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Proposition de fonctionnement dans le réseau AFVPZ
1. un résultat d’analyse appartient à l’acheteur du service
2. le laboratoire peut l’utiliser en respectant la confidentialité
analyse provenant d’un membre de l’AFVPZ
Labovetanalyses
Bdd AFVPZ / Labovetaide à
l’interprétation d’une autre
analyse AFVPZ
demande
réponse
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Utilisations
1. Pathologie : en cas d’infection aiguë ou chronique, suivi de l’état inflammatoire de l’oiseau en soins
2. Screening : recherche d’oiseaux morbides (cas de tuberculose aviaire)
3. PS achat : évaluation de l’état inflammatoire de l’oiseau en quarantaine, notamment pour les sujets de valeur ou quarantaine de sortie d’élevage
4. Référentiel : faire un T0 pour réaliser une cinétique et un monitoring en cas de pathologie
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Tarif
Une analyse disponible en 2009 à Labovetanalyses
Tarif pour 7 plasmas : 60€ HT, possible par 15 ou 30
Tarif à l’unité : 12€ HT�besoin de 1000 analyses pour amortir l’investissement, le prix diminuera ensuite