Effect of Agar Concentration and Media Texture on...
Transcript of Effect of Agar Concentration and Media Texture on...
Effect of Agar Concentration and Media Texture on Development in In Vitro Culture
of Eucalyptus camaldulensis Dehnh. x E. urophylla F. Muell.
ผลของความเขมขนของวน และโครงสรางอาหารเพาะเลยงตอการพฒนาชนพชในการเพาะเลยงเนอเยอยคาลปตสลกผสม ขามชนด คามาลดเลนซส × ยโรฟลลา
โดย นางสาวอจฉรยา โชตภวฒน
นสตปรญญาโทสาขาวทยาศาสตรชวภาพปาไม
บณฑตวทยาลย มหาวทยาลยเกษตรศาสตร
ภายใตการควบคมของ
รศ.ดร.สมคด สรพฒนดลก อาจารยทปรกษาวทยานพนธหลก
ดร.สธร ดวงใจ อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม
หวขอการน าเสนอ (Outline)
1. บทน า (Introduction)
2. วตถประสงค (Objectives)
3. อปกรณ และวธการ (Materials and Methods)
4. ผล และวจารณ (Results and Discussion)
5. สรป และขอเสนอแนะ (Conclusion and Recommendation)
บทน า (Introduction)
ทมา: บรษท สยามฟอเรสทร (2552)
บทน า (Introduction) (ตอ)
(Plant Tissue Culture)
เทคนคการเพาะเลยงชนสวนพช (explant) หรอการน าเอาเซลล (cell) เนอเยอ
(tissue) หรออวยวะ (organ) ของพชมาเลยงบนอาหารสงเคราะหสตร
ตางๆ ภายใตสภาพแวดลอมทเหมาะสม ปราศจากเชอ และสามารถชกน า
ใหเกดเปนตนพชทสมบรณและน าออกปลกในสภาพธรรมชาตได
ทมา: สมพร (2552)
การเพาะเลยงเนอเยอยคาลปตส
บทน า (Introduction) (ตอ)
เกบกงพนธด จากตนแมพนธ
ยายออกเรอนเพาะช า
ฟอกฆาเชอใน LAB ยายลงอาหาร เรงการแตกยอด (MS6,CW22)
ตดแบงยอดพรอมกบ ยายลงอาหารยดยอด (G40)
ตดตนทยดยอดแลว ลงอาหารชกน าราก
ยายออกสสภาพแวดลอมปกต ทมา: Siripatanadilok and Thaiutsa (1990)
1. เพอพฒนาโครงสรางอาหารทใชในการเพาะเลยงเนอเยอยคาลปตสลกผสม ใหธาตอาหารสามารถเคลอนยายภายในอาหารไดด
2. เพอเพมปรมาณการผลตกลายคาลปตส
ลกผสม ภายในขวดของแตละข นตอนใหมากขน ลดระยะเวลาการผลต และไดตน
กลาทมคณภาพด
3. เพอลดคาใชจายจากการใชวนในการท าอาหารเพาะเลยงเนอเยอ
ยคาลปตสลกผสม
วตถประสงค (Objectives)
อปกรณ (Material)
Beaker Forceps
Alcohol lamp
Scalpel
Petri dish Laminar Flow
วธการ (Methods)
7. การยายกลาออกปลก
6. การชกน าการเกดรากพช
5. การชกน าการยดยอด
4. การขยายและเพมจ านวนยอด
3. เตรยมชนพชทปราศจากเชอ
2. ศกษาตนทน และการเตรยมอาหารส าหรบเพาะเลยงเนอเย อ
1. การคดเลอกแมพนธยคาลปตส ยคาลปตสลกผสม รหสสายตน H16
Modified MS6, Modified CW22 , Modified G40 และ Modifide Root
เลยงบนอาหารสตร MS6
เลยงบน Modified MS6, Modified CW22
เลยงบน Modified G40
เลยงบน Modifide Root
เลยงในเรอนเพาะช า
วธการ (Methods) (ตอ)
ทมา: บรษท สยามฟอเรสทร (2552)
ทนโรค และแมลง
เหมาะกบพนทดอน และอยในชวงปรมาณน าฝนแลงถงปกต
E. camaldulensis
ดนรวนปนทราย E. urophylla
1. การคดเลอกแมพนธยคาลปตส
วธการ (Methods) (ตอ)
Agar concentration and fiber on media texture in In Vitro culture of Eucalyptus
hybrid clone H16.
Agar (g/l)
Fiber
(sheet/l)
0 25 50 100
1 Tx6 Tx5
2 Tx2 Tx4
3 Tx3
7 Tx1
TX1 TX2 TX3
TX4 TX5 TX6
2. ศกษาตนทน และการเตรยมอาหารส าหรบเพาะเลยงเนอเยอ
วธการ (Methods) (ตอ)
2. การเตรยมอาหารส าหรบเพาะเลยงเนอเยอ (ตอ)
ทมา: Siripatanadilok and Thaiutsa (1990)
Agar (g/l)
Fiber
(sheet/liter)
0 25 50 100
1 Tx6 Tx5
2 Tx2 Tx4
3 Tx3
7 Tx1
วธการ (Methods) (ตอ)
3. เตรยมชนพชทปราศจากเชอ และการดแลเนอเยอระหวางเลยง
น าชนพชทปราศจากเชอซงไดรบความอนเคราะหจากบรษท สยามฟอเรสทร มาสบเพมปรมาณ และเลยงบนอาหารสตรเพมยอด
3100 lux
3000 lux
2000 lux
3100 lux
3000 lux
2000 lux
4 1
5 3 2
วธการ (Methods) (ตอ)
การดแลเนอเยอระหวางการเลยง
วธการ (Methods) (ตอ)
4. การขยายและเพมจ านวนยอด
ยายชนพชเลยงบนอาหารสตรเพมปรมาณยอด
(Modified MS6)
ยายชนพชเลยงบนอาหารสตรเพมปรมาณยอด
และชกน าการยดยอด (Modified CW22)
ลกษณะทใชเปรยบเทยบ
จ านวนยอด
จ านวนยอด และความยาวยอด
วธการ (Methods) (ตอ)
5. การชกน าการยดยอด ลกษณะทใชเปรยบเทยบ
ยายชนพชจาก Modified CW22 เลยงบนอาหาร
สตรชกน าการยดยอด (Modified G40 ) ความยาวยอด
6. การชกน าการเกดรากพช
ยายชนพชจากขอ 5 เลยงบนอาหารสตรชกน า
การเกดราก (Modified Root )
จ านวนราก และความยาวราก
วธการ (Methods) (ตอ)
7. การยายปลกชนพชทออกราก (Plantlets)
น าขวดบรรจช นพชทออกรากวางไวทอณหภมหอง
เปนเวลา 12-24 ชวโมง
ลางรากดวยน าสะอาด
ยายปลกในวสดปลกทมสวนผสมของดนตอถาน
แกลบในอตราสวน 2 ตอ 1
ระยะแรกใหน าทกๆ 15 นาท หลงจากนนจงคอยๆ
ลดความชนลง
บนทกอตราการรอดชวตของกลาอาย1 เดอน
วธการ (Methods) (ตอ)
Data Analysis
เปรยบเทยบคาเฉลยของ
จ านวนยอด ความยาวยอด
จ านวนราก ความยาวรากสงสดตอชนพช
การวเคราะหการเกดราก และอตราการรอดตายของตนกลา
Statistical Analysis
Analysis of Variance
แบบ Two way ANOVA
หาความแตกตางโดยวธ Duncan's Multiple Range Test (DMRT) ทระดบความเชอมน 95 %
รอยละ
8. การวเคราะหขอมล
ผลการศกษา
1. ตนทนวน และไฟเบอรบนอาหารสตรดดแปลงโครงสราง
วน เครองหมายทางการคาตรานางเงอก ราคา 1,400 บาท/กโลกรม
กระดาษช าระเครองหมายทางการคา ตรา Cellox รน Super Extra (ยาวพเศษ) แผนละ 2 ชน คดเปนเงน 0.0325 บาท/แผน (ราคา ณ วนท 08-01-55)
กระดาษช าระ 5,080 แผน ราคาทงหมด 165 บาท
ถากระดาษช าระ 1 แผน ราคา
บาท
บาท
ผลการศกษา (ตอ)
1. ตนทนวน และไฟเบอรบนอาหารสตรดดแปลงโครงสราง (ตอ)
9.80
3.61
5.01 4.42 4.64
3.02
0
2
4
6
8
10
12
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
ราคา (บาท/ลตร)
สตรอาหารทดลอง
ผลการศกษา (ตอ)
2. จ านวนยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหารสตร Modified MS6
4.63
9.65 8.40
9.53
8.78
11.31
0
2
4
6
8
10
12
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
จ านวนยอดเฉลย
สตรอาหาร
ผลการศกษา (ตอ)
8.86
8.22
9.06
8
8.2
8.4
8.6
8.8
9
9.2
9.4
2,000 3,000 3,100
จ านวนยอดเฉลย
ความเขมแสง (lux)
2. จ านวนยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหารสตร Modified MS6
ผลการศกษา (ตอ)
3. จ านวนยอด และความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบน อาหารสตร Modified CW22
2.19 2.21 2.00 2.34 2.60 2.68
3.60 4.00
2.58
4.65 5.13
8.58
0
2
4
6
8
10
12
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
จ านวนยอดเฉลย (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)
การเจรญเตบโตเฉลยตอชนพช
สตรอาหาร
ผลการศกษา (ตอ)
3. จ านวนยอด และความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบน อาหารสตร Modified CW22
2.27 2.39 2.35
4.01 4.45
5.80
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
2,000 3,000 3,100
จ านวนยอดเฉลย (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)
ความเขมแสง (lux)
การเจรญเตบโตเฉลยตอชนพช
ผลการศกษา (ตอ)
4. ความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหาร สตร Modified G40
6.27
6.69
6.32 6.33 6.35
6.56
6
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
สตรอาหาร
ความยาวยอดเฉลย (ซม.)
ผลการศกษา (ตอ)
6.33
6.47 6.46
6.25
6.3
6.35
6.4
6.45
6.5
2,000 3,000 3,100
ความเขมแสง (lux)
ความยาวยอดเฉลย (ซม.)
4. ความยาวยอดเฉลยตอชนพชทเล ยงบนอาหารสตร Modified G40
ผลการศกษา (ตอ)
0.93 1.75 1.14 1.48 1.35 1.65
4.00
4.95 5.23
6.50
4.68
7.11
0123456789
10
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
จ านวนยอด (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)
การพฒนาของราก
สตรอาหาร
5. ความยาวรากสงสด และจ านวนรากเฉลยตอชนพชทเล ยง บนอาหารสตร Modified Root
ราก (ราก) รากสงสด (ซม.)
ผลการศกษา (ตอ)
5. ความยาวรากสงสด และจ านวนรากเฉลยตอชนพชทเล ยง บนอาหารสตร Modified Root (ตอ)
1.46 1.45 1.37
6.10 5.53 5.05
0
1
2
3
4
5
6
7
8
2,000 3,000 3,100
จ านวนยอด (ยอด) ความยาวยอดเฉลย (ซม.)
ความเขมแสง
การพฒนาของราก
ราก (ราก) รากสงสด (ซม.)
ผลการศกษา (ตอ)
6. เปอรเซนตการเกดรากของชนพชทเล ยงบนอาหาร สตร Modified Root
51.66
80.00
65.00 73.33
83.33
100.00
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
เกดราก (%)
สตรอาหาร
ผลการศกษา (ตอ)
53.33
76.67 76.67 73.33
90.00 95.00
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Tx1 Tx2 Tx3 Tx4 Tx5 Tx6
อตราการรอดตาย (%)
สตรอาหาร
7. อตราการรอดตายของกลาอาย 1 เดอน
สรปการศกษา
1. เพอพฒนาโครงสรางอาหารทใชในการเพาะเลยงเนอเยอ
ยคาลปตสลกผสม ใหธาตอาหารสามารถเคลอนยายภายใน
อาหารไดด
พบวา สตรทดลอง TX6 เปนโครงสรางอาหารทชวยให
ธาตอาหารสามารถเคลอนยายภายในอาหารไดดท สด
2.1 สตรอาหาร Modified MS6 TX6 สามารถเพมจ านวนยอดได
เปน 2 เทาของ Modified MS6 TX1
2.2 สตรอาหาร Modified CW 22TX6 สามารถเพมจ านวนยอด
และยดความยาวยอดไดเปน 2 เทาของ Modified CW 22 TX1
สรปการศกษา (ตอ)
2. เพอเพมปรมาณการผลตกลายคาลปตสลกผสม H16 ภายใน
ขวดของแตละข นตอนใหมากขน ลดระยะเวลาการผลต
และไดตนกลาทมคณภาพด
พบวาเปนการคนพบวธการใหมทมคณคาในดานการเพมผลผลต
กลาภายในขวดเลยง ดงน
สรปการศกษา (ตอ)
2.3 สตรอาหาร Modified G40 ท ง 6 สตรทดลองสามารถ
ยดความยาวยอดไดไมแตกตางกน
2.4 สตรอาหาร Modifide Root TX6ชวยเพมจ านวนรากได
เปน 0.5 เทา ของModifide Root TX1 และสามารถชกน า
การเกดรากไดเรวกวา เมอเปรยบเทยบกบ
Modifide Root TX1
2.5 ตนกลาทเลยงบนสตรอาหาร Modifide TX6 มอตราการรอด ตายสงทสด และมคาเปน 1.75 เทาของ Modifide TX1
พบวา สตรทดลอง TX6 เปนสตรโครงสรางอาหารทมตนทนจาก
วน และไฟเบอรต าทสดและโดยมคาเปน 3 เทา ของ TX1
สรปการศกษา (ตอ)
3. เพอลดคาใชจายจากการใชวนในการท าอาหารเพาะเลยง เนอเยอยคาลปตสลกผสม รหสสายตน H16
ควรมการทดสอบคณภาพของสตรอาหาร TX6 กบยคาลปตส
ลกผสมรหสสายตนอนๆ ทนยมปลกทงภาครฐ และภาคเอกชน
อาจน าเทคนคการปรบโครงสรางอาหารเบองตนไปใชในการศกษาตอ
ในเรองการแกปญหาอาการตางๆ ทมกเกดขนกบเทคนคการ
เพาะเลยงเนอเยอยคาลปตสลกผสม อาท การเกดแคลลส
อาการฉ าน า เปนตน
ขอเสนอแนะ
ขอขอบคณ
รศ.ดร.สมคด สรพฒนดลก อาจารยทปรกษาวทยานพนธหลก
ดร.สธร ดวงใจ อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม
ผศ.ดร.อทยวรรณ แสงวณช อาจารยผควบคมวชาสมมนา
ดร.ประทป ดวงแค อาจารยผควบคมวชาสมมนา
บรษท สยามฟอเรสทร จ ากด เออเฟอสถานทศกษา วสด และอปกรณ
อ าเภอทามวง จงหวดกาญจนบร ดร.นนทชย พงศพฒนานรกษ ใหค าปรกษาดานการวเคราะหผลทางสถต
ขอขอบพระคณคะ
จบการน าเสนอ