El control inhibitorio en la obesidad y el trastorno por atracon.
efecto inhibitorio
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE ESTOMATOLOGÍA
“EFECTO INHIBITORIO in vitro DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE
Caesalpinia Spinosa TAYA SOBRE CEPAS DE Enterococcus Faecalis
ATCC 29212”.
TESIS
PARA OPTAR EL GRADO DE
BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA
AUTOR
CINTYA LISET FLORES ARMAS
ASESOR
MG. GUSTAVO GUARDIA MÉNDEZ.
CO-ASESOR
DRA. ELVA MEJIA DELGADO.
TRUJILLO – PERÚ
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RESUMEN
El objetivo del presente estudio de tipo experimental fue determinar el efecto
inhibidor in vitro del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya)
frente a cepas de Enterococcus faecalis. Se realizó la prueba de susceptibilidad,
utilizando el método de difusión en discos. Las cepas de E. faecalis fueron sembradas
en placas que contenían medio de cultivo Mueller Hinton, se colocaron discos con las
diferentes concentraciones del extracto etanólico de Taya. Las placas se incubaron a
37 0C midiéndose los halos con una regla vernier después de 24 horas; todos los
discos presentaron halo de inhibición, y los tamaños de estos aumentaron en relación
directamente proporcional a las concentraciones utilizadas. Se empleó también el
Método de dilución en tubos, ensayando concentraciones de 60%, 40%, 20% y 10%
del extracto etanólico de vainas de C. spinosa; a los cuales se le agregó el inóculo de
E. faecalis. Se llevo a estufa a 37ºC por 24 horas, luego se sembró en placas con
Agar Mueller Hinton para determinar las Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
Después de 48 horas se realizó el conteo de UFC. Todas las concentraciones
presentaron efecto inhibitorio del crecimiento de E. faecalis. La concentración
mínima inhibitoria hallada fue la del 40 %.
Se concluye que el extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa “taya” posee
actividad inhibitoria in vitro sobre el crecimiento de cepas de Enterococcus faecalis.
Palabras clave: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Concentración Mínima
Inhibitoria, Unidades Formadoras de Colonia
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ABSTRACT
The aim of this experimental study was to determine the inhibitory effect in
vitro of the etanolic extract pods Caesalpinia spinosa (Taya) against strains of
Enterococcus faecalis. The susceptibility test was made, using the method of
dissemination in discs. The strains of E. faecalis were sown in plates
containing culture medium Mueller Hinton, and placed discs with different
concentrations of the ethanolic extract of Taya. These were incubated at 370C
measured halos with a vernier rule after 24 hours; all discs presented halo of
inhibition, and sizes of these increased in relation directly proportional to the
concentrations used. Employment is also the method of dilution in tubes,
tested concentrations of 60 %, 40 %, 20% and 10% of the ethanolic extract of
pods of C. spinosa; which was added the inoculum of E. faecalis.
The minimum inhibitory concentration found was 40 %.
The conclusion of this study is that the ethanolic extract from pods of
Caesalpinia spinosa "taya" has in vitro inhibitory activity on the growth of
strains of Enterococcus faecalis.
Key Words: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Minimum
Inhibitory Concentration, Colony Forming Units
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I. INTRODUCCIÓN
Durante el tratamiento de conductos radiculares el objetivo de la preparación
biomecánica es limpiar y modelar adecuadamente el conducto radicular antes de la
obturación. Sin embargo, en muchos casos donde se realiza una necropulpectomía
los conductos radiculares muestran bacterias aún después de una meticulosa
preparación quirúrgica de conductos radiculares.1
Estos microorganismos conducen al fracaso del tratamiento endodóntico, así,
muestras de dientes obturados con frecuencia presentan bacterias facultativas Gram-
positivas que incluyen Enterococos, Estreptococos y Lactobacilos, presentándose una
periodontitis apical persistente. 2
Baumgartner y cols.19923, quienes estudiaron las bacterias que se aislaban en los
5mm apicales de dientes con lesión periapical. Encontraron más de 50 especies de
bacterias de las cuales 34, el 68%, eran anaerobias estrictas. Las especies aisladas
más frecuentemente fueron: Actinomyces spp., Lactobacillus spp., Bacteriodes no
pigmentados, Veillonella spp., Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum y
Streptococcus mutans.
Diversos estudios han revelado que la microbiota de los dientes con fallas en el
tratamiento endodóntico difieren de la microbiota encontrada normalmente en los
conductos de dientes no tratados. 4-7 La microbiota que se encuentra en los dientes con
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fracaso en el tratamiento endodóntico es predominantemente anaerobia facultativa y
Gram positiva, siendo el Enterococcus faecalis la especie que se aísla con mayor
frecuencia.8
El Enterococcus faecalis es una bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o
pares, Gram positiva, anaerobia facultativa, no esporulada e inmóvil y que ha sido
identificada como una causa frecuente de infección del sistema de conductos
radiculares en dientes con fracaso en el tratamiento endodóntico. La temperatura
óptima de crecimiento in vitro de este microorganismo es de 35ºC, no obstante, se ha
observado crecimiento entre 10ºC y 45ºC.9
Una característica notable de esta especie es su capacidad para sobrevivir y crecer en
microambientes que pudieran ser tóxicos para otras bacterias, entre estos en presencia
de Hidróxido de Calcio.10 Su erradicación del conducto radicular es difícil utilizando
preparaciones químicomecánicas e irrigantes como desinfectantes, así como pastas y
sustancias antibacterianas.11
E. faecalis posee una pared celular con antígenos del grupo D, el cual es un ácido
lipoteicoico que se encuentra asociado con la membrana citoplasmática de la bacteria
y que contiene residuos de glicerol. Además, posee gran cantidad de mureina y ácido
teicoico.12
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También se han realizado otras investigaciones dirigidas a aclarar el papel que juegan
los factores de virulencia de E. faecalis, en la colonización por parte de esta bacteria
en un medio tan pobre en nutrientes, como el conducto radicular medicado. La
adhesión a la superficie de la dentina constituye un paso esencial que determina el
potencial patógeno de este microorganismo, en el conducto radicular medicado.13, 14
Puesto que la dentina contiene colágeno y otras proteínas, se sugiere que las proteasas
sintetizadas por E. faecalis, así como la proteína de unión al colágeno (Ace) pudieran
participar o por lo menos influir en la adhesión bacteriana, y por lo tanto permitir que
la bacteria colonice el conducto radicular.15
En los dientes con pulpa mortificada o necrótica, el contenido microbiano tóxico de
la cavidad pulpar determina la opción por sustancias antisépticas. La medicación
intraconducto será entonces un auxiliar valioso en la desinfección del sistema de
conductos radiculares, sobre todo en lugares inaccesibles a la instrumentación, como
las ramificaciones del conducto principal y túbulos dentinarios. 16
La elección de una medicación intraconducto entre sesiones requiere de las mismas
consideraciones que la aplicación de cualquier fármaco en otra región del organismo
humano. Por lo tanto es necesario considerar. Cantidad, localización y tiempo de
aplicación.16
Una variedad de agentes antimicrobianos han sido evaluados por su habilidad para
eliminar el E. faecalis del sistema del conducto radicular. Esto incluye preparaciones
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entre citas, tales como Hidróxido de calcio, Paramonoclorofenol,
Paramonoclorofenol Alcanforado y combinaciones de antibiótico-esteroideas, así
como irrigantes tales como hipoclorito de sodio, digluconato de clorhexidina, Acetato
de clorhexidina y componentes iodino.17
En un estudio in vivo e in vitro realizado por Spangberg et al se evaluó el efecto
sobre la irritación tisular (permeabilidad capilar) y la citotoxicidad de varios
medicamentos: PCMF alcanforado, fenol alcanforado, cresatina, formocresol e
yoduro de potasio yodado; y concluyeron que el PMCF alcanforado es el antiséptico
más tóxico e irritante, seguido de la cresatina; y el menos tóxico fue el yoduro de
potasio yodado.18
Soekanto et al. , evaluaron la toxicidad de varios medicamentos (fenol, PMCF, fenol
alcanforado, PMCF alcanforado, alcanfor) sobre células pulpares de ratas a distintas
concentraciones, y concluyeron que todos los medicamentos mostraron citotoxicidad,
incluyendo al alcanfor solo, el cual se pensaba que era un vehículo que reducía la
toxicidad del fenol y PMCF, sin embargo, según este estudio el alcanfor por sí mismo
mostró citotoxicidad y su adición al fenol y al PMCF incrementó la toxicidad de
éstos.19
Llamas et al, evaluaron en ratas el efecto in vitro del PMCF y el PMCF alcanforado
sobre los macrófagos y demostraron que estos compuestos disminuyeron
significativamente la capacidad de adhesión de macrófagos al sustrato. Tomando en
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cuenta que la adhesión es el primer paso de la fagocitosis por parte de macrófagos
además de la presentación del antígeno, tanto el PMCF como el PMCF alcanforado
pueden inhibir la función del macrófago y modular las respuestas inflamatorias e
inmune en los tejidos periapicales. Por lo tanto, cuando son usados intraconducto,
pueden retardar los procesos reparativos. Quizá estos medicamentos sólo deban ser
usados en tratamientos de conductos de dientes con pulpas necróticas.20
Todo esto indica la necesidad de un retorno a lo natural, con el objeto de encontrar
nuevos principios biológicamente activos, para disminuir los efectos tóxicos del uso
de estas sustancias.21
Paralelo al desarrollo tecnológico de la industria farmacéutica se ha desplegado un
importante interés por parte de los investigadores en estudiar sustancias naturales que
posean algunas propiedades farmacológicas con efecto antimicrobiano.22
Las plantas medicinales han sido utilizadas desde épocas primitivas en el tratamiento
de enfermedades. Durante mucho tiempo los fármacos naturales y sobre todo las
plantas medicinales, fueron el principal e incluso el único recurso del que disponían
los médicos. Esto hizo que se profundizara en el conocimiento de especies vegetales
con propiedades medicinales y que se ampliara la investigación a cerca de los
productos que de ellas se extraen.23
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Nuestro país está considerado entre los 12 países de mayor diversidad biológica de la
tierra, conocidos como países megadiversos tanto por el número de especies y de
recursos genéticos como por la variedad de ecosistemas.24
El uso de plantas es de gran importancia en la medicina tradicional. El conocimiento
científico de ciertas especies es desconocido y es necesario que aprendamos a
investigar los recursos naturales. Este conocimiento permitirá determinar los
principios activos de las plantas medicinales y estudiar su actividad en el organismo
para después aislarlos, obtenerlos y avalar los usos que la medicina popular le
atribuye a diversas especies vegetales.24
En nuestro medio algunas plantas medicinales en el área de salud dental están siendo
utilizadas en diversas formulaciones farmacéuticas, así tenemos: enjuagues bucales,
colutorios, soluciones tópicas y pasta dental .24
La Caesalpinia spinosa (Taya) es una planta producida en varias zonas del país. En
el Perú, se encuentra en los valles interandinos secos entre 1000 y 3100 msnm, los
departamentos de mayor producción son Cajamarca (41%), Ayacucho (16%), La
Libertad (13%), Huánuco (13%), también se reporta su presencia en Huancavelica,
Apurímac. 25
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En Perú, numerosos estudios han reportado la presencia de taninos, flavonoides,
gomas, alcaloides y proteínas en la Taya, que se pueden hallar tanto en la vaina como
en la semilla.26
Esta planta muy utilizada en la actualidad en la industria por sus altas
concentraciones de tanino y ácido gálico, es conocida además por su alto poder
astringente por coagular las albúminas de las mucosas y de los tejidos, creando una
capa aislante y protectora que reduce la irritación y el dolor; por tal motivo son
usados externamente para detener pequeñas hemorragias locales; en inflamaciones de
la cavidad bucal, catarros, bronquitis, quemaduras, hemorroides, e internamente
contra la diarrea, enfriamiento intestinal, afecciones vesiculares, y como
contraveneno en caso de intoxicación por alcaloides vegetales.27
Los taninos tienen la propiedad de formar complejos con macromoléculas,
particularmente con las proteínas; así forman enlaces puentes de hidrógeno, y una
unión covalente, colocándose entre las fibras de colágeno de la piel, empleándolos en
medicina en tratamientos de excoriaciones y quemaduras de la piel donde las
proteínas forman una capa protectora antiséptica bajo la cual se regeneran los
tejidos.28
En caso de la Caesalpinia spinosa "taya"; solo el extracto obtenido de la cáscara de
la Caesalpinia spinosa, tenía efecto inhibitorio mas no la pepa, que mostró un efecto
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inhibitorio nulo. Siendo este un aporte significativo para aquellas fórmulas
tradicionales que utilizan el fruto completo de la taya.29
La utilización de solventes orgánicos (como alcohol y acetona) tienen la ventaja de
preservar mejor los extractos e inhibir el crecimiento de bacterias, hongos y otros,
además de desnaturalizar las enzimas que pueden degradar los compuestos
biológicamente activos. En el caso de los extractos usando como solvente agua, estos
dan muestras viscosas y gelatinosas las cuales se hicieron difíciles de procesar (dados
estos factores, no podrían difundirse adecuadamente en el agar, y los resultados
obtenidos serían inconcluyentes).29
El uso de cepas bacterianas tanto Gram positivas como Gram negativas permitió una
idea representativa del efecto inhibitorio sobre dichos microorganismos.
Demostrándose un efecto preferencial por las Gram positivas, debiéndose aún probar
su efecto en un mayor número de cepas bacterianas.29
En la evaluación del extracto de taya usando el fruto (vaina) completo, se observó
actividad inhibitoria sobre cepas Gram positivas. Los componentes del fruto
relacionados con dicha actividad corresponden exclusivamente a la cáscara de la
vaina, donde la pepa no muestra actividad inhibitoria.29
Así mismo, en varios trabajos de investigación se concluye que la cáscara (vaina) de
Caesalpinia spinosa demuestra una buena acción inhibitoria sobre Staphylococcus
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aureus y Bacillus subtilis. 30,31 Mediante técnica de difusión en disco. Los extractos
fueron preparados usando como solvente alcohol-acetona (1:1). Se observó actividad
inhibitoria sobre cepas Gram positivas para el extracto de la vaina de tara más no
para el de la semilla. No se determinó la concentración mínima inhibitoria.29
De igual manera en un estudio publicado en Journal of Ethnopharmacology,
manifiesta que la taya también presenta actividad antibacteriana contra Bacillus
cereus, Staphylococcus epidermidis, Bacteroides fragilis.32
En otro estudio se hizo el ensayo antimicrobiano sobre extractos etanólicos al 80% de
nueve plantas obtenidos por maceración durante 5 días, una de las muestras
ensayadas fue la C. spinosa (vainas); se utilizaron cinco cepas Gram positivas y tres
Gram negativas usando el método de microdilución del caldo de cultivo (broth
microdilution). Los resultados son poco relevantes para la muestra mencionada a
excepción del ensayo contra E. faecalis donde el CMI fue de 0.5 mg / ml 33, sin
embargo no se menciona las diferentes concentraciones a las que fue comparada la
acción del extracto etanólico de C. spinosa.
Teniendo en cuenta las propiedades curativas, y el amplio y variado efecto
antibacteriano que presenta la Caesalpinia spinosa, nace el interés de determinar su
efecto antimicrobiano frente a uno de los agentes etiológicos con mayor capacidad
de supervivencia durante los procedimientos endodónticos, el Enterococcus faecalis.
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Es así que con el presente estudio se propone determinar el efecto in vitro y la
concentración mínima inhibitoria que presenta el extracto etanólico de vainas de
Caesalpinia spinosa “taya” sobre el crecimiento de E. faecalis, ya que es muy poca la
información a la acción in vitro de este agente y en nuestro medio no existen trabajos
similares en donde se demuestre el efecto antibacteriano de esta sustancia.
De obtener el efecto inhibitorio del extracto etanólico de vainas de C. spinosa (taya)
sobre el crecimiento de cepas de Enterococcus faecalis se abrirá una puerta de
posibilidades en la terapéutica de piezas dentarias con necrosis pulpar, que reducirá
los fracasos endodónticos ocasionados por infecciones persistentes y que evitará la
exposición local y sistémica a sustancias tóxicas, ya que esta solución podría
constituirse en una alternativa de origen natural para la medicación intraconducto.
1.1. Enunciado del problema:
¿Existe efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia
spinosa (Taya) sobre el Enterococcus faecalis ATCC 29212?
1.2. Hipótesis:
El extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa presenta efecto
inhibitorio in vitro sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212.
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1.3. Objetivos:
1.3.1. Objetivos Generales:
Conocer el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de vainas de
Caesalpinia spinosa (Taya) sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC
29212.
1.3.2. Objetivos Específicos:
Determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro del extracto
etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60%
sobre el crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Determinar cuantitativamente el efecto inhibitorio in vitro del extracto
etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60%
sobre el crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de
vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) sobre el crecimiento de cepas de
Enterococcus faecalis.
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II. MATERIAL Y MÉTODOS
2.1 MATERIAL DE ESTUDIO:
2.1.1 Material biológico:
Cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212, procedente de
Microbiologics Laboratory, obtenida en el Instituto Nacional
de Salud, Lima- Perú.
2.1.2. Material botánico:
Las vainas de Caesalpinia spinosa “taya” o “tara”, vainas
secas, recolectadas en la distrito de Otuzco. En el laboratorio
se seleccionó las vainas que no tenían daño alguno en su
cubierta; quedando aptas para su procesamiento.
2.2 MÉTODOS Y TÉCNICAS:
2.2.1 Tipo de Investigación: El presente trabajo presenta un diseño
experimental, “in vitro”, prospectivo y transversal.
2.2.2 Muestra: La muestra estará constituida por cepas de
Enterococcus faecalis ATCC 29212. Proveniente del
Microbiologics Laboratorio, adquiridos en el Instituto
Nacional de Salud, Lima- Perú. La cepa se enfrentó a cuatro
concentraciones (10%, 20%, 40% y 60%) del extracto
etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa “Taya”.
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2.3 VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIÓN:
Variable Indicador Tipo Escala
Extracto etanólico de
Caesalpinia spinosa
Variable independiente
Concentración de
Caesalpinia spinosa al
10%, 20%, 40% y
60%.
Cuantitativa Ordinal
Efecto inhibitorio In Vitro
sobre cepas
Enterococcus faecalis.
Variable dependiente
Escala de Duraffourd
Cualitativa Razón
Diámetro de halo
inhibitorio
Unidades Formadoras
de Colonias.
Cuantitativa Ordinal
2.4 Definición de términos operacionales:
Extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa (Taya): Extracto
cuyo solvente es etanol y que contiene los principios activos de la
planta Caesalpinia spinosa preparado a las concentraciones del 10%,
20%, 40%, 60%.
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Efecto inhibitorio in vitro: Capacidad para detener la reproducción o
muerte de una bacteria. Se determinara cualitativamente según la
escala de Duraffourd y cuantitativamente según CIM.
Escala de Duraffourd: Escala utilizada para determinar
cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de halos
de inhibición
Nula (-), para un diámetro inferior a 8 mm.
Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro
comprendido entre 8 a 14mm
Medio (muy sensible =++) para un diámetro entre 14 y 20mm
Finalmente para un diámetro superior a 20 mm el
microorganismo es sumamente sensible (+++)
Concentración inhibitoria mínima: Concentración mínima de una
sustancia que impide el crecimiento bacteriano in vitro.Se considera
CIM aquella en la que se presenta un crecimiento < de 30 UFC
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2.5 Diseño Procedimental:
2.5.1. Preparación del inóculo:
Cada cepa se diluyó en Tioglicolato estéril hasta que se obtuvo una
turbidez semejante al tubo 1 del Nefelómetro de Mc Farland, el cual contenía
1 x 108 UFC
2.5.2. Obtención del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa34:
Se preparó extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya),
para lo cual se seguirá el siguiente procedimiento:
Se obtuvieron un kilogramo de vainas secas de “Taya” teniendo en
cuenta su tamaño, color y estado.
A continuación, se pusieron a secar al horno a una temperatura de 40ºC
por un periodo de 36 h. con la finalidad de eliminar de forma eficiente la
humedad.
Luego, se procedió a moler las muestras secas utilizando un mortero,
hasta obtener un pulverizado homogéneo, de esta muestra solo se tomó
50 gr de la muestra molida y se colocaron en un frasco oscuro de vidrio
con 500 mL de etanol comercial de 70º (C2 H5 OH), y fue llevado a
maceración por 10 días.
Después se filtró el macerado utilizando papel Whatman Nº 4 en un
matraz estéril, la solución obtenida fue de 330 ml esta se distribuyó en 3
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vasos de precipitación de 10 ml y en un vaso de 300 ml y se llevó una
estufa a 40º C hasta la evaporación total del alcohol, obteniendo 0.85
gramos de polvo seco de extracto de taya por cada 10 ml de la muestra
después de 12 días de evaporación. El extracto se recibió en viales
estériles.
2.5.4. Estandarización de la solución Stock 35:
Se pesó 0.9693 g de extracto seco en un vial estéril y luego se agregó
0.65 ml. de etanol, para obtener la Solución Stock cuya concentración
final fue del 60 %.
Luego de obtenida la Solución Stock se procedió a preparar las
concentraciones al 10%, 20%, 40% y 60%.
2.5.5. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) in
vitro de Caesalpinia spinosa.
Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) mediante la
técnica de dilución en tubos, se colocó 0.5 ml de extracto etanólico de
Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% en tubos diferentes, a este
se agregó 0.2 ml de la cepa preparada en Tioglicolato. Se realizó 10
repeticiones por cada concentración y 10 más para el tubo control.
Luego, los 50 tubos de ensayo fueron colocados en la Jarra Has Pack,
incubados en la estufa a 37º C por 24 horas.
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Posteriormente se tomó 0.1 ml. de la dilución de cada uno de los tubos
placas, y se sembró en placas petri que contenían medio de cultivo Mueller
Hinton, se usó el asa de Driglasky para dispersar la muestra, todo el
procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la llama de un
mechero.Dichas placas fueron colocadas dentro de la Jarra Has Pack, llevadas
a la estufa a 37°C por 48 horas.
Finalmente se observó el crecimiento bacteriano y se realizó el conteo de las
Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
2.5.6. Determinación del efecto antibacteriano (prueba de
susceptibilidad):
Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon 4 diluciones a las
concentraciones del 10%, 20%, 40%, 60% de extracto etanólico de
Caesalpinia spinosa. Dichas diluciones se conservarán a 4 ºC para el estudio
microbiológico en frascos ámbar.
Para esta prueba se utilizó el método de Difusión en Discos. Se prepararon
discos de papel filtro estériles, los cuales fueron cargados con 50 µl de cada
concentración del extracto etanólico.
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Luego con una aguja estéril estos fueron colocados sobre placas petri que
contenían cultivos de Enterococcus faecalis ATCC 29212 en medio Mueller
Hinton. Se hicieron 16 repeticiones por cada concentración
Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la
llama de un mechero. Posteriormente las placas se incubaron a 37°C en
microanaerobiosis haciendo uso de la Jarra de Has Pack.
La lectura se llevó a cabo a las 24 horas. Se midieron los halos de inhibición
de cada una de las concentraciones, incluyendo el área del disco de papel de
filtro, con un calibrador vernier o pié de rey.
Al hacer la lectura, se clasificó los diámetros de los halos de inhibición
teniendo en cuenta a escala de Duraffourd.36
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3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO E INTERPRETACIÓN DE LA
INFORMACIÓN
Para analizar la información se construyeron cuadros de distribución de
frecuencias de una entrada con sus valores absolutos.
Para establecer si la distribución de los promedios de halos de inhibición
difieren entre si según la concentración del extracto etanólico de taya en la
efectividad antibacteriana tipo cuantitativa, se utilizó la prueba de Análisis de
varianza .En los casos que hubo distribución significativa se aplicó la prueba
de comparaciones múltiples o Prueba de Duncan.
Para establecer si la distribución de los halos de inhibición difieren entre si
según la concentración del extracto etanólico de Taya en la efectividad
antibacteriana tipo cualitativa, se utilizó la prueba Chi cuadrado.
Ambas con una significancia al 5 %.
Con la información recolectada se construyó una base de datos que serán
procesados de manera automatizada con el soporte del paquete estadístico
SPSS - 15.0.
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III. RESULTADOS
En el presente estudio de tipo experimental “in vitro”, cuyo propósito fue de
determinar el efecto inhibitorio del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia
spinosa Taya sobre Enterococcus faecalis ATCC29212, y para la cual se utilizaron
4 concentraciones 10%, 20%, 40% y 60%, y un grupo control, se hallaron los
siguientes resultados:
Después de realizada la prueba de susceptibilidad y de haber medido los halos de
inhibición, se clasificó los diámetrosde acuerdo a la escala de Duraffourd38
obteniendo que:
De las 16 repeticiones al 10%, 15 presentaron eficacia límite y 1 efecto
medio. De las 16 repeticiones al 20%, 14 presentaron efecto límite y dos
efecto medio, de las 16 repeticiones al 40% todas presentaron efecto medio ,
y de las 16 repeticiones al 60% 15 presentaron efecto medio y 1 efecto alto en
la inhibición de Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Los promedios de los diámetros de halo de inhibición de crecimiento del
Enterococcus faecalis al 10% fue de 12.9mm, al 20% de 13.5mm, al 40% de
16.16 y al 60% de 17.31
El promedio de unidades formadoras de colonias obtenida a las 4 diferentes
diluciones fueron: al 10% -35 UFC, al 20% -30 UFC promedio, al 40%- 3
UFC promedio, y al 60% -0UFC.
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Tabla No1: Efecto inhibitorio in vitro cualitativo del extracto etanólico de
vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento
del E. faecalis ATCC 29212, según escala de Duraffourd.
CONCENTRACIÓN ESCALAS DE DURAFFOURD
TOTAL
Sensible Muy sensible
10% 15 1 16
20% 14 2 16
40% 0 16 16
60% 0 16 16
TOTAL 29 35 64
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011
Sensible = + de 8 - 14mm
Muy sensible = ++ para un diámetro entre 14 y 20mm
En la tabla No 1, se observa el efecto inhibitorio in vitro cualitativamente del
extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el
crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212, según las pautas de Duraffourd,
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Tabla No2: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de
vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del
E. faecalis ATCC 29212, según diámetro de halo inhibitorio y mediante el
Análisis de Varianza
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011
En la tabla Nº 2, se muestra el análisis de varianza, y se obtuvo como resultado
que existe una diferencia estadística altamente significativa del diámetro del
halo de inhibición del crecimiento del Enterococcus faecalis de acuerdo a la
concentración del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa aplicada.
Fuente de variación Suma de cuadrados Gl Cuadrados medios F P
Tratamiento 208.074 3 69.358 26.732 0.000
Error 155.672 60 2.595
Total 363.743 63
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Tabla No3: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de
vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento
del E. faecalis ATCC 29212, según diámetro de halo inhibitorio y mediante
la Prueba de Duncan
Concentraciones ni Grupos alfa=0.05
1 2 3
10% 16 12.94
20% 16 13.56
40% 16 16.16
60% 16 17.31
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011
En la tabla Nº 3, se muestran los promedios del diámetro de halo de inhibición
de crecimiento del Enterococcus faecalis después de aplicar la técnica de
difusión en discos. Se realizó la Prueba de Duncan, que comparó cada uno de los
promedios de los halos, demostrando que no existe diferencia significativa entre
los diámetros promedios de los halos inhibitorios del extracto etanólico al 10 % y
al 20%; pero existe diferencia significativa entre el este grupo homogéneo y el de
40% y 60%. También existe diferencia significativa entre el tamaño de halo
inhibitorio formado al 40% de concentración de extracto etanólico de C.
spinosa y el grupo del 60 % (p=0.05).
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Gráfico Nº 1: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de
vainas de Caesalpinia spinosa a diferentes concentraciones sobre E. faecalis
ATCC29212
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011
En el Gráfico Nº 1, se aprecia que conforme aumenta la concentración del
extracto etanólico de Caesalpinia spinosa aumenta el diámetro de halo de
inhibición, es decir aumenta el efecto inhibitorio
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Tabla No4: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de
vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del
E. faecalis ATCC 29212, según UFC y mediante el Análisis de Varianza.
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2011
En la tabla Nº 4, se muestra el análisis de varianza, el cual determina que existe una
diferencia estadística altamente significativa en el crecimiento de UFC de
Enterococcus faecalis de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de
Caesalpinia spinosa aplicada. (p = 0.000).
Fuente de variación Suma de cuadrados Gl Cuadrados medios F P
Tratamiento 9,778.100 3 3,259.367 1,783.240 0.000
Error 65.800 36 1.828
Total 9,843.900 39
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Tabla No5: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de
vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento de
E. faecalis ATCC 29212, según UFC y mediante la Prueba de Duncan
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2011
En la tabla Nº 5, se muestran los promedios de UFC de Enterococcus faecalis
después de la aplicación del extracto etanólico de C. spinosa a diferentes
concentraciones, se realizó la Prueba de significancia de Duncan.
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Gráfico Nº 2: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo de UFC de
Enterococcus faecalis ATCC29212 en función a cada una de las cuatro
concentraciones del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa.
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador
En el gráfico Nº 2, se muestra que conforme se aumenta la concentración del
extracto etanólico de Caesalpinia spinosa el número de unidades formadoras de
colonias promedio de Enterococcus faecalis disminuye, es decir el efecto
inhibitorio aumenta.
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Tabla No 6: Determinación de la concentración mínima inhibitoria del
extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa sobre cepas de
Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2011.
En la tabla Nº 6 se muestra las UFC registradas en las 10 repeticiones por cada
concentración de extracto etanólico de Caesalpinia spinosa y el promedio de estas
por concentración. La dilución al 40% presentó menos de 30 UFC constituyendo la
CMI mientras que en la del 60% no se encontró UFC.
CONCENTRACION
DE EXTRACTO
ETANÓLICO DE
Caesalpinia spinosa
UNIDADES FORMADORES DE COLONIAS DE
Enterococcus faecalis
NÚMERO DE REPETICIONES
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
PROMEDIO
CONTROL
109
109
109
109
109
109
109
109
109
109
109 UFC
10%
34
35
34
35
35
35
36
36
35
35
35 UFC
20%
30
29
30
29
32
28
30
32
30
31
30 UFC
40%
4
3
0
0
6
5
5
4
0
3
3 UFC
60%
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0 UFC
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IV. DISCUSIÓN
El presente estudio de tipo experimental, demostró el efecto inhibitorio in
vitro del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa a cuatro diferentes
concentraciones 10%, 20%, 40% y 60% frente a cepas de Enterococcus faecalis; si
bien existe un trabajo que demuestra la actividad de Caesalpinia spinosa frente a
Enterococcus faecalis, donde se menciona que la CMI fue de 0.5 mg / ml 33, no se
detalla cómo fue determinado este, ni el parámetro de concentraciones a partir de las
cuales se determinó este valor.
Es así que para determinar las concentraciones finales a aplicar, se realizó una
prueba piloto en donde se incluye la CMI mencionada anteriormente como
referencia, elaborando así concentraciones al 0.25mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.75 mg/ml y 1
mg/ml y comparando su efecto con la del extracto etanólico al 40% de concentración,
mediante la prueba de susceptibilidad se determinó después de 24 horas que la única
concentración que presentó efecto inhibitorio fue la concentración de extracto
etanólico al 40%.
En función a este resultado se utilizaron concentraciones de extracto
etanólico de Caesalpinia spinosa proporcionales cercanas mayores y menores, tales
como 10 %, 20%, 40% y 60%. Determinando a partir de estas concentraciones
finales la CMI.
La concentración mínima inhibitoria obtenida fue la de 40 %, ya que el
número de UFC a partir de esta concentración fue menor a 30.38 Sin embargo todas
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las concentraciones tuvieron efecto inhibitorio comparado con el control en donde se
observó un crecimiento de UFC de aproximadamente 109 UFC/ml. (Tabla 5)
Los promedios de diámetros de halos de inhibición obtenidos después de
aplicada la prueba de susceptibilidad de difusión en discos, demostró que existe
diferencia altamente significativa del efecto inhibitorio entre los grupos formados.
(Tabla 2), así mismo al comparar el efecto inhibitorio de las 4 concentraciones a
través de la prueba de Duncan obtenemos que no existe diferencia significativa entre
el efecto inhibitorio producido al 10% y 20 % de concentración del extracto etanólico
de Caesalpinia spinosa. (Tabla 3)
Sin embargo al aplicar la prueba de Duncan para comparar el crecimiento de
UFC a las diluciones de 10%,20%,30% y 40% se determinó que cada una de estas
presenta un efecto inhibitorio diferente altamente significativo en el crecimiento de
UFC de Enterococcus faecalis (p=0.05). (Tabla 4).
Malpartida, realizó un estudio experimental donde compara el efecto del
aceite esencial de Minthostachis mollis (muña), Paramonoclorofenol alcanforado y
Gluconato de clorhexidina al 2 % frente a cepas de E. faecalis, en dónde los
diámetros de halo de inhibición oscilaron entre 13.8 y 15.02mm, 17.6 y 19.42mm y
23.41 y 23.64 respectivamente.38
En el presente estudio al aplicar el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa
se obtuvo de halos de inhibición promedios entre 12.9 y 17.3mm (Tabla 3), lo que
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nos estaría indicando que este extracto etanólico presenta un efecto inhibitorio mayor
al del aceite esencial de Minthostathis mollis y un efecto similar al del
Paramonoclorofenol alcanforado, 19
Azaña , en el 2010, realizó otro estudio en donde determina efectividad antibacteriana
in vitro del aceite esencial de Minthostachys mollis griseb (muña) sobre bacterias
prevalentes en patologías periapicales crónicas de origen endodóntico, entre ellas el
E. faecalis; en el que se aplicó la prueba de sensibilidad o susceptibilidad bacteriana
y en donde el aceite esencial de muña al 100 % presentó un promedio de diámetro
del halo inhibitorio de 9 mm , al 50% presentó halo promedio de 7.0 mm y al 25% un
halo inhibitorio promedio de 5 mm , el paramonoclorofenol que fue un Control + un
promedio de halo inhibitorio de 12mm.
Sin embargo los promedios de halos inhibitorios obtenidos al aplicar el extracto
etanólico de Taya sobre E. faecalis fueron de 12.9 mm al 10%, 13.6mm al 20%,
16.1mm al 40% y de 17.3mm al 60% (tabla3); promedios mayores a los formados por
el aceite esencial de muña y al formado por el paramonoclorofenol.
Así mismo al comparar cualitativamente los resultados, según la escala de
DURAFFOURD el esencial de muña al 100% causó sensibilidad límite sobre E.
faecalis; el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa causó sensibilidad límite al
10% y 20%, pero al aumentar la concentración causó sensibilidad media y alta
sobre las cepas de E. faecalis. (TABLA 1)
Estos resultados podrían deberse a que son especies vegetales diferentes y
tienen un perfil fitoquímico distinto; así también, a que la obtención de principios
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activos se llevó a cabo bajo procesos distintos. El mayor efecto inhibitorio de la
Caesalpinia spinosa podría deberse a que al utilizar un solvente orgánico (etanol) se
preserva mejor los compuestos biológicamente activos.25
Así también, estudios hasta ahora realizados demuestran que la “taya” contiene
taninos, flavonoides, y gomas, de allí su efecto antimicrobicida27. La vaina posee la
mayor concentración de taninos que oscila entre 40% y 60%. Las vainas de
Caesalpinia spinosa contienen hasta 25 % de ácido gálico, que es uno de los mayores
constituyentes de los taninos.26
Probablemente los taninos serían los fitoconstituyentes con mayor propiedad
antibacteriana, al precipitar las proteínas (enzimas), implicadas en las diversas rutas
microbianas26.
Lock de Ugaz37, en su investigación demuestra que los fenoles y flavonoides,
constituyentes también de Caesalpinia spinosa, tienen propiedades antiinflamatorias,
antibacterianas, y antifúngicas, cuya acción provoca lesiones en la membrana
citoplasmática, ocasionando una disfunción en la composición interna de las células
bacterianas.
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V. CONCLUSIONES
1. El extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (Taya) presenta efecto
inhibitorio in vitro sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212 a las
24 horas de su aplicación.
2. El extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) presenta
efecto inhibitorio in vitro cualitativo límite para las concentraciones del 10%
y 20% y efecto inhibitorio medio para las concentraciones del 40% y 60% ,
sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212 ,según la escala de
Duraffourd.
3. El efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas de
Caesalpinia spinosa sobre el E. faecalis ATCC29212 a las concentraciones
de 10%, 20%, 30% Y 60% fue directamente proporcional al diámetro de los
halos de inhibición, y a la formación de UFC.
4. La concentración inhibitoria mínima in vitro fue de 40 % para el extracto
etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa frente a las cepas de
Enterococcus faecalis ATCC 29212.
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VI. RECOMENDACIONES
1. Realizar estudios comparativos in vitro del efecto del extracto etanólico de
Caesalpinia spinosa con medicamentos intraconducto .
2. Ejecutar estudios experimentales in vitro con Caesalpinia spinosa frente a
patógenos de la cavidad bucal, para ampliar el espectro de actividad
antimicrobiana de esta.
3. Obtener otros tipos de extractos de Caesalpinia spinosa para comparar con el
extracto etanólico, y determinar la eficacia antibacteriana.
4. Realizar pruebas in vivo para valorar la efectividad y la toxicidad que pueden
proporcionar los componentes activos de Caesalpinia spinosa, así como la
dosis terapéutica y la concentración óptima para ser utilizado como
medicamento intraconducto en tratamientos endodónticos.
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IV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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comparación al paramonoclorofenol alcanforado y gluconato de clorhexidina
al 2 % frente a cepas de Enterococcus faecalis”. Malpartida Quispe F. Rev
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En “Evaluación in Vitro de la eficacia antibacteriana del Hipoclorito de
Sodio al 1%, 2.5% y 5.25% a diferentes Temperaturas frente a cepas de
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productos naturales. 2º ed. Perú: Editorial Pontificia Universidad Católica
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Minthostachys mollis griseb (muña) sobre bacterias prevalentes en
patologías periapicales crónicas de origen endodóntico [Tesis para optar el
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Nacional Mayor de San Marcos
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ANEXOS
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Tabla Nº 1: Efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de vainas de
Caesalpinia spinosa (Taya) sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212,
según el método de difusión en discos.
DIÁMETRO DEL HALO DE INHIBICIÓN (mm)
N/C
CONCENTRACIONES DE EXTRACTO
ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa
10% 20% 40% 60%
T5
Control
F3 1 16 15 15 18 0
2 14 14 15 19 0
3 13.5 13.5 15 19 0
4 13 13.5 16 19 0
5 13 13 15.5 20 0
6 13 13 15 20 0
7 13 13 15.5 20 0
8 11.5 12.5 16 21.5 0
9 14 14.5 16 13 0
10 13.5 14 15 14 0
11 13 14 19 14 0
12 13 14 17 16 0
13 12 13.5 17.5 16 0
14 12 13.5 17 16 0
15 11.5 13 18 14 0
16 11 13 16 17.5 0
Prom
(mm.) 12.9 13.6 16.1 17.3 0
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011
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SELECCIÓN Y PROCESAMIENTO DE Caesalpinia spinosa TAYA
REALIZADO EN LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE LA
FACULTAD DE MEDICINA UNT
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Secado y selección de Caesalpinia spinosa
Vainas de Caesalpinia spinosa Taya seleccionada- Material estéril necesario para
procesamiento
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Trituración de vainas de Caesalpinia spinosa
Producto obtenido de la trituración Pesado de polvo 50 gr como
de vainas de Caesalpinia spinosa indica el proyecto
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Aplicación de 500 ml de alcohol de 70º a los 50gr de polvo de Taya contenido en
botella ámbar; la solución obtenida estéril se dejó macerar por 10 días en un lugar
oscuro y a temperatura ambiente.
Filtrado después de 10 días de maceración
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Obtención de 330 ml de macerado de Caesalpinia spinosa, este se colocó en la estufa
a 37 º c para la evaporación de alcohol .
Después de 12 días de evaporación, se obtuvo el extracto
etanólico de Caesalpinia spinosa. Obteniendo 62 ml al 40 % de
concentración y 2.5 gr de extracto al 100 % de concentración
REALIZACIÓN DE PRUEBA PILOTO
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Se tomaron microlitros del extracto obtenido y se disolvieron en agua destilada hasta
llegar a las 4 concentraciones requeridas.
Se obtuvieron las 4
concentraciones de extracto
etanólico de vainas
Caesalpinia spinosa 0.25mg/ml,
0.5 mg/ml, 0.75mg/ml, 1 mg/ml
Se aplicaron las 4 concentraciones más un control que fue el solvente (agua destilada)
y en el centro un papel filtro con extracto etanólico al 40 % se hicieron dos
repeticiones
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Después de 24 horas se haya suceptibilidad del Enteroccocus faecalis al extracto
etanólico de taya al 40 % de concentración. Obteniendo halo de inhibición promedio
de 13.5.
A partir de estos resultados se decide obtener nuevas concentraciones 40%, 20 %, 10
%,y del extracto al 100% en polvo seco se obtuvo la concentración al 60%
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Obtención de 4 concentraciones concentraciones finales
REALIZACIÓN DE PRUEBA DE SUCEPTIBILIDAD
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Tubos conteniendo Agar TSA jóvenes de Enterococos faecalis
Preparación de inóculo standarizado,comparando con tubo de mackfarland
Sembrado de cepas de Enterococcus
faecalis en Placas petri conteniendo Agar
sangre Muller Hinton
Discos de papel filtro embebidos en las 4 concentraciones de extracto etanólico de
Caesalpinia spinosa
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Se
utilizaron 10 placas petri ,16 repeticiones por
concentración, Colocación de 8 papeles filtro por placa petri. Incubación por 24 horas
en jarra Has Pack a 37ºC
Lectura de halo inhibitorio después de 24horas de incubación.
SUSCEPTIBILIDAD AL 10 %
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SUSCEPTIBILIDAD AL 20 %
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60
SUSCEPTIBILIDAD AL 40 %
SUSCEPTIBILIDAD AL 60 %
SUSCEPTIBILIDAD EN CONTROL
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DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA
TÉCNICA DE DILUCIÓN DE TUBOS
Tubos conteniendo extracto extanólico de Caesalpinia spinosa (las concentración del
extracto disminuyen de izq. a der.), y tubo control todos presentan inóculo de
Enterococcus faecalis. Se incubó por 24 horas a 37 0 C
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Sembrado de cada uno de los inóculos Dispersión con Asa de
Driglasky
RESULTADOS DE CMI
Todas las concentraciones inhibieron el crecimiento de colonias, pero la inhibición
total de UFC se dio apartir del 40% determinándose esta como la CMI, después de 48
horas a 370c
UFC AL 10% DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa
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UFC AL 20% DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa
UFC AL 40% DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa
UFC AL 60% DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa
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UFC EN PLACA CONTROL
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ANEXO 02
EVALUACIÓN DE LA TESIS
El Jurado deberá:
a. Consignar las observaciones u objeciones pertinentes
relacionadas a los siguientes ítems.
b. Anotar el calificativo final.
c. Firmar los tres miembros del jurado.
TESIS:………………………………………………............................………
……………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………
………
1. DE LAS GENERALIDADES
El Título: ……………………………………………………………………….
………………………………………………………………………………….
Tipo de Investigación: ………………………………………………………. .…………………………………………………………………………………. 2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN
Antecedentes: ……………………………………………………………….. Justificación: …………………………………………………………………. Problema:…………………………………………………………………….. …………………………………………………………………………………. Objetivos: ……………………………………………………………………. Hipótesis: ……………………………………………………………………. Diseño de Contrastación:…………………………………………………… Tamaño Muestral:……………………………………………………………
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Análisis Estadístico: …………………………………………………………
3. RESULTADOS:……………………………………………………………
….
4. DISCUSIÓN:
………………………………………………………………….
5. CONSLUSIONES:
……………………………………………………………
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
……………………………………….
………………………………………………………………………………….
7. RESUMEN:
……………………………………………………………………
………………………………………………………………………………….
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:
………………………………….
………………………………………………………………………………….
9. ORIGINALIDAD:
……………………………………………………………...
10. SUSTENTACIÓN:
10.1Formalidad:
………………………………………………………...
10.2Exposición:………………………………………………………
….
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10.3Conocimiento del Tema:
………………………………………….
CALIFICACIÓN
(Promedio de las 03 notas del jurado)
JURADO Nombre Código Firma
Presidente: Dr. ………………………….. …………………
……………….
Grado Académico: ………………………………………………
Secretario: Dr. ………………………….. …………………
……………….
Grado Académico: ………………………………………………
Miembro: Dr. …………………………… …………………
……………….
Grado Académico: ………………………………………………
ANEXO 03
RESPUESTAS DEL TESISTA A OBSERVACIONES DEL JURADO
El Tesista deberá responder en forma concreta a las observaciones del
jurado a manuscrito en el espacio correspondiente:
a. Fundamentando su discrepancia.
b. Si está de acuerdo con la observación registrada.
c. Firmar.
TESIS: …………………………………………………………........................... ………………………………………………………………………………………
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……………………………………………………………………………………… 1. DE LAS GENERALIDADES
El Título: ……………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… Tipo de Investigación: ……………………………………………………… …………………………………………………………………………………. 2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN
Antecedentes: ……………………………………………………………….. Justificación: …………………………………………………………………. Problema:…………………………………………………………………….. …………………………………………………………………………………. Objetivos: …………………………………………………………………….. Hipótesis: …………………………………………………………………….. Diseño de Contrastación:…………………………………………………… Tamaño Muestral:…………………………………………………………… Análisis Estadístico: …………………………………………………………
3. RESULTADOS:……………………………………………………………
….
4. DISCUSIÓN:
………………………………………………………………….
5. CONSLUSIONES:
……………………………………………………………
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6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
……………………………………….
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7. RESUMEN:
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8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:
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………………………………………………………………………………….
9. ORIGINALIDAD:
……………………………………………………………...
10. SUSTENTACIÓN:
10.1Formalidad:……………………………………………………………
…
10.2Exposición:
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10.3Conocimiento del Tema:
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Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/
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