Efecto de los colorantes sobre el crecimiento de los microorganismos
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL- ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Efecto de los colorantes sobre el crecimiento de
los microorganismosLaboratorio de microbiología general
Grupo 3QM1Laboratorio 3 y 4. Equipo 6
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IntroducciónUn colorante es un compuesto orgánico natural o sintético, que al aplicarlo a un sustrato le confiere un color más o menos permanente.
Las sustancias coloreadas son las que absorben luz en la región visible del espectro (400 a 750 nm). Una sustancia presenta el color complementario del que absorbe ya que este se resta de la luz reflejada o transmitida. F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968
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Naturaleza química de los colorantesCromóforos: (del griego portador de color) es el responsable del color.
Son rearreglos de dobles enlaces conjugados en sistemas aromáticos o lineales, que dan la disponibilidad electrónica para absorber cuantos de la región del visible del espectro electromagnético, poseen átomos electrodonadores o electroatractores al final de estas conjugaciones.
NITRONITROSO
IMINA
AZO
JA Kiernan. Classification and naming of dyes, stains and fluorochromes. Biotechnic and Histochemistry · September 2001
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Auxocromos: Evita las interferencias generadas en el cromóforo, intensificando el color del mismo y también permite acoplarse a las estructuras deseadas de un sustrato.
BÁSICOS O CATIÓNICOS:
ÁCIDOS O ANIÓNICOS:
-COOH, -OH, -SO3H-NHR, -NR2, -NH
FRY, B. A. (1957). J. gen. Microbiol. 16, 341-349
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Usos de colorantes en microbiología
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Colorantes por acción antimicrobiana
Derivados del trifenilmetano. Intervienen en la síntesis de pared celular.
Ejemplos: Verde brillante, Verde de malaquita, Cristal violeta.
Derivados de la acridina. Intervienen en la síntesis de ácidos nucléicos y proteínas.
Ejemplos: Acriflavina, Proflavina, Naranja de acridina.
Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos esenciales. 2010.
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Derivados del trifenilmetano. Mecanismo de acción:
La Pseudobase, adquiere carácter más lipofílico, lo que le confiere una mejor incorporación a la célula, y posteriormente pueda fijarse a los grupos Fosfato de los ácidos nucléicos.
Se ha demostrado su capacidad inhibitoria en la síntesis de glutamina en modelos bacterianos de Staphylococcus aureus. (Fry,1957).
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Verde de Malaquita Cristal violeta
Estructuras de los colorantes
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Derivados de la acridina. Mecanismo de acción:
Cuadro tomado de: Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2001) 47, 1-13
Su mecanismo de acción es, la formación de un complejo DNA-acridina, que interfiere en la biosíntesis de ácidos nucléicos.
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Azul de metileno
Safranina
Proflavina
Naranja de acridina
Estructuras de los colorantes
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ObjetivoRealizar dos técnicas que permitan observar el efecto de los colorantes sobre la viabilidad de los los microorganismos.
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ProcedimientoI. Efecto de colorantes en tubo
*La concentración de colorante en el tubo 1 es de 2 (㎍ / mL)Los colorantes utilizados fueron: cristal violeta, safranina, azul de metileno y verde de malaquita
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II. Efecto de los colorantes en placa
*Las 3 concentraciones de los colorantes en las cajas fueron de: 1 ㎍ / mL, 0.1 ㎍ / mL y 0.01 ㎍ / mL
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Resultados en tubo Laboratorio 3
Colorante
Escherichia coli Staphylococcus aureus
Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto
Cristal violeta
10-1 2 bactericida
10-2 0.2 bactericida
Safranina
- >2 bactericida
10-2 0.2 bactericida
Azul de metileno
- >2 bactericida
10-2 0.2 bactericida
Verde de malaquit
a
- >2 bactericida
10-3 0.02 bactericida
CMI= Concentración mínima inhibitoria
- = Se desconoce la dilución
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Resultados en tubo Laboratorio 4
Colorante
Escherichia coli Staphylococcus aureus
Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto
Cristal violeta
10-2 0.2 X 10-8 2X10-7 X
Safranina
- >2 X - >2 X
Azul de metileno
- >2 X 10-1 2 X
Verde de malaquit
a
- >2 X No se sembróCMI= Concentración mínima inhibitoria
- = Se desconoce la dilución X= no se determinó
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Resultados en tubo ambos laboratorios
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Safranina
Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
10-4 + +/- +/- +
10-5 + +/- +/- +
10-6 + + +/- +
CMI >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml
Cristal violeta
10-4 - - - +
10-5 - - - +
10-6 - - - +
CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml
Resultados en en placa Laboratorio 4
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Resultados en en placa Laboratorio 3Safranina
Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
10-4 + +/- +/- +
10-5 + +/- +/- +
10-6 + + +/- +
CMI >1μg/ml <0.1μg/ml <0.1μg/ml >1μg/ml
Cristal violeta
10-4 - - - +
10-5 - - - +
10-6 - - - +
CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml
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EvidenciasEvidencias del crecimiento con Safranina en placa
Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4
Bacillus subtilis, Escherichia coli Escherichia coli (+) Escherichia coli (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)
Donde 1: Bacillus subtilis 2: Escherichia coli 3: Staphylococcus aureus 4: Klebsiella pneumoniae
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EvidenciasEvidencias del crecimiento con Cristal violeta en placa
Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4
Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)
Donde 1: Bacillus subtilis 2: Escherichia coli 3: Staphylococcus aureus 4: Klebsiella pneumoniae
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BibliografíaFeduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos
esenciales. 2010.Editorial Médica Panamericana.F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968. Ed.
Reverté Pág 33