快速可靠地分离蛋白质聚集体和降解产物 · 2017. 10. 10. ·...

Agilent BioHPLC 体积排阻色谱柱

快速可靠地分离蛋白质聚集体和降解产物

AGILENT BIOHPLC 体积排阻色谱柱

实现蛋白质聚集体和降解产物快速、高分离度的分离

尺寸排阻色谱 (SEC) 是定量分析单体、二聚体、聚集体和潜在降解物的重要工具。这些类型

蛋白质的分离需要最高的准确度和最快的速度。

用于尺寸排阻色谱 (SEC) 的 Agilent BioHPLC 柱能为生物制药分析提供快速、可靠、准确

的性能。这类色谱柱可以轻松融入您的工作流程，而且有各种孔径和规格可供选择，确保每

次都能实现完美分离。

安捷伦作为拥有 30 多年 SEC 色谱柱和仪器生产经验的领先企业，正不断开发出能够提供最

高分离度和最快分离速度的新产品。使您可以快速而经济地将改变人类生活品质的产品送达

到有需要的人们手中。

AdvanceBio SEC 是 Agilent SEC 色谱柱系列产品的最新成员，采用全新技术、填料以及化学键

合相，专为实现 mAb 聚集体和蛋白质的准确定量而设计打造。

3

哪一种体积排阻色谱柱适合您的应用？

您可以基于您的分析物和方法参数，从安捷伦范围广泛的尺寸排阻色谱柱中选择适合您的色谱柱，实现完美分离。本图为您提供了

实现常见分子类型最佳分离结果的孔径范围概览。

Agilent Bio SEC 100Å



100 D 1 kD 10 kD 100 kD 1000 kD 10000 kD

胰岛素肌红蛋白

卵清蛋白

BSA IgG 甲状腺球蛋白

ProSEC 300S

ZORBAX GF-250

ZORBAX GF-450


多肽球蛋白蛋白偶联物和生物大分子



100000 kD

用于 MAB 和蛋白质分析的首选色谱柱 Agilent AdvanceBio SEC 300Å

Agilent AdvanceBio SEC 130Å 全新

专为单克隆抗体分离设计的全新技术 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱 .........................................4

利用质谱进行蛋白质分析 Agilent Bio SEC-3 HPLC 色谱柱 ..........................................9

生物大分子 Agilent Bio SEC-5 HPLC 色谱柱 ....................................... 11

采用单根色谱柱分离球蛋白 Agilent ProSEC 300S 色谱柱 ........................................... 12

针对需要采用 USP 指定产品 L35 的 SEC 方案 Agilent ZORBAX GF-250 和 ZORBAX GF-450 色谱柱 .................................................. 13

研发、QC/QA 和生产

单色谱柱的灵活性 .......................................................... 14 纯化 .................................................................................. 23 高级检测器 ...................................................................... 24

用于蛋白质鉴定和杂质分析的液相色谱系统 ...................... 25

订购信息 ................................................................................. 28

内容：涵盖最新生物分子应用的 AGILENT BIOHPLC SEC 色谱柱完整产品系列

如需了解蛋白质聚集体和降解产物快速、高分离度分离的更多信息，请访问 www.agilent.com/chem/BioHPLC

4

2 4 6 8 10 12 140

25

50

75

100

125

150

175

2 4 6 8 10 12 140

100

200

300

400

5001

2 3 4

5

mAU

mAU

min

min

1 2

3

4

5

AGILENT ADVANCEBIO SEC 色谱柱

AdvanceBio SEC 色谱柱能够实现 mAb 聚集体的准确定量与蛋白

质的 SEC 分析。此项全新 SEC 技术专为以下目的设计打造：

• 通过高分离度实现准确定量分析

• 通过加快分析速度助您按时交付

• 不改变样品完整性

• 对低浓度聚集体也能实现高灵敏度定量分析

此外，AdvanceBio SEC 色谱柱还能通过稳定可靠的方法避免重

复样品分析，从而提高实验室分析效率。您还可以将方法轻松

转换至包括 QA/QC 在内的其他环节，从而降低后期候选样品与

批处理样品出现问题的风险。

通过最佳分离度实现准确定量分析

右侧色谱图为 AdvanceBio SEC 300Å 和 130Å 色谱柱对 BioRad 凝胶过滤标准品的分离对比结果。

顶部色谱图：AdvanceBio SEC 300Å 色谱柱提供的分离度可用于

包括 mAb 在内的大分子蛋白质的定量分析。

底部色谱图：AdvanceBio SEC 130Å 色谱柱提供的分离度可用于

蛋白质片段、小分子蛋白质以及多肽的定量分析。

BioRad 凝胶过滤标准品 #1511901

2 4 6 8 10 12 14 min

0

10

20

30

40

50

60

70

mAU

1

23

45

AdvanceBio SEC 300Å 和 130Å 色谱柱对 BioRad 凝胶过滤混标的分离结果。 300Å 色谱柱可提高分离度

AdvanceBio SEC 130Å 色谱柱对蛋白质和多肽混合物的分离结果，显示其对小

分子多肽和蛋白质的分离度

色谱柱： AdvanceBio SEC, 7.8 x 300 mm

1. 卵清蛋白（鸡）

2. 肌红蛋白（马）

3. 抑肽酶（牛）

4. 神经降压素

5. 血管紧张素 II

1. 甲状腺球蛋白 2. 牛 γ-球蛋白 3. 卵清蛋白（鸡） 4. 肌红蛋白（马） 5. 维生素 B12

1. 甲状腺球蛋白 2. 牛 γ-球蛋白 3. 卵清蛋白（鸡） 4. 肌红蛋白（马） 5. 维生素 B12

流动相： 150 mM 磷酸钠，pH 7.0

130Å

130Å

300Å

5

0.80

0.90

1.00

1.10

1.20

1.30

1.40

1.50

1.60

1.70

0 50 100 150 200 250 300 350 400

分离度因子（单体

/二聚体）

400 多次进样的分离度 1 - 400 次分析的叠加色谱图

按时交付 — 提高样品通量

将 AdvanceBio SEC 色谱柱柱长从 300 mm 缩短至 150 mm 并将流速从 1.0 mL/min 提高至 2.0 mL/min 后，分析用时可从 12 min 缩短至 3 min。此外，IgG 单体与二聚体的

分离度也能够满足定量要求，并且在 400 次进样期间始终维持恒定。

色谱柱： Agilent AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 x 150 mm

流动相： 150 mM 磷酸钠，pH 7.00.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

0

10

20

30

40

50

60mAU

min

Agilent 130Å AdvanceBio SEC 蛋白质标准品

含 5 种精选蛋白质（卵清蛋白、肌红蛋白、抑肽酶、神经降压素、血管紧张素 II）的蛋白质混合

物，适用于校准 Agilent 130Å AdvanceBio 体积排阻色谱柱。该标准品可用于常规色谱柱校准，以

确保涉及蛋白质纯化与分析的多种应用可在理想的系统性能下进行。

Agilent 300Å AdvanceBio SEC 蛋白质标准品

含 5 种精选蛋白质（甲状腺球蛋白、γ-球蛋白、卵清蛋白、肌红蛋白、血管紧张素 II）的蛋白质

混合物，适用于校准 Agilent 300Å AdvanceBio 体积排阻色谱柱。该标准品可用于常规色谱柱校准，

以确保涉及蛋白质纯化与分析的多种应用可在理想的系统性能下进行。

IgG 分析的叠加色谱图：第 1、100、200、300 和 400 次进样

6

不改变样品完整性

在初次使用时，必须采用 BSA 将上一代蛋白质 SEC 色谱柱进

行活化，以阻断非特异性相互作用位点。而 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱所采用的全新键合技术则避免了这一问题，这得益

于其惰性表面能够减少非特异性相互作用并保持样品完整性。

2 4 6 8 10 12 14010203040

2 4 6 8 10 12 14010203040

第 1 次进样

第 1300 次进样

min

min

mAU

mAU

1300 次进样序列中 IgG 单体和二聚体的分离度图

2 4 6 8 10 12 14

-2-101234567

mAU

min

进样次数单体峰面积

1 50.5

2 49.6

3 50.6

4 50.0

5 50.2

未发现蛋白回收率问题 — 保持样品完整性

色谱柱： AdvanceBio SEC, 300Å, 7.8 × 300 mm流动相： 150 mM 磷酸钠，pH 7.0

0.1 mg/mL BSA 五次重复进样 1 µL，相当于 BSA 柱上进样量 0.1 µg。即使柱上

载样量仅为 0.1 µg，BSA 的峰面积仍能够保持始终恒定

色谱柱： AdvanceBio SEC, 300Å, 7.8 × 300 mm流动相： 150 mM 磷酸钠，pH 7.0样品： IgG

1.70 1.80 1.90 2.00 2.10 2.20 2.30 2.40 2.50 2.60

0 200 400 600 800 1000 1200 1400

分离

度因

子（

单体

/二聚

体）

Injection Number

IgG 样品的分析结果即使在 1300 次进样后仍未发生改变（左上图）。在整个色

谱柱使用寿命的工作范围内，IgG 单体与二聚体的分离度因子和定量结果也保

持不变

7

对低浓度聚集体也能实现定量分析

AdvanceBio SEC-3, 300Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱可实现分离度与基线的稳定性。

这有助于对 mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 样品中的二聚体和聚集体实现低浓度定量

分析。

更低的检测限 (LOD) 与定量限 (LOQ)

曲妥单抗和 ADC 的 LOD 和 LOQ 分别为 15 µg/mL 和 31 µg/mL，这可以体现出方法灵

敏度。

min5 6 7 8 9 10 11 12

mAU

0

0.5

1

1.5

2

2.5DAD1 B，Sig=280，LOQ

DAD1 B，Sig=280，空白 DAD1 B，Sig=280, LOD

LOD

LOQ

Blank

曲妥单抗

min5 6 7 8 9 10 11 12

mAU

0

0.5

1

1.5

2

2.5

DAD1 B，Sig=280，空白

DAD1 B，Sig=280，LOQDAD1 B，Sig=280，LOD

ADC

LOD

LOQ

Blank

曲妥单抗与 ADC 的 LOD 和 LOQ 与空白的叠加色谱图

min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0

20

40

60

80

100

120

140

160DAD1 B，Sig=280

7.125

8.107

min7 7.5 8 8.5 9

mAU

0

5

10

15

20

25

7.125

8.107

ADC 单体

ADC 聚集体

色谱柱： AdvanceBio SEC-3, 300Å, 7.8 × 300 mm

流动相： (PBS) 50 mM 磷酸钠，150 mM 氯化钠，pH 7.4

流速： 0.8 mL/min

仪器： Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱

样品：曲妥单抗和抗体药物偶联物 (T-DM1)

完整 T-DM1 (ADC) 的 SEC 谱图

8

AGILENT 1260 INFINITY BIO-SEC 多检测器套件 (MDS)

无限卓越的生物分子分析

数十年来，尺寸排阻色谱一直是生物大分

子分析的主力工具，尤其是对于蛋白质

多聚体的检测和定量。使用高级检测器

可以为关键参数提供更高的灵敏度，提供

更多的分析物信息，这一点对不断提升的

法规要求尤为重要。Agilent 1260 Infinity Bio-SEC MDS 是针对生物大分子分析的专

业解决方案。

高级检测器能准确测定分子量、生物分子

的大小和形状。样品流路中的无金属部

件的设计，以及无钢铁的溶剂输送，能够

September 30, 2015

Confidentiality Label

先进的检测技术

确保生物分子的完整性，最大限度减少不

必要的表面相互作用，保证数据质量的可

靠性。这套高性能系统结合直观易用的

软件，可以轻松而高重现性地获取这些综

合全面的数据。

• 准确的分子量 — 可测定实际分子量而

非相对分子量

• 灵敏的聚集体检测 — 发现更低含量的

聚集体

• 研究测定分子大小 — 测定生物分子的

水合半径

• 适用于所有实验 — 无论何种水平的实

验均可得到所需的结果

• 可重现性 — 提高了高级检测器的可重

现性

• 保持样品完整性 — 完全无金属的样品

接触表面

• 简便性 — 通过简单的用户界面得到高

级信息

AdvanceBio SEC 色谱柱的颗粒脱落量最少，因此基线噪音最低。

安捷伦：AdvanceBio SEC 300Å竞争产品 A竞争产品 B

9

AGILENT BIO SEC-3 HPLC 色谱柱

色谱峰鉴别的质谱兼容性

Bio SEC-3 填料技术使该填料在 MS 友好

型洗脱液中保持稳定，因此 Agilent Bio SEC-3 色谱柱可完全兼容质谱分析。稳

定的填料也确保了基线稳定性和低 MS 信号抑制。其他优势还包括：

• 与用于 SEC-MS 分析的变性有机/水性

流动相具有兼容性

• 在高盐和低盐条件下都具有出色的稳定性

• 具备从分析级到实验室制备级别的可拓

展性

Agilent Bio SEC-3 色谱柱与 Agilent SEC-5 色谱柱采用相同的填料技术，为需要更高

分离度的小生物分子提供了更高效的选择。

键合相孔径 (Å)填料粒径 (µm)

蛋白质分子量范围 (Da) pH 范围流速 (mL/min)

常规操作压力 (bar)

Bio SEC-3 100 3 100 - 100000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）；0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-3 150 3 500 - 150000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）；0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-3 300 3 5000 - 1250000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）；0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-3 色谱柱性能指标

Bio SEC-3 蛋白质校准曲线

色谱柱： Bio SEC-3 7.8 x 300 mm, 3 µm

流动相： 150 mM 磷酸钠， pH 7.0

流速： 1.0 mL/min

检测器： UV

保留体积

蛋白质分子量 / 道尔顿 300Å 150Å 100Å

甲状腺球蛋白 670000 6.34 5.50 5.63

γ-球蛋白 150000 8.03 6.24 5.74

BSA 67000 8.90 7.00 6.03卵清蛋白 45000 9.57 7.70 6.41肌红蛋白 17000 10.12 8.50 7.10核糖核酸酶 A 12700 10.40 8.80 7.46维生素 B12 1350 11.90 11.40 10.20

1000000

100000

10000

1000

1004 5 6 7 8 9 10 11 12 13

300Å

150Å

100Å

保留体积 (mL)

分子量

10

3x10

00.20.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 74030.8

74193.1

74353.1 73879.3

73000 73200 73400 73600 73800 74000 74200 74400 74600 74800 75000 75200 75400

G0F

G0

G1F

G2F

3x10

00.250.5

0.751

1.251.5

1.752

2.252.5

2.753

3.253.5

3.754

4.25 46877.1

45800 46000 46200 46400 46600 46800 47000 47200 47400 47600 47800 48000

4x10

00.10.20.30.40.50.60.70.80.9

11.11.2

23558.7

23744.2

22700 22800 22900 23000 23100 23200 23300 23400 23500 23600 23700 23800 23900 24000 24100 24200 24300 24400 24500 24600 24700

G0F/G0F

G0F/G1F

G1F/G1F

G1F/G2F G0/G0F

4x10

00.10.20.30.40.50.60.70.80.9

11.11.21.31.41.51.61.71.8 148225.8

148066.4 148387.2

147918.9

响应 vs. 解卷积质量 (amu)

146600 146800 147000 147200 147400 147600 147800 148000 148200 148400 148600 148800 149000 149200 149400 149600 149800

G0

G0F

G1F

G2F

N-乙酰葡糖胺甘露糖

半乳糖岩藻糖

响应 vs. 解卷积质量 (amu) 响应 vs. 解卷积质量 (amu)

响应 vs. 解卷积质量 (amu)

HSNH2

OH

O

质谱技术是一项测定峰结构和归属的出色

技术

SEC 与 MS 联用可提供 DAD 或 UV 无法

提供的附加信息。然而 SEC 常用流动相

中含有缓冲液和盐，这导致 SEC 无法兼

容 MS，通过改用变性流动相（例如乙腈、

甲酸和三氟乙酸的水溶液）可实现 SEC 色谱柱与 MS 的直接连接。

SEC-MS 分析（完整 mAb）

色谱柱： Bio SEC-3 7.8 x 300 mm, 3 µm

液相色谱： Agilent 1290 Infinity 生物惰性四元液相色谱

MS： Agilent 6540 Q-TOF

MS

UV (214 nm )

a

b

c d

a

b

c d

放大图

赫赛汀 6

x10

1.5 1.75

2 2.25 2.5

2.75 3

3.25 3.5

3.75

2x10

0 0.2 0.4 0.6 0.8

1 1.2

1 2 3 4 5 6

7 8 9 10 11 12 13 14 15

Responsive vs. Acquisition Time (min)流动相： 20% 乙腈、0.1% 甲酸、

0.1% TFA

流速： 1 mL/min

温度： 24 °C

峰 b

峰 c

峰 a

峰 d

峰 a 代表具有不同糖型的完整 mAb 单体峰。峰 b、c 和 d 均为片段

11

AGILENT BIO SEC-5 HPLC 色谱柱

为更大的生物分子提供卓越分离性能

对于分离含多个分子量的生物大分子和样

品来说，Agilent Bio SEC-5 色谱柱是理

想的选择。该柱使用 5 µm 硅胶颗粒填充，

涂覆有确保最高柱效和稳定性的专利中性

亲水聚合物层，有 6 种不同孔径，以便

在不同分子量范围时优化分离度。

• 良好的分离度：适用于大分子

• 高稳定性且高效：缘于专利的中性亲

水聚合物层

• 改善的峰容量和分离度：专为增加孔

容量而特别设计的填料

• 稳定的性能：卓越的重现性和色谱柱

寿命

• 卓越的稳定性：即使在高 pH、高盐和

低盐条件下，都具有卓越的稳定性

• 灵活的方法开发：与大多数水相缓冲

液兼容

• 用途广泛：孔径高达 2000Å，适用于

疫苗和高分子量生物分子的分离

键合相孔径 (Å)

填料粒径 (µm)

蛋白质分子量范围(Da) pH 范围流速 (mL/min)


Bio SEC-5 100 5 100 - 100000

2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）； 0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-5 150 5 500 - 150000

2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）； 0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-5 300 5 5000 - 1250000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）； 0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-5 500 5 15000 - 2000000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）； 0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-5 1000 5 50000 - 7500000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）； 0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-5 2000 5 >10000000 2 - 8.5 0.1 - 1.25（7.8 mm 内径）； 0.1 - 0.4（4.6 mm 内径）

103 (1500 psi)

Bio SEC-5 色谱柱性能指标

Bio SEC-5 蛋白质校准曲线

多种粒径尺寸可选，以便在不同分子量范围时优化分离度

保留体积

蛋白质分子量/ 道尔顿

1000Å 500Å 300Å 150Å 100Å

甲状腺球蛋白 670000 10.07 8.23 7.03 5.82 5.77γ-球蛋白 158000 10.88 9.80 8.57 6.55 5.79BSA 67000 11.13 10.44 9.44 7.29 6.00卵清蛋白 45000 11.28 10.83 9.89 7.90 6.40肌红蛋白 17000 11.44 11.28 10.42 8.66 7.05核糖核酸酶 A 12700 11.52 11.41 10.58 8.93 7.32维生素 B-12 1350 12.00 12.59 11.78 11.49 10.30尿嘧啶（总渗透标准品） 112 12.08 12.68 12.21 12.13 11.41

4100

1000

10000

100000

1000000

分子量

保留体积 (mL)5 6 7 8 9 10 11 12 13

1000Å500Å300Å150Å100Å

色谱柱： Bio SEC-5, 7.8 x 300 mm, 5 µm

流动相： 150 mM Na phosphate, pH 7.0

流速： 1.0 mL/min检测器 UV

12

AGILENT PROSEC 300S 色谱柱

单色谱柱球蛋白分析

ProSEC 300S 色谱柱是为球蛋白分析而设

计的单柱解决方案。孔径的选择和优化

扩展了线性分离范围，从而可以用这一根

色谱柱分离全部的球蛋白。其填料稳定

耐用，在使用过程中不会发生碎裂，从

而避免了颗粒渗漏，提供了极为稳定的基线。

• 性能稳定：机械性能稳定的硅胶填料，

在使用过程中不会流失

• 方法开发简单：扩展了线性分离范围，

无需进行孔径选择 — 可使用单柱分析

大多数球蛋白

• 多种选择助您优化分离：两种色谱柱

内径适用于多检测器 SEC

• 提高灵敏度：与光散射检测器一起使

用，可鉴定二聚体、三聚体和聚集体


蛋白质分子量范围 (Da) pH 范围流速 (mL/min)


ProSEC 300S

300 5 1500 - 800000 2 - 7.5 < 1.5 (7.5 mm 内径） < 0.5（4.6 mm 内径）

250 (3700 psi)

ProSEC 300S 色谱柱性能指标

ProSEC 300S 色谱柱分析球蛋白所得校准曲线

该校准曲线显示，保留时间和分子量的对数呈线性关系 — 表明仅发生了尺寸排阻分离

色谱柱： ProSEC 300S 7.5 x 300 mm, 5 µm

流动相： 50 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.8) 含 0.3 M NaCl

流速： 1.0 mL/min检测器： UV 280 nm样品：蛋白质样品

5 7 9 10保留时间 (min)

133

3.5

4

4.5

5

5.5

6

Log

M

分子量/道尔顿蛋白质

670000 甲状腺球蛋白

155000 γ-球蛋白

66430 牛血清白蛋白

44287 卵清蛋白

29000 碳酸酐酶

16700 肌球蛋白

12384 细胞色素 C

1423 杆菌肽

蛋白质的分子量

13

0

12

3 4

5 6

1

2

3 4

56

5 10 15

0 5 10 15

0

12

3 4

5 6

1

2

3 4

56

5 10 15

0 5 10 15

AGILENT ZORBAX GF-250 和 GF-450 色谱柱

用于需要采用 USP 指定产品 L35 的 SEC 方法

ZORBAX GF-250 和 ZORBAX GF-450 体积排阻（凝胶过滤）色谱柱采用亲水性

二醇键合固定相，实现了高蛋白回收率（一般 > 90%），加上独特的经过氧化锆改

性的硅胶，扩展到了更宽的 pH 工作范围。

• 全程分析：选择半制备到制备柱规格，

可在高达 3 mL/min 流速下使用

• 高回收率：亲水性二醇键合固定相，

通常回收率 > 90%

• 耐用性：窄孔径和窄粒径分布的精确

尺寸多孔硅胶微球

• 与多种有机改性剂兼容：与多种有机

改性剂 (< 25%) 和变性剂兼容，最大

限度减少了非特异性相互作用

• 用途广泛：广泛的可使用 pH 范围：3 - 8

此蛋白质分离结果显示了 GF-450 与 GF-250 制备柱之间的互补关系。GF-450 色谱柱能可靠地分离高分子量生物分

子，这些分子被排除在 GF-250 色谱柱（小孔径）的线性分离范围之外


蛋白质分子量范围

(Da) pH 范围流速 (mL/min)


ZORBAX GF-250 150 4 4000 - 400000 3.0 - 8.0 < 3.0 350 (5104 psi)

ZORBAX GF-450 300 6 10000 - 900000 3.0 - 8.0 < 3.0 350 (5104 psi)

ZORBAX GF-250 和 ZORBAX GF-450 色谱柱性能指标

半制备柱上的蛋白质分离

色谱柱： ZORBAX GF-250, 9.4 x 250 mm, 4 µm

色谱柱： Agilent ZORBAX GF-450, 9.4 x 250 mm, 6 µm

流动相： 0.2 M Na2HPO4，pH 7.0 流速： 5.0 mL/min检测器： UV 280 nm样品： 200 µL

1. 甲状腺球蛋白，5.43 min2. BSA 二聚体，6.19 min3. BSA 单体，6.93 min4. 核糖核酸酶 A，8.74 min5. 聚-DL-丙氨酸 (1 - 5 kDa)，9.90 min6. 尿嘧啶，12.13 min

ZORBAX GF-250

ZORBAX GF-450

14


单根 ADVANCE BIO SEC 色谱柱可分析多种样本

用于分析多种生物治疗药物的 AdvanceBio SEC 单色谱柱及方法

生物治疗性 mAb、创新药物、生物仿制

药和 ADC 等多种样品类型均采用相同的

水性流动相。

色谱柱： AdvanceBio SEC-3, 300Å, 7.8 x 300 mm

流动相： (PBS) 50 mM 磷酸钠， 150 mM 氯化钠，pH 7.4

流速： 0.8 ml/min Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱

样品：利妥昔单抗创新药物、利妥昔单抗生物仿

制药、西妥昔单抗创新药物、赫赛汀创新

药物、ADC min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0200400600800

1000120014001600

DAD1 A，Sig=220，利妥昔单抗创新药物

min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0200400600800

1000120014001600

DAD1 A，Sig=220，利妥昔单抗生物仿制药

min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0100200300400500600700 DAD1 A，Sig=220，

西妥昔单抗创新药物

min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0250500750

1000125015001750 DAD1 A，Sig=220，

赫赛汀创新药物

A B

C D

完整生物治疗性 mAb 的 SEC 谱图，A. 利妥昔单抗创新药物、B. 利妥昔单抗生物仿制药、C. 西妥昔

单抗创新药物、D. 赫赛汀创新药物

天然 ADC（对照，红色）与 2 mg/mL 经 pH/加热处理的 ADC 的 AdvanceBio SEC 叠加色谱图

min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

DAD1 A，Sig=220，经加热/pH 处理的 ADC

6.654 7.1

41

8.067

11.58

6 12.73

7

DAD1 A，Sig=220，完整 ADC

8.106

聚集态 ADC

完整 ADC

降解的 ADC

保留时间峰面积

样品平均值 (min) RSD 平均值 (mAU/min) RSD利妥昔单抗创新药物 8.28 0.04 99.33 1.21

利妥昔单抗生物仿制药 8.29 0 100 0

西妥昔单抗创新药物 7.86 0 99.60 0.96

赫赛汀创新药物 8.034 0 100 0

ADC 8.106 0.005 98.91 0.33

保留时间和峰面积精度 (n = 6)

15


使用多种流动相实现高效体积分离

在不同盐浓度条件下均具有耐用的

性能和分离度

Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱在不同盐

浓度条件下经过长时间使用后仍具有耐用

性能。

体积排阻色谱的分离机制必须基于体积差

异进行分离，不会与固定相之间发生次级

相互作用。AdvanceBio SEC 色谱柱采用

创新型填料技术，无需利用高盐浓度实现

体积分离，因此可降低非特异性离子的相

互作用。 100 mM 磷酸盐，50 mM NaCl80 mM 磷酸盐，70 mM NaCl60 mM 磷酸盐，90 mM NaCl40 mM 磷酸盐，110 mM NaCl20 mM 磷酸盐，130mM NaCl

100 mM 磷酸盐，50 mM NaCl80 mM 磷酸盐，70 mM NaCl60 mM 磷酸盐，90 mM NaCl40 mM 磷酸盐，110 mM NaCl20 mM 磷酸盐，130mM NaCl

pH 7.5

pH 6.0

200

100

0

2 4 6 8 10

200

100

0

2 4 6 8 10



pH 7.5

pH 6.0

200

100

0

2 4 6 8 10

200

100

0

2 4 6 8 10

上图中峰形一致，且未产生由非特异性相互作用引起的特征性峰变形

无需盐：SEC 的保留与溶液中分子的体积有关。洗脱时间发生轻微变化的原因可能是 pH 和盐浓度影响了

蛋白质的流体动力学半径

色谱柱： AdvanceBio SEC-3, 300Å, 7.8 x 300 mm BioRad 凝胶过滤标准品 #1511901

16

磷酸盐缓冲液浓度和 pH 对单体和二聚体定量结果的影响

节省缓冲液配制的时间和成本

F+

NaCl

G+

NaCl

H+

NaCl

I+

NaCl

J+

NaCl

F G H I J

手动配制缓冲液

自动在线动态混合缓冲液

安捷伦缓冲液顾问软件帮助您自动配制缓冲液。仅需 4 种储备液的动态混合，无

需配制并滴定多种缓冲液。

提高性能：通过自动化缓冲液配制实现快速方法开发

节省时间：四元混合可轻松混合不同 pH 或盐浓度的多种缓冲液，加快缓冲液配制

降低经费：在分析样品之前对条件进行评估以达到最佳洗脱，从而减少样品浪费

并缩短分析时间


安捷伦缓冲液顾问软件助您在极短时间内实现方法优化

监管机构需要在实验设计中建立最佳分析

方法并要求方法具有稳定性和可重现性。

手动完成上述工作需要配制大量流动相，

且需要在流动相每次发生变化时平衡液相

色谱系统，这一环节非常耗时。

安捷伦缓冲液顾问软件仅需四种组分（两

种缓冲液、水和盐溶液）即可在线完成缓

冲液配制，从而简化方法，完成方法优化。

从右图的分析中可得出采用 20 种流动相（pH 6.0 - 7.5）在 20 - 100 mM 的缓冲液

浓度范围内得到的 BSA 单体和二聚体的

稳定性研究结果。

80%

82%

84%

86%

88%

90%

0 20 40 60 80 100 120磷酸盐 mM

磷酸盐 mM

单体%

pH 6.0

pH 6.5

pH 7.0

pH 7.5

pH 6.0

pH 6.5

pH 7.0

pH 7.5

二聚体%

0 20 40 60 80 100 12010%

11%

12%

13%

14%

15%

80%

82%

84%

86%

88%

90%

0 20 40 60 80 100 120磷酸盐 mM

磷酸盐 mM

单体%

pH 6.0

pH 6.5

pH 7.0

pH 7.5

pH 6.0

pH 6.5

pH 7.0

pH 7.5

二聚体%

0 20 40 60 80 100 12010%

11%

12%

13%

14%

15%

色谱柱： AdvanceBio SEC, 300Å, 7.8 x 300 mm

样品： BSA

17

批次间重现性

可靠的方法和色谱柱对于需要及时给出数

据结果的法规监管实验室来说非常必要。

AdvanceBio SEC 色谱柱在使用寿命内能

够始终保持优异的性能和重现性。详见 5 - 6 页的色谱柱间与批次间数据。

仪器间重现性

候选生物治疗药物从开发到批准的过程

中需要向相同或不同部门/地点/公司的其

他液相色谱仪器进行方法转移。2.7 µm 粒径的 AdvanceBio SEC 色谱柱能够在低

于 200 bar 的压力条件下实现分离。使用 HPLC 系统即可完成分析，开发方法时无

需考虑仪器可用性。

2 4 6 8 10 12 140

1020304050607080

2 4 6 8 10 12 140

1020304050607080

mAU

mAU min

min

213

4

5

213

4

5

使用 AdvanceBio SEC 300Å 4.6 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱得到两个不同批次介质中 γ-球蛋白 (IgG) 的分析结

果。峰 3 和峰 4 的分离度、二聚体和单体量以及峰面积百分比表明该色谱柱具有出色的批次间重现性

Rs（单体 / 二聚体）1.94

Rs（单体 / 二聚体）1.98

min0 2 4 6 8 10 12 14

AU

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

Waters Alliance HPLC 系统四次连续进样所得叠加色谱图

利用 AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱在 Waters Alliance HPLC 系统中得到的多克隆 IgG 四次连

续进样的叠加色谱图

Alliance HPLC 系统

峰号峰面积 % 峰面积 %1 2.6 2.92 2.0 2.13 12.8 12.94 78.9 78.45 3.7 3.7

进样次数峰面积 % #1

峰面积 % #2

峰面积 % #3

峰面积 % #4

1 1.7 1.8 1.7 1.7

2 10.6 10.5 10.3 10.2

3 86.5 86.1 86.3 86.6

4 1.3 1.6 1.7 1.6


依靠 ADVANCEBIO SEC 消除不确定性

18

配备 Agilent 1260 Infinity DAD (G1315D) 和生物惰性流通池的 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统 (1200 bar) AdvanceBio SEC 4.6 × 300 mm 色谱柱，流速为 0.35 mL/min

min2 4 6 8 10 12 14

归一化响应值

0

25

50

75

100

125

150

175

适用于更高灵敏度的 UHPLC 方法

UHPLC 仪器具有极低扩散性和高精度，是前期开发的首选液相

色谱系统。在需要较高灵敏度或较小样品量的应用中，应采

用内径较小的色谱柱。对于 SEC 分析，应选用 4.6 mm 的内径。

这类色谱柱的流速通常为 0.3 - 0.7 mL/min。

Agilent 1260 Infinity 四元生物惰性液相色谱系统 (600 bar) AdvanceBio SEC 4.6 × 300 mm 色谱柱，流速为 0.35 mL/min

min2 4 6 8 10 12 14

归一化响应值

0

25

50

75

100

125

150

175

200


多种色谱柱规格 — 实现同样卓越性能

为比较色谱柱在不同仪器中的性能，分析采用的是 BioRad 凝胶过滤标

准品 #1511901（蓝色峰）和市售多克隆 IgG。数据由不同实验室采用

不同色谱柱和大量不同测试样品分析得出。

19

min0 2 4 6 8 10 12 14

Norm.

0

25

50

75

100

125

150

175

200

HPLC 稳定性方法

为开发出能够满足 QC 方法所需准确度和重现性的稳定方法，HPLC 仪器通常是首选系

统。在稳定的 HPLC 方法中，HPLC 系统通常采用内径较大的 7.8 mm 色谱柱。在这类

液相色谱系统中，300 mm 色谱柱实现最佳分离的理想流速为 1.0 mL/min，而 150 mm 色谱柱实现最大样品通量的理想流速则为 2 mL/min。

Agilent 1100 HPLC 仪器 (400 bar) AdvanceBio SEC 7.8 × 300 mm 色谱柱，流速为 1.0 mL/min

如使用 AdvanceBio SEC 色谱柱，在候选药物从发现到开发再到投入生产，无需更换色谱

柱或验证新方法，只需改变 AdvanceBio SEC 色谱柱规格即可。

采用 2.7 µm 最佳粒径的 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱在低于 200 bar 的典型压力下具有

出色的性能。

用户可在仪器和实验室间实现方法转移。

UHPLC 数据由欧洲的研发实验室得出，HPLC 数据由美国的技术支持实验室提供，均由不

同科学家采用不同样品和色谱柱得出。

20

PEG GCSF 在 AdvanceBio SEC 130Å，7.8 × 300 mm，2.7 µm 色谱柱上得到的体积排阻色谱图。A. 完整 PEG GCSF，放大视图中显示

了聚集体。B. 完整 PEG GCSF 与显示聚集体的加热处理样品色谱图的叠加

聚乙二醇化是将聚乙二醇 (PEG) 聚合物与

蛋白质或药物分子进行共价结合。分子

聚乙二醇化的优势包括提高生物利用度、

延长血清半衰期并降低免疫原性。

min2 4 6 8

mAU

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600DAD1 A，Sig=214

4.132

4.739

5.125

min4 5 6

mAU

0

10

20

30

40

4.132

4.739

5.125

min2 4 6 8

mAU

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600DAD1 A，Sig=214，经加热处理的 PEG GCSF

4.501

5.117

DAD1 A，Sig=214，完整 PEG GCSF

PEG GCSF 单体PEG GCSF 聚集体

PEG GCSF 单体

A B

色谱柱 AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 x 300 mm 仪器： Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统

流动相 6.8 mL 85% v/v 正磷酸（基于各论）：与 800 倍体积水的

混合溶液，用 10 N 氢氧化钠将 pH 调至 2.5，再加入 50 倍体积乙醇和 150 倍体积水。

聚乙二醇化蛋白质分析


SEC 各论方法

流速： 1 mL/min温度： 25 °C温控自动进样器： 4 °C检测器: 214 nm（1260 DAD VL+，G5615-60022 生物惰性流通池）

进样量： 3 µL

体积排阻色谱法 (SEC) 是鉴定聚乙二醇化

蛋白质中高分子量杂质的首选方法。下文

为根据各论草案在 Agilent AdvanceBio SEC 130 Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱中采

用的 SEC 方法对聚乙二醇化非格司亭 (PEG GCSF) 进行的鉴定。

结果确证了该方法的单体峰面积百分比以

及保留时间标准偏差均符合各论中设定的

可接受标准。此外，安捷伦 SEC 色谱柱

还对强制应激研究中产生的 PEG GCSF 聚集体进行了成功分离、检测与定量分析。

21

min5 10 15 20 25

0

100

200

300

400

DAD1 A，Sig=276 16.29

0

24.22

1

26.79

7

13.56

9

27.89

5

mAU

min10 12 14 16 18 20 22

0.5

1

1.5

2

2.5

13.56

9

16.29

0

mAU单体

HMW

Rs= 3.84

胰岛素是一种用于控制血糖稳态的小分子多肽激素。生物制药公司利用基因工程技术

开发出了各种长效胰岛素类似物。

以下数据通过采用各论草案中的改良 SEC 方法对胰岛素类似物及其聚集体进行分析后

得出。孔径更小的 Agilent AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色谱柱可实现

单体和聚集体的出色分离。

胰岛素分析

色谱柱： AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 x 300 mm仪器： Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统

流动相 L-精氨酸 (1.0 g/L)/乙酸 (99%)/乙腈；65/15/20 (v/v/v)流速： 0.4 mL/min温度：室温

温控自动进样器： 4 °C检测器: 276 nm（1260 DAD VL+，G5615-60022 生物惰性流通池）

进样量： 10 µL

B 链30 个氨基酸

A 链21 个氨基酸

22


监测蛋白质稳定性

AdvanceBio SEC 色谱柱能够分离聚集体以

及降解的曲妥单抗和 ADC。在这两种情

况下，样品由于经过处理而发生了更大程

度的聚集。

mAb 和疏水性较强的 ADC 均使用同一种

水性流动相。

天然曲妥单抗（红色）与 2 mg/mL 经 pH/加热处理的曲妥单抗的叠加色谱图

天然 ADC（红色）与 2 mg/mL 经 pH/加热处理的 ADC 的叠加色谱图

色谱柱： AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 x 300 mm

流动相： 50 mM 磷酸钠， 150 mM 氯化钠， pH 7.4

流速： 0.8 mL/min系统： Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液

相色谱

样品：曲妥单抗和抗体药物偶联物 (T-DM1)经处理样品的制备方法是，先将 pH 调节至 1.0、10 和 6.0，然后在 60 ºC 下温育 60 min。

min2 4 6 8 10 12 14

归一化响应值

0

250

500

750

1000

1250

1500

1750

6.610

7.033

8.049

11.58

4

12.74

0

14.46

913.11

4

DAD1 A，Sig=220，完整曲妥单抗

DAD1 A，Sig=220，经加热/pH 处理的曲妥单抗

片段

聚集体

完整曲妥单抗

min2 4 6 8 10 12 14

mAU

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

DAD1 A，Sig=220，经加热/pH 处理的 ADC

6.654 7.1

41

8.067

11.58

6 12.73

7

DAD1 A，Sig=220，完整 ADC

8.106

聚集体 ADC

完整 ADC

降解的 ADC

曲妥单抗

ADC

23


提高生物纯化和半制备工作的准确性

Agilent BioHPLC 色谱柱有各种规格可供选

择，支持可靠的生物纯化和半制备应用。

与 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱

系统和 1260 Infinity 生物惰性馏分收集器

联合使用，可以提高基于峰组分收集的准

确性。

该凝胶过滤标准品含甲状腺球蛋白、γ-球蛋白、卵清蛋白、肌红蛋白和维生素 B12，用尺寸排阻色谱进行分

离后，我们将组分自动收集到深孔板确定的孔中（采用基于峰的组分触发模式）。然后用反相 C8 柱对各组

分进行再分析

min0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

mAU

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

γ-球

蛋白

- 15

8000

Da

卵清

蛋白

- 44

000

Da

甲状

腺球

蛋白

- 67

0000

Da

肌红

蛋白

- 17

000

Da

维生

素 B

12 -

1350

Da

各组分的再分析确认了精准的组分分离（采用基于峰的组分触发模式）。柱温箱中使用的 2 位/6 通阀可

以自动进行柱切换

min2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

4080

120

min2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

4080

120

min2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

200400600

min2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

4080

120

1200

SEC

C8

1000800600400200

0

5 7.5 10 12.5 15 min

mAU P1-G-1

P1-G-2

P1-G-3

P1-G-4

P1-G-5

P1-G-6

P1-G-7

SEC 和组分收集

色谱柱： Bio SEC-3, 300Å, 7.8 × 300 mm, 3 µm

流动相：缓冲液 A：50 mM 磷酸钠缓冲液 + 150 M NaCl，pH 6.8

流速： 1 mL/min梯度: 等度

进样量： 30 µL温控自动进样器和组分收集器： 8 °CTCC 温度：室温

DAD： 280 nm/4 nm，参比波长：关闭

峰宽： > 0.05 min（1.0 秒响应时间） (5 Hz)

再分析 — 反相 C8色谱柱： ZORBAX 300SB-C8,

4.6 x 50 mm, 5 µm 流动相s: 缓冲液 B：乙腈 + 0.09% TFA

缓冲液 C：H2Odd + 0.1% TFA流速： 1 mL/min梯度: 0 min 5% B，95% C

10 min 95% B，5% C 运行时间：10 min 停止时间：10 min

进样量： 100、50 和 10 µL温控自动进样器和组分收集器： 8 °CTCC 温度： 70 °CDAD： 280 nm/4 nm

参比波长：关闭

峰宽： > 0.05 min（1.0 秒响应时间） (5 Hz)

24


使用光散射检测器提高灵敏度

将光散射检测器与浓度检测器（如紫外或

示差折光检测器）相结合，可以提供绝对

分子量数据。与浓度检测器（如紫外和

视差折光）相比，光散射检测器为聚集体

的检测提供了更高灵敏度。

在此我们显示了单体、二聚体和三聚体三

个色谱图区域，以及软件得到的分子量信

息。正如预期的那样，光散射检测器信

号在高分子量物质的响应上明显增强，改

善了聚集体定量的检测限和准确性。

在进行大分子蛋白质更高分子量聚集体研

究时，需要使用孔径更大的色谱柱以尽可

能掌握更多信息。

本研究采用 Agilent Bio SEC-5 500Å 色谱

柱在更高分子量聚集体范围内实现分离。

通过光散射提高检测限

色谱柱： Bio SEC-5, 500Å, 7.8 × 300 mm 不锈钢色谱柱

流动相： 50 mM 磷酸钠，250 mM 氯化钠，pH 7.0进样量： 50 µL流速： 1.0 mL/min温度： 30 °C样品：牛 γ-球蛋白

样品浓度： 1.0、2.0 和 4.0 mg/mL检测器： UV 280 nm；LS 15° 和 90°；RI仪器：配备 Agilent 1260 Infinity GPC/SEC 多检测器套件的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元泵液相

色谱系统

牛 IgG 单体（区域 3）、二聚体（区域 2）和三聚体（区域 1）的检测信号。分析时间为 20 min

320300280260240220200180160140120100806040200

-20-40 1e0

1e1

1e2

1e3

1e4

1e5

时间 (min)

检测

器响

应 (m

V)

分子

量对

数 (g/m

ol)

20181614121086420

峰 1. 分子量 460281（三聚体）

峰 2. 分子量 302178（二聚体）

峰 3. 分子量 153404（单体）

1 2 3

橙色 = UV 280 nm红色 = 光散射 90° 蓝色 = 示差折光

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从不含钢、铁等金属的溶剂输送到无金属的各种样品流路组件，Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统建立了新的性能和可靠性标准

这款稳定的系统可以耐受蛋白质和生物治疗药物常用的苛刻溶剂条件，还能最大限度

减少与非特异性结合有关的问题。与安捷伦离子交换 BioHPLC 色谱柱配套使用，可以

使您获得最高分离度并节省时间。

100% 生物惰性样品流路

连通自动进样器、柱温箱和检测器的所有毛细管和接头均不含金属，因此生物分子

只与陶瓷或 PEEK 接触。通过最大限度减少蛋白质和多肽与金属表面的次级相互作用，

能够帮助您避免峰拖尾、低回收率和柱寿命降低等问题。

真正的 UHPLC 性能

性能范围高达 600 bar，可以耐受采用更小粒径色谱柱先进技术所需要的更高压力。

完美适用于粒径低至 1.7 µm 填料的 SEC 和 IEX 色谱柱。

安捷伦缓冲液顾问软件能够简便快捷地创建盐梯度和 pH 梯度。

如需了解 AGILENT 1260 INFINITY 生物惰性液相色谱系统的更多信息，请访问 www.agilent.com/chem/1200BioLC

新型毛细管和接头技术可实现安全稳定的操作 — 从始至终

借助 1260 Infinity 生物惰性液相色谱，安捷伦推出的新型毛细管和接头技术有助于实现

无金属生物惰性和高压操作的独特结合。三种不同类型的毛细管如下所述：

• 用于溶剂输送管线的高耐腐蚀钛毛细管

• 自动进样器和柱温箱中金属包覆的 PEEK 毛细管

• 用于分离柱下游系统低压部分的 PEEK 毛细管

金属包覆的 PEEK 毛细管具有独特的连接系统，可在每个连接处实现完全的生物惰性。

机械联锁 PEEK 管端高度耐受横向和旋转张力，拧紧接头时毛细管不会存在扭矩。

如需了解更多信息，请访问 www.agilent.com/chem/LCcapillaries


AGILENT 1260 INFINITY 生物惰性四元液相色谱：实现无限

卓越的生物分子分析

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用于蛋白质鉴定和杂质分析的安捷伦仪器

全新 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪：新一代 UHPLC，从三方面提升分析效率

► 全力提高分析效率：无可比拟的分离和检测性能，可提供最高质量的分析

数据

► 全力提高仪器效率：最高的样品容量、最短的进样周期以及前所未有的可

用性

► 全力提高实验室效率：可与实验室现有架构无缝整合，从传统设备实现平

稳的方法转移

1290 Infinity II 液相色谱仪可选配高速泵或全能泵

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Agilent 1260 Infinity 二元液相色谱系统：将分析型 HPLC 的标准提升至 600 bar、80 Hz 高速检测器和最高 10 倍的灵敏度

100% HPLC 兼容性、UHPLC 功能，以及：

► 耐腐蚀的生物惰性流路

► 最宽的 pH 范围

► 可用于生物分析与生物纯化

适用于所有标准 UHPLC 应用

Agilent 1260 Infinity 多检测器 Bio-SEC 系统：用于蛋白质类生物治疗药物可重现高级分析的专业解决方案

生化学家可将体积排阻色谱 (SEC) 与高级光散射检测器联用以测定准确分子量

和溶液中的分子体积，并提高生物大分子分析中聚集体检测的灵敏度。

► 可重现而准确的分子量和分子体积信息

► 利用市场领先的低死体积光散射检测技术实现聚集体的高灵敏度测定

► 通过高级检测技术实现分子体积与分子量的准确性

适用于对生物大分子分析具有较高灵敏度要求的应用

如需了解这些先进系统的详细信息，请访问 www.agilent.com/chem/BioHPLC

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订购信息

Agilent AdvanceBio SEC HPLC 色谱柱单克隆抗体、蛋白质和多肽 SEC 分析的最新技术

描述 130Å 300Å

分析柱

4.6 x 300 mm, 2.7 µm PL1580-5350 PL1580-5301

4.6 x 150 mm, 2.7 µm PL1580-3350 PL1580-3301

7.8 x 300 mm, 2.7 µm PL1180-5350 PL1180-5301

7.8 x 150 mm, 2.7 µm PL1180-3350 PL1180-3301

分析型保护柱

4.6 x 50 mm, 2.7 µm PL1580-1350 PL1580-1301

7.8 x 50 mm, 2.7 µm PL1180-1350 PL1180-1301

Agilent AdvanceBio SEC 蛋白质标准品

描述规格部件号

130Å 1.5 mL 样品瓶 5190-9416

300Å 1.5 mL 样品瓶 5190-9417

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Agilent Bio SEC-5 HPLC 色谱柱，用于含多个分子量的生物大分子与样品

描述 100Å 150Å 300Å 500Å 1000Å 2000Å

分析柱

4.6 x 300 mm, 5 µm 5190-2518 5190-2523 5190-2528 5190-2533 5190-2538 5190-2543

4.6 x 150 mm, 5 µm 5190-2519 5190-2524 5190-2529 5190-2534 5190-2539 5190-2544

7.8 x 300 mm, 5 µm 5190-2516 5190-2521 5190-2526 5190-2531 5190-2536 5190-2541

7.8 x 150 mm, 5 µm 5190-2517 5190-2522 5190-2527 5190-2532 5190-2537 5190-2542

分析型保护柱

4.6 x 50 mm, 5 µm 5190-6857 5190-6858 5190-6859 5190-6860 5190-6861 5190-6862

7.8 x 50 mm, 5 µm 5190-2520 5190-2525 5190-2530 5190-2535 5190-2540 5190-2545

前处理柱

21.2 x 300 mm, 5 µm 5190-6863 5190-6864 5190-6865 5190-6866 5190-6867 5190-6868

前处理保护柱

21.2 x 50 mm, 5 µm 5190-6869 5190-6870 5190-6871 5190-6872 5190-6873 5190-6874

Agilent Bio SEC-3 HPLC 色谱柱，用于通过质谱检测的蛋白质分析

描述 100Å 150Å 300Å

分析柱

4.6 x 300 mm, 3 µm 5190-2503 5190-2508 5190-2513

4.6 x 150 mm, 3 µm 5190-2504 5190-2509 5190-2514

7.8 x 300 mm, 3 µm 5190-2501 5190-2506 5190-2511

7.8 x 150 mm, 3 µm 5190-2502 5190-2507 5190-2512

分析型保护柱

4.6 x 50 mm, 3 µm 5190-6846 5190-6847 5190-6848

7.8 x 50 mm, 3 µm 5190-2505 5190-2510 5190-2515

前处理柱

21.2 x 300 mm, 3 µm 5190-6850 5190-6851 5190-6852

前处理保护柱

21.2 x 50 mm, 3 µm 5190-6854 5190-6855 5190-6856

30

Agilent ProSEC 300S 色谱柱，用于球蛋白分

析 (USP L33)

描述 100Å

分析柱

4.6 x 250 mm, 5 µm PL1547-5501

7.5 x 300 mm, 5 µm PL1147-6501

7.5 x 600 mm, 5 µm PL1147-8501

分析型保护柱

4.6 x 50 mm, 5 µm PL1547-1501

7.5 x 50 mm, 5 µm PL1147-1501

ZORBAX GF-250 和 GF-450 凝胶过滤色谱柱，用于需要使用 USP 指定产品 L35 的分析方案

描述规格部件号

分析柱

GF-250, 150Å 4.6 x 250 mm, 4 µm 884973-701

GF-250, 150Å 9.4 x 250 mm, 4 µm 884973-901

GF-450, 300Å 9.4 x 250 mm, 6 µm 884973-902

分析保护柱及其套件

ZORBAX 二醇保护卡套柱，4/包 4.6 x 12.5 mm, 6 µm 820950-911

ZORBAX 二醇保护卡套柱，2/包 9.4 x 15 mm, 6 µm 820675-111

适用于 4.6 mm 内径色谱柱的保护柱卡套 820999-901

适用于 9.4 mm 内径色谱柱的保护柱卡套 840140-901

PrepHT 色谱柱

PrepHT GF-250, 150Å 21.2 x 250 mm, 6 µm 877974-901

PrepHT GF-450, 300Å 21.2 x 250 mm, 6 µm 877974-910

PrepHT 保护柱及其套件

ZORBAX 二醇 PrepHT 保护卡套柱，2/包 17 x 7.5 mm, 5 µm 820212-911

适用于 21.2 mm 内径色谱柱的保护柱芯卡套 820444-901

PrepHT 柱端接头，2/包 820400-901

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安捷伦的创新传统

安捷伦通过不断创新丰富 AdanceBio 色谱柱系列产品以满足蛋白质和 mAb 表征的需求。Agilent AdvanceBio 色谱柱旨在提升准确

度和速度，适用于通过反相色谱表征聚集体 SEC、电荷异构体 IEX、完整质量数、一级结构和杂质谱图，通过亲水相互作用色谱分

析裂解糖链，以及通过亲和色谱进行 mAb 滴度测定。

Agilent BioHPLC 色谱柱

亲和

效价测定和纯化

Bio-Monolith Protein A AdvanceBio RP-mAb AdvanceBio 糖谱分析色谱柱 AdvanceBio SEC, 2.7 µm

Bio-Monolith Protein G AdvanceBio 肽谱分析色谱柱 ZORBAX RRHD 300Å, 1.8 µm Bio SEC-3

ZORBAX RRHD 300Å, 1.8 µm Bio SEC-5

Poroshell 300 ProSEC 300S

PLRP-S ZORBAX GF-450 ZORBAX GF-250

ZORBAX 300SB

ZORBAX 氨基酸分析色谱柱

反相

蛋白质鉴定和杂质分析

HILIC糖基化分析

体积排阻

聚集体分析

Bio-Monolith （QA、DEAE、SO3）

Bio mAb

Bio IEX （SAX、SCX、WAX、WCX）

PL-SAX

PL-SCX

离子交换

电荷异构体分析

解决难题以成功实现蛋白质和 mAb 表征。请访问 www.agilent.com/chem/BioHPLC

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安捷伦产品仅用于研究。不可用作诊断方法。

本文中的信息、说明和性能指标如有变更，恕不另行通知。

© 安捷伦科技（中国）有限公司，2015 2015 年 12 月 16 日中国出版 5991-2898CHCN

如需了解有关 Agilent BioHPLC SEC 色谱柱的更多信息，请访问 www.agilent.com/chem/BioHPLC

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快速可靠地分离蛋白质聚集体和降解产物 · 2017. 10. 10. ·...

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