Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan...
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![Page 1: Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département.](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022062312/551d9da1497959293b8cfdd4/html5/thumbnails/1.jpg)
Dyskératose congénitale et défauts d’assemblage de la télomérase chez l’humain.
Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed,Département des sciences biologiques, Université du Québec à Montréal.
![Page 2: Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département.](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022062312/551d9da1497959293b8cfdd4/html5/thumbnails/2.jpg)
Pathologie héréditaire rare (1 / 1 000 000)
Affecte les tissus à renouvellement rapideCaractérisée par:
Hyperpigmentation de la peau (89%)
Dysplasie des ongles (88%)
Aplasie de la moelle osseuse (86%)
Leucoplasies des muqueuses (78%)
Pathologies pulmonaires (20%)
Perte prématurée des cheveux (16%)
Tendance à la malignité (10%)
Ostéoporose (10%)
Aplasie de la moelle osseuse (86%)
Syndrome myelodysplasique, cancers épithéliaux et leucémie
Fibrose pulmonaire
Dyskératose congénitale
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Dyskératose congénitale
Petite stature /retard de développement
microcéphalie
épiphora
Hypoplasie cérébellaire
Nécrose avasculaire des hanches et des épaules
Autres phénotypes possibles:
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Dyskératose congénitale
Forme autosomique dominante de la DC; mutations dans hTR, le RNA de la télomérase
Ont tous en commun … télomères excessivement courts
Raccourcissement des télomères transmis à chaque génération
Sagit donc d’un problème de la biologie des télomères
corrélation entre la longueur des télomères et l’apparition des phénotypes
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DNA télomérique
Problème de réplication des extrémités chromosomiques
fourche de réplication
[TTAGGG]n
[AATCCC]n
2-30 kb50-300 b
3’5’
[TTAGGG]n
[AATCCC]n
T-loop
D-loop5’
3’
3’5’
synthèse dubrin avancé
3’5’
Synthèse dubrin retardé
3’5’
3’5’
3’5’
Extension et dégradationdes amorces
Télomères et problème de réplication
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CAAUCCCAAUC
Transcriptase inverse
RNA (hTR)
3’
5’
CAAUCCCAAUC
Transcriptase inverse
RNA (hTR)
3’
5’
Extension des télomères par la télomérase
GGTTAGGGTTAGGGTTAG GGTTAGn
50-300 b
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Structure secondaire du RNA de la télomérase
GGGA UGCAC-3’ CCCU GCGUG-5’
CG
UA
U U
UA
CG
G
G
U
U
UA
AA U
C
C C
C
GGGG UGCAC-3’ GCGUG-5’
U G
G G
G
CR7 WT
CR7 C408G
408
408
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(2)dyskérine
NOP10
NHP2
Nucléole,Corps de Cajal
cytoplasme noyau
site de transcription des RNA H/ACA par la
NAF1
(1)
GAR1
Biogénèse des RNA H/ACA
GAR1
NAF1
(3)
polII
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snoRNA U17/E1 scaRNA hTR
rRNA rRNA snRNA télomères
biogénèse des ribosomes synthèse protéique
maintenance des télomères
stabilité chromosomique
biogénèse des snRNAépissage des pré-mRNA
ψ ψ TTAGGG
Adapté de Meier UT., Chromosoma 2005
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But hypotheses
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MéthodologieTranscription/traductionin vitro (35S-méthionine)Transcription in vitro (32P-CTP)
hTR hTR mutantsU3
NAF1DyskérineFibrillarineNHP2NOP10
IP dyskérine ou NAF1
Purification sur gel
Analyse des RNA des surnageant sur gel
IP dyskérine ou NAF1
SDS-PAGE 4-12% SDS-PAGE 4-12%
fixation, séchage sur papier à chromatographie et analyse sur un Molecular Imager FX.
Analyse des RNA sur Molecular Imager FX
35Stransparent
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Méthodologie
Transcription/traductionin vitro (35S-méthionine)
NAF1DyskérineFibrillarineNHP2NOP10
IP dyskérine ou NAF1
SDS-PAGE 4-12%
fixation, séchage sur papier à chromatographie et analyse sur un Molecular Imager FX.
Analyse des RNA sur Molecular Imager FX
35Stransparent
Analyse surnageantsSDS-PAGE 4-12%
Transcription in vitro (32P-CTP)
hTR hTR mutésU3
Purification sur gel
IP dyskérine ou NAF1
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HP2
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1, N
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fibril
larin
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NOP1
0NAF1
dyskérine
NOP10
NHP2
fibrillarine
NAF1
dyskérine
NOP10NHP2
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U3
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hTR206
Sans
dys
kérin
e
Sans
dys
kérin
e
Tout
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Tout
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RN
A
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ANAF1
Dyskérine
NOP10
NHP2
Fibrillarine
RNA IP
Tout
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RN
A
RN
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NAF
1
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NAF
1
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Tout
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hTR206 U3
RNA
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Tout
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IP NAF1
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T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP
NAF1
dyskérine
NOP10
NHP2
hTR2
06
C408
G
C40
8G-G
421C
G45
0A
Δ378
-451
hTR2
06
C408
G
C40
8G-G
421C
G44
0A
Δ378
-451
RNA IP
RNA
Résultats
seulsurnageant
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Résultats
T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP
NAF1
dyskérine
NOP10
NHP2
RNA IP
RNA
![Page 19: Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département.](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022062312/551d9da1497959293b8cfdd4/html5/thumbnails/19.jpg)
Conclusion
![Page 20: Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département.](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022062312/551d9da1497959293b8cfdd4/html5/thumbnails/20.jpg)
Perspectives
![Page 21: Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département.](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022062312/551d9da1497959293b8cfdd4/html5/thumbnails/21.jpg)
Remerciements
François Dragon
Yves Henry,CNRS Toulouse.
Oryctolagus cuniculus
![Page 22: Dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département.](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022062312/551d9da1497959293b8cfdd4/html5/thumbnails/22.jpg)
Difference hTR a son propre promoteur
snoRNA/scaRNA introns