Drogok fejlesztésének lépései: preklinikai, és I, II, III, IV fázisok

GLP/ GCP

A gyógyszerkutatás főbb fázisai

GMP- GLP- GCPGyógyszeripari hatósági előírások, követelményrendszerek

• GMP (Good Maunfacturing Practice)

• GLP (Good Laboratory Practice)

• GCP (Good Clinical Practice)

• Felügyeleti hatóságok (FDA, OGYI, EMEA)• ICH (adatok kölcsönös elfogadása, eljárások

gyorsíása)

Farmakokinetikai és metabolizmus vizsgálatok- ADMET

• ADMET- rendszer preklinikai és klinikai (humán)

• Abszorpció (felszívódás)• Disztribució (megoszlás)• Metabolizmus (biotranszformáció)• Elimináció (kiürülés- inaktív gyógyszermolekula)• Toxikológiai (biztonsági) vizsgálatok

• in vitro→in vivo vizsgálatok

In vitro vizsgálatok

• Viszonylag olcsó, gyors• Primer metaboliznus mechanizmusa• CYP 450 izoenzimek vizsgálata (500 féle,

enzimszabályozás, hiánya, szerepe a biotranszformációban)

• Humán és állati sejtvonalak alkalmazása (hepatocyták, mielóma sejtek, őssejtek, primer sejtek)

• Metabolizmus gyors megismerése, toxikológiai vizsgálatok tervezése (prediktív)

Alkalmazott módszerek• Immun-analitikai módszerek (fehérjék, DNS, RNS)- ag-ae kimutatásán alapuló módszerek (precipitáció,

agglutináció)- jelzéses technikák (ELISA, fluoreszcens jelölés)

• PCR, qPCR, real-time PCR (génexpresszió→sejt állapotának kifejeződése)

• Microchipek (DNS, fehérje, RNS kimutatása)

• Szelektívek (pl.:monoklonális antitestek), nagy mintaszám, kis mennyiségű minták

• Validált módszerek (GLP)

In vivo vizsgálatok

• ADMET-rendszer• In vitro vizsgálatok során kapott adatok alapján

tervezik meg a vizsgálatokat• Egér, patkány, nyúl, kutya, törpesertés, majom

stb.• Plazma, vizelet, szövet (reziduum), nyál, anyatej• Egész szervek hogyan viselkednek, vér-agy

gáton való átjutás, karcinogentiás vizsgálata

Alkalmazott módszerek

• Immun-analitikai módszerek (fehérjék, DNS, RNS)→ pl.: ELISA

• PCR, qPCR, real-time PCR (szekvenálás (génexpresszió, mutációk kimutatása)

• Mikrochipek • Főleg kapcsolt elválasztási technikák

alkalmazása az iparban (LC-MS, GC-MS)• Validált módszerek (GLP)

GCP

• Humán fázisvizsgálatok• GLP előírásainak megfelelően végzett és

dokumentált preklinikai vizsgálatok kellenek• 4 fázis, szigorú egymásra épülés• Vizsgálóhelyeken GCP előírásainak betartása • Általában 60-65 vizsgálat, 5000-7000 ember

bevonása

I. II. III. IV.

Átlagos

időigény

1év 2 év 3-4 év Gyógyszer egész piaci

élete folyamán

Alanyok 20-200

egészséges

önkéntes

100- 300

önkéntesen

vállalkozó

beteg

5000- 7000

önkéntesen

vállalkozó

beteg

Beleegyező

betegek

Cél -Biztonságosság

- Maximálisan tolerálható humán dózis meghatározása

-Hatásosság-Mellékhatások

(rövid távú értéklés)

-Hatásosság-Mellékhatások

(középtávú értéklés)

-Mellékhatások

-(hosszú távú értékelés)

• Gyakran I.- II. fázis összevonása (farmakokinetikai és metabolizmus vizsgálatok)

• Citosztatikumok esetén I. fázis II. fázis jelleggel is bír (etikai okok, expozíció)

• Originális gyógyszermolekula→ I.- IV.

• Generikus gyógyszermolekula→ bioekvivalencia vizsgálat (kémiai, farmakológiai, biológiai egyenértékűség)

Farmakogenetika

• Bizonyos gyógyszerek azonos dózisban történő alkalmazásakor eltérő terápiás választ kapunk

• Farmakokinetikai variábilitás→ nagyságrendekben eltérő dózis a vérbe

• Farmakodinámiás variabilitás→más terápiás válasz (azonos vérkonc.) a betegekben

• Okok: - polimorf metabolizmus

(CYP 450)- egyéni receptorérzékenység- interakciók (enzimgátlás, illetve indukció)

Farmakogenomika

• A génszerkezet (egyedi gyógyszermetabolizáló képesség DNS-ben kódolva) és a gyógyszer terápiás válaszának kapcsolatát vizsgálja

• „találati valószínűség” javítása→ betegek kiválasztása

• Genotípus- jelenleg 60 féle (DME, DME-receptor, transzporter gén)

• Fenotípus (endogén, exogén tényezők)• Genotípus- fenotípus meghatározása által

megjósolható a gyógyszermetabolizmus• Draft gudlines!

Alkalmazott módszerek• Genomiális DNS izolálása limfocitákból• Adott DNS részlet amplifikációja (PCR)• Emésztés restrikciós enzimekkel

Megtalálja vagy nem az adott vágási pontot→ különböző méretű fragmentek keletkeznek→ RFLP (rest. fragmentum hosszúság polimorfizmus) vizsgálat során genotípusok elkülöníthetők.

További technikák: mikrochipek, real-time PCR (jelölt oligonukleotidok)

Fenotipizálás: polimorf jeleggel metabolizálódó gyógyszer(ek) adása a betegnek, standard körülmények, metabolizációs ráta meghatározása vízeletből.

A jövő

Gyógyszerfejlesztés mikrochipen (interakciók)

Metabolizációs útvonalak modellezése

(in silico módszerek)