DNA-Fingerprint 1

DNR pirštų antspaudų procedūra

DNA-Fingerprint 2

Mėgintuvėliai kiekvienai grupei

DNA-Fingerprint 3

Tiriamieji 1 – 5Mėgintuvėliai su 10 µl DNR pavyzdžiu

70 µl Fermentų mišinio

0,24 gAgarozės

10 µl žymeklio

80 µl Buferinio užpildo

10 µl CS DNR

DNA-Fingerprint 4

1. Pasiruošimas restrikcijai

DNA-Fingerprint 5

Dėmesio!

• Kiekvienam medžiagų įpilimui naudoti švarią pipetę, kad išvengtumėte nereikalingo medžiagų susimaišymo.

• Lengvai sprigtuokite kiekvieną mėgintuvėlį mažiausiai 30 sekundžių,kad gerai susimaišytų juose esančios medžiagos.

DNA-Fingerprint 6

1. Mėgintuvėliai su DNR mėginiais

DNR 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5

10µl

DNA-Fingerprint 7

1.1 Įdėkite po 10 µl fermentų mišinio į kiekvieną mėgintuvėlį

DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5

10µl

Fermentų- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl mišinys (ENZ)

DNA-Fingerprint 8

2. Restrikcijos fermentavimasis

Patalpinkite mėgintuvėlius į 37 °C vandens vonelę ir laikykite joje 20 minučių.

DNA-Fingerprint 9

3. Pasiruošimas elektroforezei

DNA-Fingerprint 10

Įdėkite padėkliuką, metalinius strypelis ir šukas į elekroforezės kamerą

3.1 Gelio elektroforezės paruošimas

Metaliniai strypeliai Padėkliukas

Šukos

DNA-Fingerprint 11

3.2 Agarozės gelio (0,8%) paruošimas

• Įdedame 0,24 g agarozės + 30 ml TAE-buferio į 250 ml Erlenmėjerio kolbą.

• Pakaitinti Erlenmejerio kolbą mikrobangų korsnelėje, pamaišome ją ir vėl pakaitiname.

DNA-Fingerprint 12

3.3 Gelio įpilimas

Įpilame 55 °C gelio į gelio dėžutę.

Dėmesio:

• Išmatuojame temperatūrą su ranka.

•Nejudinkite gelio iki tol, kol jis netaps vientisas.

DNA-Fingerprint 13

3.4 Kameros paruošimas

• Kai gelis pasidaro vientisas, išimkite metalinius strypelius iš kameros

• Užpildykite kamerą 270 ml of TAE-buferio, kad apsemtų gelį.

• Išimkite šukas.

DNA-Fingerprint 14

4. DNR žymeklio paruošimas

Įdėkite 10 µl buferio užpildo (LB) į 10 µl DNR žymeklį (M).

DNA-Fingerprint 15

5. 10 µl buferio užpildymas

Įdėkite 10 µl buferio į CS ir S1 – S5. 10 µl

10 µl10 µl

DNA-Fingerprint 16

Įdėkite 20 µl kiekvieno pavyzdžio ir 20 µl DNR žymeklio (M) į šulinėlius.

6. Šulinėlių turinys

Atsiminkite seką!

Užpildykite iš kaires į dešinę

Kairysis perėjimas turi likti tuščias.

DNA-Fingerprint 17

6. Šulinėlių užpildymas

Dėmesio:Gelio maišeliai negali būti praduriami.

DNA-Fingerprint 18

7. Gelio elektroforezė (naudojant 120 V) (30min)

Sustabdykite elektroforezę, kuomet mėlyna juosta pasislinks 1cm iki gelio apačios.

DNA-Fingerprint 19

8. DNR ryškinimas

• Perkelkite gelį į ryškinimo dubenį ir užpilkite jį 60 ml dažomojo tirpalo.

• Nupilkite atgal dažomąjį tirpalą, į kolbą

DNA-Fingerprint 20

9. Išanalizuokite

gelį

CS S1 S2 S3 S4 S5 M

Kuris tiriamasis yra nusikaltėlis?

DNA-Fingerprint 21

9. Rezultatai