DMSODMSO 对对 293T293T 细胞生长的影细胞生长的影响响指导老师：张铭 指导老师：张铭 葛学振 葛学振 30707010153070701015孙 艺 孙 艺 30709210713070921071

———— 细胞工程自主实验答辩细胞工程自主实验答辩

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OutlineOutline• 实验设想• 实验用品• 实验方法• 实验结果• 实验体会• 参考文献

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实验设想• 试剂选择过程

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DMSODMSO

• 一种透明、无色、无臭、呈微苦味的液体，毒性极低。它是一种水溶性的化合物，能溶解绝大多数有机化合物，甚至对无机盐也能溶解。• 本身具有消炎、止痛、镇静、利尿、促进伤口愈合作用；并能将溶于其中的其它药物通过皮肤涂抹渗入体内，代替口服或注射。用于治疗关节炎、皮炎、脚气、牛皮癣、扭伤、肿瘤等各种疾病。

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DMSODMSO

• DMSO 有很好的渗透性及水溶、脂溶性 ， 由于它能快速穿透细胞膜， 并使细胞膜通透性增加， 常用来低温冻存各种细胞及脏器器官， 作为抗肿瘤药物的媒介。• DMSO 是一种常用的分化诱导刑，主要用于对粒细胞白血病 、 白血病等间叶系统肿瘤细胞的诱导分化研究。

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实验用品293T 细胞含 10% 胎牛血清的 1640 培养液

2mg/mlMTT （用 PBS 配制） DMSO酶联免疫检测仪 倒置相差显微镜 96 孔板 血细胞计数板等

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实验方法1. 培养基配制2. 铺板3. 活性检测

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培养基配制培养基配制配制培养基，其中 DMSO 的浓度分别为：0.1% ， 1% ， 2% ， 5% ， 10% ， 20% ；铺板铺板每孔接种细胞 2×10 ， DMSO 的浓度梯度 0,0.1% ，1% ， 2% ， 5% ， 10% ， 20% ，每个浓度梯度设三个平行。分两组，一组为贴壁前添加 DMSO 培养基培养，另一组等细胞贴壁后培养基添加 DMSO ；活性检测活性检测20h 后，细胞形态拍照记录， MTT 检测细胞活性。

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实验结果

1. 细胞形态2. 细胞活性（ MTT 检测）

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一、贴壁前加 DMSO 组 处理 3h 后细胞形态

0%(DMSO) 0.1%

2%1%10

一、贴壁前加 DMSO组 处理 3h后细胞形态

5% 10%

20% 11

二、贴壁前加 DMSO 组处理 20h 后细胞形态

0% 0.1%

1% 2%12

二、贴壁前加 DMSO组处理 20h后细胞形态

5% 10%

20% 13

三、贴壁后加 DMSO 组处理 20h 后细胞形态

0% 0.1%

1% 2%14

三、贴壁后加 DMSO组处理 20h后细胞形态

5% 10%

20% 15

四、处理 20h 后 MTT 数据

细胞存活率与 DMSO浓度的关系图 （经 T检验，用 *** 标注显著性差异）

细胞存活率***

******

DMSO 浓度（ % ）16

实验体会1. DMSO 对细胞生长的影响2. DMSO 对细胞贴壁的影响3. DMSO 影响细胞的方式

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DMSODMSO 对细胞的影响对细胞的影响DMSO 对 293T 细胞生长具有抑制作用，抑制作用随浓度升高而增强， 1%DMSO 时抑制率为 50% ；DMSO 对细胞贴壁有显著性抑制作用，从细胞形态观察及 MTT 检测都能证明 DMSO 抑制细胞贴壁。DMSODMSO 影响细胞的方式影响细胞的方式DMSO 使细胞失水，在低浓度时细胞因失水个体变小，状态变差；高浓度时细胞积聚在一起，最终死亡。推测 DMSO 通过影响细胞水分代谢，调节渗透压影响细胞生理状态。

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检测检测 DMSODMSO 与细胞增殖与细胞增殖Trubiani O 等研究表明 DMSO 能下调 c-myc 表达，与细胞增殖、分化和凋亡相关的鸟氨酸脱羧酶(ODC) 合成减少，细胞生长受抑制、停滞于 G0／ G1 、凋亡增加 。DMSO 常用作诱导分化剂，可能通过诱导细胞分化来抑制增殖。

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参考文献• 张卫国，史雪勤，王小虎等 . 不同浓度

DMSO 对 胃癌细胞生长的影响 . 重庆医学 ,2004 ， 33(11): 1731

• Trubiani O ， Pieri C ， Rapino M ，et al. The c-myc gene regulates the polyamine pathway in DMSO-induced apoptosis[ J ] . CelI Prolif ， 1999 ， 32(2-3):119

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