Disciplina Laboratório Clínico VeterinárioProfessorProf. Dr. Adilson Donizeti Damasceno

ENZIMAS

ÓRGÃO ENZIMAS

Fígado ALT (C,G), AST (B), LDH, FAc, FAl, SDH  e GDH (B,E)

Ductos biliares FAl (C), GGT (B,E)

Músculo esquelético ALT (B,E), AST, CK, LDH

Músculo cardíaco CK, LDH

Tecido nervoso CK

Rim LDH, FAc, GGT

Pulmão LDH

Ossos FAl

Hemácias AST, LDH, FAc

ÓRGÃO ENZIMAS

Fígado ALT (C,G), AST (B), LDH, FAc, FAl, SDH  e GDH (B,E)

Ductos biliares FAl (C), GGT (B,E)

Músculo esquelético ALT (B,E), AST, CK, LDH

Músculo cardíaco CK, LDH

Tecido nervoso CK

Rim LDH, FAc, GGT

Pulmão LDH

Ossos FAl

Hemácias AST, LDH, FAc

Importância da enzimas em Medicina Veterinária

Diagnóstico

Monitoramento

Prognóstico

Conceito

Proteínas aceleradoras de reações bioquímicas

Alta especificidade pelo substrato

Susceptíveis a variação de pH e temperatura

Concentração variável nas células

Cinética química

ANDAMENTO DA REAÇÃO

ENERGIA DE ATIVAÇÃO

Reação não catalisada

Reação catalisada

Reação enzimática (catalítica)

ENZIMA

SUBSTRATO

PRODUTO

Nomenclatura

Nome sistemático (UIB)

Nome dos produtos originados

Transaminase glutâmica‑pirúvica (TGP)

Transaminase glutâmica‑oxalacética (TGO)

Natureza da reação catalisada

Alanina aminotransferase (ALT)

Aspartato aminotransferase (AST)

Nomenclatura

ALANINA

‑CETOGLUTARATO

+

PIRUVATO

GLUTAMATO

TGP

ALT +

Dosagem da atividade enzimáticaMétodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria

+ +

SOLUÇÃO TAMPONADA

SUBSTRATO PRODUTO

COFATORES COFATORES

Dosagem da atividade enzimáticaMétodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria

ESPECTROFOTÔMETRO

Dosagem da atividade enzimáticaMétodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria

FOTOCÉLULA

AMPLIFICADOR

FONTE DE LUZ

PRISMA

FILTRO DE LUZ

DISPLAY

LENTE

Dosagem da atividade enzimáticaMétodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria

Kits comerciais

Cuidados com o espécime clínico

Recomendações pré‑colheita do sangue

Jejum de 12 horas

Evitar lipemia

Material adequado

Sistema VacutainerTM

Seringa, agulhas e tubos

Cuidados com o espécime clínicoCuidados na colheita do sangue

Aspiração do sangue suave e gradativa Evitar hemólise

Recomendações pós‑colheitaSeparar rapidamente plasma/soroTemperatura ambiente/refrigeração/congelamento (?)Evitar congelamento/descongelamento

Degradação da enzima

Cuidados com os espécime clínico

Escolha da amostra

PLASMA SORO

X

Escolha da amostra

Plasma

Usar preferencialmente heparinizado

Amostra “natural”

Permite rápida separação do plasma

Não é agente quelante de Ca++ e Mg++

Ideal para dosagem de potássio

Armazenar em tubos de plástico

Escolha da amostraSoro

Separação mais demorada (~ 30 minutos)Sangue coagulado mais estável que o heparinizadoColhidos em tubos de vidro ou plásticos especiais

Aderência do coágulo e não retraçãoMaiores as chance de hemólise

Principais indicações Ácidos biliares Insulina Testes sorológicos

Armazenamento em tubos plásticos

ENZIMA LOCALIZAÇÃO

FAl Membrana plasmática

GGT Membrana plasmática

AST1 Citoplasma

ALT Citoplasma

SDH Citoplasma

AST2 Mitocôndria

GDH Mitocôndria

OCT Mitocôndria

Localização celular em hepatócitos

Localização celular

+ ++ +++INTENSIDADE DA LESÃO CELULAR

CONCENTRAÇÃO NO SANGUE

-

MEMBRANA PLASMÁTICA

CITOPLASMA

MITOCÔNDRIA

LISOSSOMOS

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina Aminotransferase (ALT)

Enzima citoplasmática

Pico: 3 a 4 dias; retorno: 2 semanas

Ação

Transaminação entre L‑alanina e 2‑oxiglutarato

Produto: piruvato e glutamato

Principais enzimas empregadas na prática clínicaAlanina Aminotransferase (ALT)

Atua no fígado, rim, músculos, coração e eritrócitosCofator: piridoxal fosfatoHepatodiagnóstica: cão, gato, coelho e rato

Aumentos superiores a 3 vezesConservação

3 dias à temperatura ambiente 2‑3 semanas se refrigerada ou congelada

Principais enzimas empregadas na prática clínicaAlanina Aminotransferase (ALT)

Aumento da atividade sérica por drogas Antiinflamatórios

Acetominofeno, fenilbutazona, corticóides Anticonvulsivantes 

Fenobarbital, primidona CetoconazolMebendazol Tetraciclina Aflatoxinas

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínicaAspartato aminotransferase (AST)

Apresenta dois isômeros nos hepatócitos AST1: 60‑80% ‑ mitocondriais AST2: 20‑40% ‑ citosólicas

Ação Transaminação entre L‑alanina e 2‑oxiglutarato Produto: oxaloacetato e glutarato

Presente no fígado, eritrócitos, músculo e coração

Principais enzimas empregadas na prática clínicaAspartato aminotransferase (AST)

Hepatodiagnóstica: grandes animaisAvaliar lesão muscular: associar a LDH e CK

Deficiência vitamina E e selênioConservação

Usar soro ou plasma Estável à temperatura ambiente

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínicaCreatina quinase (CK)

Ação Fosforilação da creatina Produto: fosfocreatina Requer Mg++ como cofator

Possui quatro isoenzimas CK‑MM (músculo e coração) CK‑BB (cérebro) CK‑MB (coração) CK‑Mt (15% da AS da CK cardíaca)

Principais enzimas empregadas na prática clínicaCreatina quinase (CK)

ATP  +   creatina ADP  +   fosfocreatinacreatinaquinase (CK)

creatinina

Filtração

Secreção tubular

2% ao dia

Principais enzimas empregadas na prática clínicaCreatina quinase (CK)

Atividade sérica aumentada Esforço muscular excessivo Injeções intramusculares Decúbito prolongado Convulsão e tremores musculares Deficiência de vitamina E e selênio

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Creatina quinase (CK)

Conservação

Instável em qualquer condição

Oxidação do grupo sulfidril

CK‑MB pouco confíavel para lesão cardíaca

Meia‑vida curta

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínicaLactato desidrogenase (LDH)

Estrutura Tetrâmero (H + L) Cinco isoenzimas:

Ação Oxidação do piruvato a L(+) lactato

LDH1 e LDH2: coração, rins e hemácias LDH3 e LDH4: músculo e pulmão LDH5: fígado

LDH1, LDH2, LDH3, LDH4 e LDH5HHHH, HHHL, HHLL, HLLL, LLLL

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Lactato desidrogenase (LDH)

Monitoramento de enfermidade musculares

Associação a CK e AST

Doença do músculo branco

Mioglobinúria

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Lactato desidrogenase (LDH)

Conservação

LDH4 e LDH5 refrigerada e não congelada

Dissociação dos protômeros

Evitar amostras hemolisadas

EDTA e oxalato inibem ação enzimática

Principais enzimas empregadas na prática clínicaLactato desidrogenase (LDH)

CQ

LDH

1         2         3         4         5         6         7         8   Atividade sérica da CQ e LDH após lesão muscular

Magnitudedalesão AST

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Fosfatase alcalina (FAl)

Enzima de membrana plasmática

Ação Hidrolisa ésteres de fosfatoMáxima em pH 10

Possui isoenzimas

Fígado, ductos biliares, ossos e intestino

Principais enzimas empregadas na prática clínicaFosfatase alcalina (FAl)

Eliminação renalElevação indica processo hepatobiliar

Hepatopatia Aumentos transitórios

Colestase intra/extra hepática Aumento em até 10X

Conservação Estável por até 13 meses quando congelada

Principais enzimas empregadas na prática clínicaFosfatase alcalina (FAl)

Outros fatores de aumento da AS Animais em crescimento Consolidação de fraturas ósseas Doenças ósseas

Osteossarcoma Osteomalácia Hiperparatireoidismo Deficiência de vitamina D

Principais enzimas empregadas na prática clínicaFosfatase alcalina (FAl)

Outros fatores de aumento da AS Hiperadrenocorticismo Indução por drogas

Corticóides, fenilbutazona Barbitúricos, fenotiazinas, halotano Tetraciclina, cefalosporina Tiabendazol

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínicaGama‑glutamil transferase (GGT)

Cliva grupo glutamil C terminal  glicinaAlta concentração nos rins e fígado

Aumento no plasma após colestase Lipidose hepática Fasciolose (6 semanas após infecção)

Hepatodiagnóstica em felinosMaior sensibilidade e especificidade

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Gama‑glutamil transferase (GGT)

AS induzida por prednisolona

Transferida pelo colostro em bovinos e ovinos

Estabilização após 21 dias

Conservação

Estável por 4 semanas à ‑30ºC

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínicaGlutamato desidrogenase (GLDH)

Ação Conversão do glutamato em 2‑oxiglutarato

Especificidade Altas concentrações no fígado

Caprino, ovino e bovino Aumento da AS nas colestases

Pico e retorno mais rápidos que a GGTConservação

Menos lábil que a SDH

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínicaSorbitol desidrogenase (SDH)

Ação Localização: citoplasmática Oxidação do D‑sorbitol para D‑frutose Inibida por EDTA e oxalato 

Cofator: Zn++

Altas concentrações no fígado Ruminantes, PR e eqüinos

Principais enzimas empregadas na prática clínicaSorbitol desidrogenase (SDH)

CaracterísticasMeia‑vida curta (24‑48 horas) Pico rápido; retorno após 3 dias

Conservação Usar plasma heparinizado ou soro Instável à temperatura ambiente Estável por um semana se congelada

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Amilase

Distribuição

Maior quantidade no pâncreas e duodeno

Presente em gl. salivares, cérebro e pulmão

Eliminação renal

Uso no diagnóstico de pancreatite aguda

Para aumentos superiores a 3x ou 4x

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Lipase

Presente no pâncreas, fígado e rins

Aumento da AS por dexametasona

Associada a amilase no diagnóstico da pancreatite

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Alanina aminotransferase

Aspartato aminotransferase

Creatina quinase

Lactato desidrogenase

Fosfatase Alcalina

Gama‑glutamil transferase

Glutamato desidrogenase

Sorbitol desidrogenase

Amilase

Lipase

Tripsina

Principais enzimas empregadas na prática clínica

Tripsina

Produzida no pâncreas (tripsinogênio)

Convertida em tripsina no intestino

Apresentações no plasma

Tripsina

Tripsinogênio

Complexo anti‑tripsina

Imunorreatividade semelhante à tripsina

Pancreatite aguda

OBRIGADO