Diagnóstico Microbiológico

Toma de muestras clínicas representativas

Esputo

Orina(micción espontánea o

al acecho)

Material fecal

Sangre/LCR

Biopsia de tejidos

Sitios no contaminados con Flora Normal

Sitios contaminados con Flora Normal

Orina(punción suprapúbica)

Diagnóstico microbiológicoMuestra clínica

TRANSPORTE

Material necesario

Medio semisólido: Medio StuartMedio AmiesMedio Cary & Blair

Medio líquido: Agua peptonada (Vibrio cholerae)PRAS/TAB (anaerobios)

Medio

Frasco estéril: orina, materia fecal.

Hisopo en medio semisólido: fauces, recto, endocervix, uretra.

Frasco con medio para anaerobios: anaerobios

Frasco de hemocultivo: sangre

Conservación de las muestrasTIPO DE MUESTRA TEMPERATURA AMBIENTE HELADERA (4ºc)

SANGRE X

ORINA X

EXUDADOS FARINGEOS X

ESPUTO Y MUESTRAS RESPIRATORIAS X

EXUDADOS GENITALES X ( hisopo en medio Amies o Stuart

para Neisseria gonorrhoeae)

LCR X

Punciones o biopsias de PIEL Y TEJ. BLANDOS

X

EXUDADOS OCULARES X

MUESTRAS PARA ANAEROBIOS X

MATERIA FECAL X

Diagnóstico microbiológico

Observación microscópica

CultivoDetección de antígenos bacterianos

Métodos moleculares

Pruebas Bioquímicas

Identificación

Sensibilidad antibiótica

Medios Selectivos

Medios diferenciales

Medios de enriquecimiento

Diagnóstico Microbiológico

Microscopia

Cultivo

TinciónFresco

Aislar

Identificar

Conocer el patrón de susceptibilidad antibiótica

Presencia o no de bacterias

Morfología

Movilidad

Células epiteliales

Leucocitos

Hematíes

Candidas (hongo)

GRAM

ZIEHL NIELSEN

GIEMSA

OTROS

Procesamiento de la muestraDiagnóstico microbiológico

Exámen en fresco

Candida spp. (hongo)

Células epitelialesHematíes

Leucocitos

Diagnóstico microbiológico

Cocos Gram positivos

Tinción de Gram

En cadena Ej: Streptococcus spp

Microscopio óptico

En racimo Ej: Staphylococcus aureus

Diagnóstico microbiológico

Bacilos gram-positivos

Bastones o cilindros

Microscopio óptico

Diagnóstico microbiológico

Corynebacterium diphteriae(agrupamiento como letras chinas)

Tinción de Ziehl-Neelsen

Microscopio óptico

Diagnóstico microbiológico

CultivoMedio sólido

(aislar)

Medio líquido

(enriquecer)

Diagnóstico microbiológico

Medios Selectivos y Diferenciales

Chapman

Levine

o EMB

CultivoDiagnóstico microbiológico

Identificación bacteriana

Pruebas bioquímicas Identificación de antígenos bacterianos

API E

Serotipificación

Diagnóstico microbiológico

Serotipificación

Se utilizan anticuerpos

específicos para detectar antígenos

en la superficie de la envoltura bacteriana

1 gota de

Ac

1

colonia

aislada

Aglutinación = positivo

Diagnóstico microbiológico

Cultivo

Microorganismo patógeno

Diagnóstico microbiológico

Repaso

Pruebas de susceptibilidad antibiótica

Aislamiento- identificación-

OBJETIVOS

Determinar la sensibilidad de una cepa

bacteriana a un determinado antibiótico

Determinar la eficacia de un antibiótico

Pruebas de susceptibilidad antibiótica

Antibiograma de difusión o método de

Kirby & Bauer

Significado clínico de la prueba de Kirby & Bauer

•Bacterias sensibles•Bacterias de susceptibilidad intermedia•Bacterias resistentes

E-Test

Gradientede concentracionesen la tira (µg/ml)

La diferencia con el disco, es que el disco contiene una únicaconcentración del antibiótico

Esta es la CIM

Agente etiológico Método diagnóstico serológico

Treponema pallidum IF (FTA-abs)/ HA (MHA-Tp)VDRL

Brucella spp. Aglutinación/ ELISA

Chlamydia trachomatis IFD/ELISA

Leptospira interrogans Aglutinación

Coxiella burnetti IFIFC: Fijación de complemento IF: inmunofluorescencia HA: hemoaglutinación

FTA-abs: Fluorescent Treponemal Antibody with absorption.

MHA-Tp: Microhemaglutinación del Treponema pallidum

Diagnóstico Microbiológico Indirecto:

detección de anticuerpos séricos

EJEMPLO

NIÑO DE 3 AÑOS LLEGA A LA GUARDIA CON LOS SIGUIENTES SINTOMAS:

FIEBRE ALTA (38 a400C)

VOMITOS FUERTE DOLOR DE CABEZA

…Y FOTOFOBIA

RIGIDEZ DE NUCA

AL DIA CON EL CALENDARIO DE VACUNACION

Diagnóstico microbiológico de meningitis

Líquido cefalorraquídeo (2 tubos de ensayo)

Fisicoquímico

Cultivo

PROCESAMIENTO INMEDIATO

TRANSPORTE SIN REFRIGERAR (N.meningitidis)

X 3HEMOCULTIVO

Resiembra a ciegas

menos de 24 h de incubación

y a intervalos hasta 7 días de incubación, sin

esperar la observación del desarrollo en el

frasco

S

Detección Visual: Turbidez ,

Formación de gas, de películas,

coágulos o pequeñas colonias en

los frasco

SUBCULTIVOS

SUBCULTIVO sólo

de hemocultvos positivos

DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

LCR

Sin centrifugar Centrifugado

Observación en fresco

(móvil)-Giemsa-Tricrómico

sobrenadante

sedimentoDiagnostico

directoVirus

Aislamiento

Búsqueda ácidos nucleicos

LATEX

CIEF

ELISA

PCR

ZN

Gram

Tinta china

Cultivo

Identificación por pruebas bioquímicas

Antibiograma