Determinazione quantitativa del profilo acidico del latte con particolare riferimento agli isomeri...
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Determinazione quantitativa del profilo acidico del latte con particolare riferimento agli isomeri coniugati
dell’acido linoleico
Relatore: Prof. Schiavon Stefano
Correlatori: Dr. Dal Maso Matteo Dr. Grigoletto Luca
Laureando: Pellegrin Nicola
ANNO ACCADEMICO 2007 – 2008
UNIVERSITÀ DEGLI STUDI DI PADOVAFACOLTÀ DI AGRARIA
DIPARTIMENTO DI SCIENZE ANIMALI
TESI DI LAUREA TRIENNALE IN SCIENZE E TECNOLOGIE AGRARIE
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Il latte: frazioni lipidiche
Acidi grassi insaturi (con 1 o + doppi legami):
- polinsaturi o PUFA (con più doppi legami
es: acido linoleico C 18:2)
- omega-3 (acidi grassi insaturi essenziali) quando
l'ultimo doppio legame è presente sul terzo
carbonio a partire dalla fine (es: acido linolenico
C 18:3)
- CLA sono isomeri geometrici dell’acido linoleico che presentano
doppi legami in posizione 9 - 11, o 10 - 12 assumendo sia forme
cis che trans.
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OBIETTIVIMessa a punto di una nuova metodica di determinazione quanti-qualitativa dei singoli acidi grassi, comprese le diverse forme isomeriche CLA, utilizzando come metodica di base quella già operativa presso il Dipartimento di Scienze Animali apportando le opportune variazioni:
•Scelta della colonna
•costruzione delle rette di taratura
•verifica della ripetibilità delle misure
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Materiale e Metodi
• Messa punto di una nuova metodica
• Analisi del profilo acidico del latte di bovine sottoposte a integrazione lipidica a base di CLA
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Messa a punto della nuova metodica
• colonna di separazione (colonna capillare HP-88, lunga 100 m);
• Utilizzo di uno standard specifico (F.A.M.E, mix n. LB-49737)
• costruzione delle rette di taratura (in funzione dello standard utilizzato);
• verifica della ripetibilità delle misure (per la validazione della metodica).
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Metodica utilizzata
1. Analisi del campione
2. Preparazione
3. Estrazione dei lipidi
4. Trans-esterificazione
5. Determinazione gascromatografica
6. Espressione dei risultati
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Espressione dei risultati
Analisi quantitativa eseguita col metodo dello standard interno per confronto con la curva di calibrazione (costruita utilizzando il software specifico)
Concentrazione di ogni acido grasso:
Dove:
• [C] : concentrazione di acido grasso nel campione in mg/100gr.
• QRC : quantità di estere metilico di acido grasso da curva di calibrazione in mg.
• PC : peso del campione in g.
• FAi : fattore di conversione da estere metilico a corrispondente acido grasso.
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Analisi della composizione acidica del latte
Metodica applicata a campioni di latte prelevati in una
sperimentazione in corso presso l’azienda della facoltà:
Prova: somministrazione di un integratore, contenente
isomeri CLA, a tre gruppi di bovine omogenei per
produzione, giorni di lattazione, body condition score
e ordine di parto.
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PERIODIBOX 1 BOX 2 BOX 3
(4 Vacche) (4 Vacche) (4 Vacche)
ADATTAMENTOAD AD AD
(7 d)
TRATTAMENTO 1
CTRL CLA 40 CLA 80- Settimana 1
- Settimana 2
SOSPENSIONE
- Settimana 3
TRATTAMENTO 2
CLA 40 CLA 80 CTRL- Settimana 1
- Settimana 2
SOSPENSIONE
- Settimana 3
TRATTAMENTO 3
CLA 80 CTRL CLA 40- Settimana 1
- Settimana 2
SOSPENSIONE
- Settimana 3
Quadrato latino:
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Risultati e discussione
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Rette di taratura Rette di taratura accurate hanno permesso di individuare valori precisi dei vari
analiti, in particolare: valori di correlazione pari a 0,9998 x il CLA C18:1 cis-9, trans-11 e 0,9994 x il CLA C18:2 trans10,cis12
Ciò ha permesso di ottenere un cromatogramma accurato, completo e leggibile per tutti gli acidi grassi analizzati.
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Verifica della ripetibilità
• Le misure sono più precise all’aumentare degli
atomi di carbonio dei singoli acidi grassi, con
valori più accurati compresi fra i 14 ed i 18
atomi di carbonio.
• deviazione standard media 1,63%:
valore minimo di 0,35% acido oleico - C18:1 cis n-9
valore massimo di 7,58% per l’acido cervonico
(C22:6 n3).
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Composizione acidica del latte
Dalle analisi effettuate è stato riscontrato che:
• l’utilizzo di integratori a base di CLA, provoca una diminuzione della quantità di grasso nel latte ed un tendenziale aumento della produzione di latte e proteine.
• Nelle bovine si è notato che aumentando la quantità di integratore c’è un aumento significativo degli acidi grassi mono e poli insaturi con 18 atomi di carbonio, gli acidi grassi più trasferiti nel latte sono stati l’acido vaccenico e i due isomeri CLA oggetto di in prova.
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Valutazione della variabilità individuale dei profili acidici del latte
Livelli di CLA C18:2 trans10,cis12 nella dieta:
3,072 g/d 40 g/d di integratore 6,51
6,144 g/d 80 g/d di integratore 5,55
Nel grafico si nota come la percentuale di trasferimento dell’isomero CLA
trans10,cis12 nel latte sia molto variabile a livello individuale con livelli
di trasferimento su livelli medi del 5,54 ± 2,13%
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
19 36 38 40 55 60 65 67 74 75 207 840
Bovina
% d
i tr
asfe
rim
ento
CLA40 CLA80
% di trasferimento nel latte
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Conclusioni
•La metodica messa a punto è risultata
valida
•L’utilizzo degli acidi grassi protetti
nell’alimentazione delle bovine da latte
promuove l’aumento dei CLA nel latte