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TEMA 3.3.- CINETICA ENZIMÁTICA. Contenido: ! Ecuación de Michaelis-Menten y sus transformaciones. ! Cinética en reacciones con dos o más sustratos. ! Determinación cuantitativa de la actividad enzimática. ! Unidades de actividad enzimática.
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Lehninger
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Rawn
Variación de la velocidad de reacción de una reacción de primer orden
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Rawn
Determinación de la constante de velocidad
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Rawn
Avance de reacción en una reacción enzimática monosustrato
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Rawn
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E + S ES E + P k1
k2
k3
[ET] = [E] + [ES] k3 comparable a k2
[ET] << [S] Vo = k3[ES]
Condiciones
Vf = k1[E][S] Vd = k2[ES] + k3[ES] = (k2 + k3)[ES]
Estado estacionario [ES] constante entre t1 y t2
Vf = Vd
k1[E][S] = (k2 + k3)[ES]
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k1[E][S] = (k2 + k3)[ES]
[ES] = k1[E][S]
(k2 + k3) =
[E][S]
(k2 + k3)/k1 =
[E][S]
KM
[E] = [ET] - [ES]
([ET] - [ES])[S]
KM [ES] =
[ES] = [ET][S]
KM + [S]
Vo = k3[ES] = k3[ET][S]
KM + [S]
Vmax[S]
KM + [S] Vo =
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Vmax[S]
KM + [S] Vo =
[S] Vo = Vmax
[S] = KM Vo = 1/2Vmax
Vmax
KM [S] Vo = [S]
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Vmax[S]
KM + [S] Vo =
[S] Vo = Vmax
[S] = KM Vo = 1/2Vmax
Vmax
KM [S] Vo = [S]
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Vmax[S]
KM + [S] Vo =
Ecuación de Lineweaber - Burk
Linearización ecuación de Michaelis Menten
1/Vo = KM + [S] Vmax[S]
1/Vo = KM
Vmax 1 [S]
+ 1 Vmax
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Significado de KM
Vmax[S]
KM + [S] Vo =
[S]
KM + [S]
Vo
Vmax = Fracción de centros ocupados fES =
[S] fES = 1
[S] = KM fES = 0.5
1
KM [S] fES = [S]
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Significado de KM
k2 + k3 k1
KM =
k2 >> k3 k2 k1
KM = = 1 Keq
= KD
KM KD Afinidad baja
KM KD Afinidad alta
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Reacciones con dos sustratos
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Reacciones con dos sustratos
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Devlin
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