Comment utiliser l’antibiogramme afin de faire un meilleur ...
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Comment utiliser l’antibiogramme afin de faire un meilleur usage
des antibiotiques?
Olivia Labrecque, DMV, MSc, DES, Dipl. ACVM Julie-Hélène Fairbrother, DMV, MSc, DES, Dipl. ACVM
Marie Archambault, DMV, MSc, PhD, Dipl. ACVM
Conférence AVIA, 15 mai 2018
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Introduction
� L'antibiogramme est la méthode analytique qui permet de définir in vitro la sensibilité d'une souche bactérienne aux divers antibiotiques
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Bases théoriques de l'antibiogramme
Un germe est dit résistant quand il est capable de supporter une concentration d'antibiotique notablement plus élevée que celle qu'il est possible d'atteindre dans l’animal
1
Méthode utilisée couramment au Québec pour la détermination de la sensibilité bactérienne • Au diagnostic: méthode
de diffusion sur gélose • En recherche: méthode de
dilution (en bouillon ou gélose)
2
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Méthode au laboratoire � Deux groupes de méthodes:
� Dilution
� Diffusion � Les deux sont aussi sûres, conditions très standardisées
(souche pure, milieu de culture, inoculum, tableau de lecture)
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CMI
Méthode de microdilution Sensititre 0,5 McFarland
dans 5 ml d’eau distillée
Mettre 50 ul dans 10 ml de Mueller-Hinton cation-adjusted
Bien mélanger et inoculer 50 ul par puits d’une plaque de Sensititre (ATB lyophilisés)
Lecture après 24h d’incubation
18 à 23 antibiotiques: Ampicilline, Ceftriaxone Ciprofloxacine, Clindamycine Daptomycine, Érythromycine Gatifloxacine, Gentamicine Lévofloxacine, Linézolide Oxacilline, Pénicilline Quinupristine/dalfopristine Rifampicine, Streptomycine Tétracycline, Vancomycine Trimethoprime/sulfa.
=
2 ug/ml
128ug/ml
256ug/ml
Méthode de dilution
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Ct+ Ct-
-
-
+
2 4 8 16 32 64 128 256
Ampicilline (ug/ml)
CMI= 128 ug/ml
Méthode de dilution
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Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)
On expose la souche bactérienne à diverses concentrations de chacun des antibiotiques
On détermine la plus faible concentration capable d'inhiber la croissance de la souche
(concentration minimale inhibitrice ou CMI)
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MÉTHODES DE DILUTION � CMI: Série de dilutions de l’antibiotique ; «Breakpoint»:
qqles dilutions
� Disponible pour la recherche via le Dr John Fairbrother (labo ECL)
� Avantages: � Résultats quantitatifs ou semi-quantitatifs � Possibilité de lecture automatisée � Flexibilité dans le choix des plaques (ATB) par espèce
animale
� Désavantages: � Couteux: 15 à 25$/plaque sans le temps technique � Planification requise car commande de matériel nécessaire � Formation technique avec le sensititre � Analyse des données/rapports (étudiants cycles supérieurs)
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MÉTHODES DE DIFFUSION
� Largement utilisées (Kirby-Bauer)
� Pour les bactéries à croissance rapide
� Résultats qualitatifs: � Sensible
� Limite (Intermédiaire)
� Résistant
*Corrélation directe entre CMI et zone de diffusion
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Méthode de diffusion
0,5 McFarland dans 5 ml d’eau distillée
Inoculer une Mueller-Hinton avec sang (Streptococcus spp., Pasteurella spp. et Mannheimia spp.) ou sans sang (autres bactéries), chocolat (APP)
Lecture après 18-24h ou 20-24h d’incubation avec ou sans CO2
Méthode de diffusion
Mueller-Hinton
Culture pure Identification nécessaire
Distributeur à disques d’antibiotiques
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Pseudomonas aeruginosa
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*Corrélation directe entre CMI et zone de diffusion
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‘Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)’
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Choix des antibiotiques
� Nombre limité de disques (n=12) par gélose
� Routine: généralement, un seul représentant de groupe d’antibiotiques apparentés ayant un spectre d’action semblable et des réactions croisées prévisibles et dont l’interprétation des résultats s’applique aux autres
� Utilisation homologuée pour l’espèce animale concernée
� Demande spéciale sur la requête
� Recommandation du CLSI (groupes)
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Antibiotiques Porc Volaille
Ampicilline R R
Apramycine R (Tiamuline)
Ceftiofur R R
Enrofloxacine R R
Florfénicol R
Gentamicine R R
Néomycine R (Tulathromycine) R
Pénicilline R R
Spectinomycine R R
Tétracycline R R
Triméthoprime-Sulfas R R
Colistine (non-visible) Clindamycine Erythromycine Sulfisoxazole
R (Tilmicosine) R R R
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Méthode de diffusion � Avantages:
� Résultats qualitatifs faciles à comprendre � Possibilité de lecture semi-automatisée (Biomic!) � Excellente flexibilité dans le choix des antibiotiques � Rapide (labo. plus rapide qu’avant? MALDI-ToF) � Peu couteux
� Désavantages: � Lecture manuelle avec règle (long, biais) � Pas quantitatif (souche plus ou moins résistante/
sensible?) � Biomic?
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Lignes directrices et limites des antibiogrammes
Le ‘Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)’ publie des standards (lignes directrices) pour plusieurs bactéries envers plusieurs antibiotiques mais pas
pour tout!
• Certains antibiogrammes ne peuvent pas être fait car il n’y a aucune ligne directrice…
L’antibiogramme est un test de laboratoire qui essaie de prédire le résultat de l’effet de l’antibiotique
sur la bactérie dans l’animal…
• Cette prédiction n’est pas toujours parfaite et demande votre interprétation…
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Questions?
Suite avec Olivia Labrecque et Julie-Hélène Fairbrother