实验三 细菌的致病性

病原生物学系

基础医学院

细菌的毒力物质

黏附素

侵袭性物质 侵袭力

毒 素 内毒素

荚膜

生物被膜

外毒素

本次实验内容

1. 内毒素发热反应

2. 血浆凝固酶实验

3. 内毒素的检测——鲎试验

4. 外毒素的毒性作用

5. 药敏实验

1.内毒素发热反应

细菌感染者持续发热的发生机制主要是

内源性致热原所致。

伤寒杆菌

短杆状，为无芽胞，无荚膜，G-杆菌

菌体裂解释放出内毒素，在发病过程起重要

作用，是重要的致病因素。

内毒素的发热反应

LPS

单核巨噬细胞

致敏淋巴细胞

＋

＋

下丘脑 体温调节中枢

内毒素的发热试验

试验动物：家兔

(正常体温范围 38.5-39.5℃ )

菌液： 加热杀死的伤寒杆菌培养液

结果观察：注射前后体温的变化

注意事项：体温计使用

爱护我们的小兔子

家兔易于驯服，一般不会咬人，但脚爪较锐利。抓取时切记忌强抓兔的耳朵、腰部或四肢。当兔在笼内安静下来时，打开笼门，用右手抓住颈部的被毛和皮肤，轻轻把动物提起，把兔拉至笼门口，头朝外，然后迅速用左手托起兔的臀部，给家兔以舒适安全感。

家兔耳缘静脉注射

具体方法：

1. 将覆盖在静脉皮肤上的毛拔去或剪去，可用75%酒精湿

润局部。

2. 在耳根将耳缘静脉压迫，以使其血管怒张。

3. 用左手食指和中指夹住静脉近心端，拇指和小指夹住

耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充

盈后，右手持注射器使针头由静脉末端刺入，顺血管方向

向心端刺约1~1.5cm。

4. 放松左手拇指和食指对血管的压迫，右手试推注射器针

芯，若注射阻力较大或出现局部肿胀，说明针头没有刺入静

脉，应立即拔出针头，选择更靠近心脏的部位重新刺入注射

器；若推注阻力不大，可将药物徐徐注入。

5. 注射完毕后将针头抽出，随即以棉球压迫止血。

上次实验结果观察

扫地 Ⅰ手指皮肤消毒前

Ⅱ手指皮肤消毒后

Ⅲ鼻腔中细菌检查

Ⅳ书籍上细菌检查

标 记

实验结果的观察记录

项目 细菌分布情况

手指消毒前 ＋＋

手指消毒后 －

鼻腔 ＋＋＋

书本表面 …

扫地 …

平板划线分离及菌落观察

紫外线灭菌效果及结果观察

2.血浆凝固酶实验

血浆凝固酶（coagulase)是致病性葡萄球菌产生的一种侵袭性物质。

具有抗吞噬作用及抵抗血清中杀菌物质的杀灭作用。

感染局部病灶化。

致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶。

一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中

的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，

发生凝集：可用玻片法测出。

另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶。作用类似

凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激活变为

凝血酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，

从而使血浆凝固，可用试管法测出。

金黄色葡萄球菌

（一）致病物质

侵袭性酶：血浆凝固酶、耐热核酸酶等

毒素： 葡萄球菌溶素

杀白细胞素

表皮剥脱毒素

肠毒素

毒性休克综合征毒素(TSST-1)

游离凝固酶（free coagulase)

游离凝固酶

(似凝血酶原) 凝血酶样物质

血浆

协同因子

纤维蛋白原

(液态)

纤维蛋白

(固态)

试 管 法

材料：

金葡菌液、1:4稀释的兔血浆、水浴箱。

方法：

甲、乙两兔血浆管，每管各含血浆0.2ml,甲管接种金葡菌液0.1ml,乙管加等量肉汤作对照。

两管均置37℃水浴1h。

接种

金葡菌液

0.1ml

加肉汤

0.1ml

对照

37℃水浴1h

1:4稀释兔血浆0.2ml

3.内毒素检测方法——鲎试验

试剂：鲎试剂、标准内毒素、无菌无热原质生理盐水

试验结果观察：鲎试验(+)会出现凝固

无菌无热原的生理盐水 0.1 ml

内毒素 0.1 ml

37℃温箱1h

鲎试剂

无菌无热原的生理盐水 0.1 ml

无菌无热原的生理盐水 0.1 ml

4.外毒素的毒性作用

细菌所产生的毒素

外毒素：

主要由G+菌产生的能分泌到菌体外的具有毒

性的蛋白质。

内毒素：

G-菌细胞壁脂多糖成份，菌体裂解后释放出。

内毒素与外毒素的比较

种类 内毒素 外毒素

来源 革兰阴性菌 革兰阳性菌及部分革兰阴性菌

存在部位

细胞壁成分、细菌裂解释出

活菌分泌或细菌溶解散出

化学成分

脂多糖

蛋白质

稳定性

好、160℃ 2-4h 破坏 差、60-80℃ 30min 破坏

毒性作用 弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，DIC等

强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现

免疫原性 弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素

强，能刺激机体形成抗毒素， 经甲醛脱毒后能形成类毒素

破伤风杆菌的痉挛毒素

所致疾病

（1）破伤风（tetanus）:

（2）新生儿破伤风(neonate tetanus)

牙关紧闭 苦笑面 角弓反张

5.药 敏 试 验

目的要求:

1）了解抗生素敏感试验的操作方法

2）初步作为抗生素敏感试验结果的判断

3）了解常用抗生素的抗菌谱

纸 片 法 材料：

菌种：葡萄球菌、大肠杆菌

培养基：普通琼脂平板

抗生素滤纸片：每片含药量为青霉素1单位，

而其它抗生素为10微克。

葡萄球菌

大肠杆菌

抑制菌圈直径（mm）

敏感情况

青霉素 <10

10-20 >20

抗药 中度敏感 高度敏感

其它抗生素 <10

10-15 >15

抗药 中度敏感 高度敏感

判 断：