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目的タンパク質を内包したエクソソームを産生する...
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目的タンパク質を内包したエクソソームを産生するシステム XPack Protein Packaging Vector 63244 Web ページ番号 詳しくは Web で 特 長 Amp R pUC ORI SV40 OR Ⅰ SV40 poly-A 3’ΔLTR WPRE EF1α MCS XPack tag MSCV CMV or cPPT RSV 5’ LTR XPack Lentivectors XPAK510PA-1 (CMV) XPAK710PA-1 (MSCV) MCS 5’ - Xho Ⅰ BamH Ⅰ Not Ⅰ EcoR Ⅰ Nhe Ⅰ Pst Ⅰ - 3’ ベクターマップ 使用例 XPack-GFP localization pattern during packing XPack exosome Western blot Control exosomes XPack-GFP exosomes CETP Ab GFP Ab Target cell delivery of XPack-GFP Fluorescence target cell images Target cell lysate Western blots + Control exosomes + XPack-tag GFP exosomes αGAPDH αGFP A C B A） XPack-GFP（#XPAK530PA-1）を HEK293 細胞にトランスフェクションし，24 時 間後に蛍光顕微鏡で GFP の局在を解析した。 B） 48 時間後，ExoQuick-TC を用いて培養液上清からエクソソームを単離し，ウェスタ ンブロッティングで GFP を検出した。 C） 単離したエクソソームを HEK293 細胞に添加し，24 時間後に蛍光顕微鏡で細胞内の GFP の局在を，細胞ライセートを用いウェスタンブロッティングにより GFP を検出 した。 XPack-Luciferase exosome luminescence Luminescence of target recipient cells treated with XPack-Luc exosomes Control exosomes XPack-Luc exosomes Untreated cells Cells + HEK exosomes Cells + XPack-Luc exosomes Luminescence (RLU) Luminescence (RLU) Control + XPack-Luc A B XPack-Luciferase（#XPAK532PA-1）を HEK293 細胞にトランスフェクションし， 48 時間後に ExoQuik-TC でエクソソームを単離した。 A） 回収したエクソソームのルシフェラーゼ活性を測定した。 B） 回収したエクソソームを HEK293 細胞に添加し，24 時間後に D-ルシフェリンを 用いてルシフェラーゼ発現量を測定した。 ■ HEK-293 Exosomes ■ XPack-CDKN1B Exosomes Rate of Cell Proliferation 5μg Exosomes 50μg Exosomes 100μg Exosomes 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 XPack クローニングベクター（#XPAK510PA-1）に，細胞周期阻害物質 CDKN1B 遺伝 子を導入後，HEK293 細胞にトランスフェクションし，48 時間後に培養液上清から ExoQuick-TC でエクソソームを単離した。単離したエクソソームを HEK293 細胞に添 加し，72 時間後に MTT アッセイを行った。 ※ExoQuick-TC については p.4 〜 5 をご覧下さい。 ［メーカー：SBI］ 商品コード プロモーター 包 装 価格（￥） XPAK510PA-1 CMV 10μg 118,000 XPAK710PA-1 MSCV ■クローニング用レンチウイルスベクター ［メーカー：SBI］ 商品コード レポーター プロモーター 包 装 価格（￥） XPAK530PA-1 GFP CMV 10μg 122,000 XPAK531PA-1 RFP XPAK532PA-1 Luciferase XPAK730PA-1 GFP MSCV 10μg 122,000 XPAK731PA-1 RFP XPAK732PA-1 Luciferase ■レポーター XPack 発現用レンチウイルスベクター ［メーカー：SBI］ 商品コード レポーター プロモーター 包 装 価格（￥） XPAK530VA-1 GFP CMV 1vial 122,000 XPAK532VA-1 Luciferase XPAK730VA-1 GFP MSCV 1vial 122,000 XPAK732VA-1 Luciferase ■レポーター XPack 発現用レンチウイルス 掲載されている製品はウイルスベクター関連製品のため，購入時にご使用者確認書が必要です。 ご注文の際は，フナコシホームページ（http://www.funakoshi.co.jp/document_download）に掲載の「ウイルスベクター関連製品ご使用 者確認書」に必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。 なお，製品をご使用の際には「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（カルタヘナ法）」および所属組織にお ける安全管理規定に従い，しかるべき施設で実験を行って下さい。詳細は文部科学省ライフサイエンス課のホームページをご覧下さい。http:// www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html ● ！ ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ● エクソソーム膜を標的とするペプチド配列“XPack”に任意のタンパク質を 結合させると，XPack とともにエクソソーム内にパッケージングされ，その 後エクソソームは細胞外へと分泌されます。 ● XPack-融合タンパク質を作製するためのクローニング用ベクターおよびレ ポーター発現用ベクターをご用意しています。いずれもレンチウイルスベース のベクターです。 ● 各ベクターにはピューロマイシン耐性遺伝子が組み込まれています。 ※レポータータンパク質（GFP/Luciferase）を取り込ませたエクソソームを発現する細胞株もあります。 詳細は Web をご覧下さい。 ※細胞培養の際にはエクソソームの混入が起きないよう，ウシ由来エクソソーム除去済み FBS（p.8 参照）をご使用下さい。 フナコシニュース 2017 年 5 月 15 日号（No.634） funakoshi news エクソソーム工学（輸送・導入・標識）本誌に掲載されている製品はすべて研究用です26 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected]
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目的タンパク質を内包したエクソソームを産生するシステムXPack Protein Packaging Vector
63244Webページ番号詳しくはWebで
特 長�
AmpR
pUC ORI
SV40 ORⅠSV40 poly-A
3’ΔLTRWPRE
EF1αMCS
XPack tag
MSCVCMV or
cPPT
RSV 5’LTR
XPackLentivectors
XPAK510PA-1 (CMV)XPAK710PA-1 (MSCV)
MCS5’-XhoⅠBamHⅠNotⅠEcoRⅠNheⅠPstⅠ- 3’
ベクターマップ
使用例�XPack-GFP localizationpattern during packing
XPack exosome Western blotControlexosomes
XPack-GFPexosomes
CETP Ab GFP Ab
Target cell delivery of XPack-GFP
Fluorescence target cell images Target cell lysate Western blots+ Controlexosomes
+ XPack-tagGFP exosomes
αGAPDH
αGFP
A
C
B
A）�XPack-GFP（#XPAK530PA-1）をHEK293 細胞にトランスフェクションし，24時間後に蛍光顕微鏡でGFPの局在を解析した。
B）�48 時間後，ExoQuick-TC を用いて培養液上清からエクソソームを単離し，ウェスタンブロッティングでGFPを検出した。
C）�単離したエクソソームをHEK293 細胞に添加し，24時間後に蛍光顕微鏡で細胞内のGFP の局在を，細胞ライセートを用いウェスタンブロッティングにより GFP を検出した。
XPack-Luciferaseexosome luminescence
Luminescence of target recipient cellstreated with XPack-Luc exosomes
Controlexosomes
XPack-Lucexosomes
Untreatedcells
Cells + HEKexosomes
Cells + XPack-Lucexosomes
Luminescence (RLU)
Luminescence (RLU) Control + XPack-Luc
A B
XPack-Luciferase（#XPAK532PA-1）を HEK293 細胞にトランスフェクションし，48時間後に ExoQuik-TC でエクソソームを単離した。A）�回収したエクソソームのルシフェラーゼ活性を測定した。B）�回収したエクソソームを HEK293 細胞に添加し，24 時間後に D-ルシフェリンを�用いてルシフェラーゼ発現量を測定した。
■ HEK-293 Exosomes ■ XPack-CDKN1B Exosomes
Rate of Cell Proliferation
5μg Exosomes 50μg Exosomes 100μg Exosomes
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
XPack クローニングベクター（#XPAK510PA-1）に，細胞周期阻害物質 CDKN1B 遺伝子を導入後，HEK293 細胞にトランスフェクションし，48 時間後に培養液上清からExoQuick-TC でエクソソームを単離した。単離したエクソソームをHEK293 細胞に添加し，72時間後にMTTアッセイを行った。
※ExoQuick-TC についてはp.4 〜 5をご覧下さい。
［メーカー：SBI］
商品コード プロモーター 包 装 価格（￥）
XPAK510PA-1 CMV10�μg 118,000
SBI145100
XPAK710PA-1 MSCV SBI147100
■クローニング用レンチウイルスベクター
［メーカー：SBI］
商品コード レポーター プロモーター 包 装 価格（￥）
XPAK530PA-1 GFP
CMV 10�μg 122,000
SBI145300
XPAK531PA-1 RFP SBI145310
XPAK532PA-1 Luciferase SBI145320
XPAK730PA-1 GFP
MSCV 10�μg 122,000
SBI147300
XPAK731PA-1 RFP SBI147310
XPAK732PA-1 Luciferase SBI147320
■レポーターXPack 発現用レンチウイルスベクター
［メーカー：SBI］
商品コード レポーター プロモーター 包 装 価格（￥）
XPAK530VA-1 GFPCMV 1�vial 122,000
SBI145302
XPAK532VA-1 Luciferase SBI145322
XPAK730VA-1 GFPMSCV 1�vial 122,000
SBI147301
XPAK732VA-1 Luciferase SBI147321
■レポーターXPack 発現用レンチウイルス
掲載されている製品はウイルスベクター関連製品のため，購入時にご使用者確認書が必要です。ご注文の際は，フナコシホームページ（http://www.�funakoshi.co.jp/document_download）に掲載の「ウイルスベクター関連製品ご使用者確認書」に必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。なお，製品をご使用の際には「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（カルタヘナ法）」および所属組織における安全管理規定に従い，しかるべき施設で実験を行って下さい。詳細は文部科学省ライフサイエンス課のホームページをご覧下さい。http://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html
●！ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意
●�エクソソーム膜を標的とするペプチド配列“XPack”に任意のタンパク質を結合させると，XPack とともにエクソソーム内にパッケージングされ，その後エクソソームは細胞外へと分泌されます。
●�XPack-融合タンパク質を作製するためのクローニング用ベクターおよびレポーター発現用ベクターをご用意しています。いずれもレンチウイルスベースのベクターです。
●�各ベクターにはピューロマイシン耐性遺伝子が組み込まれています。※レポータータンパク質（GFP�/�Luciferase）を取り込ませたエクソソームを発現する細胞株もあります。詳細はWebをご覧下さい。
※細胞培養の際にはエクソソームの混入が起きないよう，ウシ由来エクソソーム除去済み FBS（p.8 参照）をご使用下さい。
フナコシニュース2017年 5月 15日号（No.634）funakoshi news
エクソソーム工学（輸送・導入・標識）
本誌に掲載されている製品はすべて研究用です
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お問い合わせ先：〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected]
