Caracterización y valor pronóstico de la expresión de c-Myb y B-Myb en Leucemia Mieloblástica...
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Caracterización y valor pronóstico de la expresión de c-Myb y B-Myb en
Leucemia Mieloblástica Aguda
Laboratorio de Biología Molecular
Hospital La Fe
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Pertenecen a una familia de factores de trascripción
A-Myb Gónadas
B-Myb Ubicuo
c-Myb C.Hematoyéticas
B-Myb y c-Myb
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B-Myb Progenitor Ancestral
RegulaciónTrans-activaciónUnión-DNA
B-Myb progenitor ancestral
c-Myb y A-Myb se originaron por duplicación durante la evolución
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B-Myb y c-Myb
Cromosoma 6
c-Myb 6q23B-Myb 20q13
Cromosoma 20
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Ratones homocigotos
A-Myb inactivado
ViablesViables
C-Myb inactivado
Muerte etapa tardía in uteroFallo hematopoyesis
(anemia severa)
Muerte etapa tardía in uteroFallo hematopoyesis
(anemia severa)
B-Myb inactivado
Muerte etapa temprana in
utero
Muerte etapa temprana in
utero
Myb en Ratones
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B-Myb y c-Myb
“Correcta expresión”
Necesaria para función celular
Gen SupresorOncogen
B-Myb
Diferenciaciónterminal
Proliferación
c-Myb
Desregulación¿Desarrollo tumoral?
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Objetivos
1.-Cuantificación expresión de B-Myb y c-Myb
2.-Asociación expresión de B-Myb y c-Myb -
factores clínico-biológicos
3.- Valor pronóstico de B-Myb y c-Myb
En Pacientes con LMA:
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197 Leucemias Mieloblásticas Agudas
Pacientes I
Sexo (n,%)Hombre 114 (58%)Mujer 83 (42%)
Edad (mediana, rango) 57(17-91)
Leucocitos(mediana, rango) 8*103/L (1-342)
Blastos(mediana, rango) 40% (1-100)
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197 Leucemias Mieloblásticas Agudas
Pacientes II
Citogenética Favorable 30Intermedio 92Desfavorable 27No disponible 48
FAB (n)M0 15M1 32M2 37M3 24M4 32M5 17M6 8M7 3Sin clasificar 29
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Cuantificación Relativa de la expresión de B-Myb y c- Myb
Calibrador: Niveles CD34+
Muestras: Pacientes LMA
Cuantificación Relativa (δδCt= δCtmuestra- δCtcalibrador )
Métodos
B-Myb
Gus
TaqMan Expression Assay para B-Myb y c-Myb
mRNA obtenido de MO cDNA
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Resultados
Expresión respecto CD34+
c-Myb 0,26 (0,01-4,27)
B-Myb 2,46 (0,08-39,79)
P=0,001
LMA DXCD34
c-M
yb (
2e
xp d
elta
Ct)
10
5
0
B-Mybc- Myb
LMA DXCD34
B-M
yb
(2
exp
de
lta
Ct)
2
1
1
0
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FAB
m7m6m5m4m3m2m1m0
c-M
yb (
2 e
xp d
elta
de
lta C
t)
2
1
1
0
Resultados
c-Myb -Factores clinico-biológicosp
edad (años) >60<60
Sexo ns
Leucocitos>50000/uL<50000/uL
FAB <0,001
Riesgo Citogenético
FavorableIntermedioDesfavorable
Expresión c-Myb
ns
ns
nsNiveles de c-Myb reducidos :
mieloproliferación con aumento de trombopoyesis
The Embo journal 2009
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pedad (años)
>60<60
Sexo ns
Leucocitos>50000/uL<50000/uL
FAB 0,05
Riesgo Citogenético
FavorableIntermedioDesfavorable 0,048
Expresión B-Myb
ns
ns
desfavorableintermediofavorable
B-M
yb
(2
exp
de
lta
de
lta
Ct)
12
8
4
0
FAB
m7m6m5m4m3m2m1m0
B-M
yb
(2
exp
de
lta
de
lta
Ct)
20
15
10
5
0
Resultados
B-Myb- Factores clinico-biológicos
Niveles de B-Myb elevados:
•Asociación de con otros tumores: Neuroblastoma, mama, próstata•Malignidad
Cancer Research 1999, Eur J cancer 2005
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Resultados
Valor Pronóstico de las LMA no M3
MuerteResistenciaRC
%
100
80
60
40
20
0
2117
58
Expresión de c-Myb p=0,855
Expresión de B-Myb p=0,109
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Resultados
Valor Pronóstico de las LMA no M3
DÍAS
2000150010005000
SL
E
1,0
,9
,8
,7
,6
,5
,4
,3
,2
,1
> Mediana (n=36)
≤ Mediana (n=44)
B-Myb
DÍAS
2000150010005000
SL
E
1,0
,9
,8
,7
,6
,5
,4
,3
> Mediana (n=41)
≤ Mediana (n=39)
c-Myb
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Resultados
Valor Pronóstico de las LMA no M3
ANÁLISIS MULTIVARIANTE p HR IC 95%
Expresión B-Myb 0,039 2,33 (1,04-5,22)
Edad (≤ 60 años) 0,02 3,47 (1,57-7,77)
ANÁLISIS MULTIVARIANTE p HR IC 95%
Expresión B-Myb 0,043 3,24 (1,04-10,13)
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MECANISMOS MODIFICADORES DE LA ACTIVIDAD DE B-Myb
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1. miRNA
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miRNA
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miRNA
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miRNA
n=80Expresión
Western
16 15b
miRNAs-cMYB
0,76
1,08
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
0 1 2 3
30a 30b 30c 30d 30e 29a 29b 29c
miRNAs-bMYB
0,11
0,280,14
0,65
0,04
0,34
1,32
0,37
-0,200,000,200,400,600,801,001,201,401,60
0 2 4 6 8 10
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MIMICS & INHIBITORS
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2. POLIMORFISMO S427G
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• PCR Tiempo Real con sondas hibridación
POLIMORFISMO S427G
•Puesta a punto con sondas hibridación
•Grupo control n=46 analizados
Wild type
n=35
Homocigotosn=2
Heterocigotosn=2
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HRM región codificante
3. VARIACIONES GENÉTICAS
•14 exones
•Puesta a punto exones: 2, 3, 4, 5, 6, 9,12,14
Mutado
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n=35
4. ALTERACIONES GENÓMICAS
•2 pacientes con trisomia en el cromosoma 6 (+6)
EXP: 0.04 y 0.24
c-Myb:
FISH
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B-Myb:
n=7 •1 paciente con trisomia en el cromosoma 20 (+20) •3 pacientes con monosomía en el 20 (-20)
EXP: 6.45 EXP: 0.96, 8.31 y 2.03
ALTERACIONES GENÓMICAS
b-MYB
RP11-69I10RP11-354E16
RP11-464F7RP11-822E15*
FISHDeleciones
Traslocaciones