Candida versatilis の degenerate RT-PCRCandida versatilis の degenerate RT-PCR

100bp Marker100bp Marker SampleSample

2000bp2000bp

1000bp1000bp

500bp500bp

Ca++ ATPaseCa++ ATPase

解析予定解析予定

解析中解析中

解析中解析中

Cu+ ATPaseH+ ATPaseCu+ ATPaseH+ ATPase

酵母細胞膜の K と Na の取り込みと排出に関係する輸送系酵母細胞膜の K と Na の取り込みと排出に関係する輸送系

pHpHinin 6.8 6.8pHpHinin 6.8 6.8

pHpHoutout 3.0 3.0

Na+

PO43-

Pho89p(Pi/Na+ コトランスポーター )

Na+

Ena1p/Pmr2p(Na+ ポンプ )

ATP

ATP

H+

Pma1p(H+ ポンプ )

H+ K+

Trk1p/Trk2p(K+ 取り込み系 )

K+

K+

Duk1p/Tok1p(K+ チャネル )

　　　　　　　 NscIp( 陽イオンチャネル )

H+ Na+ K+

Nha1p(Na+/H+ アンチポーター )

Original by H. Sychrova

耐塩性酵母 Candida versatilis の細胞膜 ATPaseの遺伝子解析

耐塩性酵母 Candida versatilis の細胞膜 ATPaseの遺伝子解析

遺伝子名 Saccharomyces cerevisiae

Zygosaccharomy-ces rouxii

Candida versatilis

Na+/H+

アンチポーターNHA1 ZrSOD2,

ZrSOD22CvNHA1

H+ ポンプ PMA1 ZrPMA1 ?

Na+(K+) ポンプ ENA1/PMR2 ZrENA1 ?

Ca2+Mn2+ ポンプ PMR1/SPF1 ? ?

Cd2+Cu2+Fe2+ ポンプ PCA1/CCC2 ? ?

Mg2+(Al3+) ポンプ ALR1/ALR2 ? ?

Zn2+ ポンプ ZRT1/ZRT2 ? ?

マルチドラッグポンプ

PDR12/PDR5/YOR1 ? ?

味噌醤油諸味での微生物数の変動味噌醤油諸味での微生物数の変動

Bacillus 細菌耐塩性乳酸菌好塩性乳酸菌Zygosaccharomyces rouxiiCandida versatilis

醤油諸味中の微生物菌叢の変化

日数

1. 耐塩性乳酸菌や好塩性乳酸菌の生育により諸味の pH 低下

2. 酸性を好む酵母生育3. Z. rouxii 増殖　→ 主発酵酵母4. C. versatilis 増殖 → 後熟酵母

なぜ、２つの酵母種において増殖時期が異なる？

酵母細胞での浸透圧調節酵母細胞での浸透圧調節

グリセロール

C3 グリセロールC4 エリスリトールC5 アラビトールC6 マンニトール

パン酵母・酒酵母

食塩

味噌・醤油酵母（耐塩性酵母）

食塩

1. 酵母細胞が希薄な水溶液にある場合、細胞内に水が吸い込まれ、浸透圧が生じるが、表層に細胞壁があるので、細胞はダメージを受けない。

2. 酵母細胞が高濃度の塩分や糖質を含む環境にある場合、細胞内から水が流出し、生理的応答がなければ、細胞壁から細胞膜が外れる原形質分離が生じる。また、細胞内の物質が高濃度になり、代謝環境が悪くなる。

3. 酵母の場合、細胞外に塩分が存在する場合、その濃度に応答してグリセロールを合成、蓄積して浸透圧差を中和する。

4. 耐塩性酵母は、適合溶質の合成能が強く、さらに高濃度で蓄積できる。

酵母のホスホリパーゼ B 遺伝子酵母のホスホリパーゼ B 遺伝子

Saccharomyces cerevisiae PLB1, PLB2, PLB3, SPO1 (YMR008C, YMR006C, YOL011W, YNL012W)

Torulaspora delbrueckii PLB1Schizosaccharomyces pombe PLB1Candida utilis PLB1Kluyveromyces lactis PLB1Zygosaccharomyces rouxii PLB1Candida versatilis PLB1/PLB2Candida albicans PLB1/PLB2

Glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchorSecreated enzymesPeptide motifes related to a catalytic function

: SGGGXRA(M/L): GLSG(G/S)

: D(S/G)G(E/L)XXXN

リン脂質分解酵素の反応様式リン脂質分解酵素の反応様式

Phospholipases

酵母ホスホリパーゼ B のアミノ酸アライメント

酵母ホスホリパーゼ B のアミノ酸アライメント

酵母・カビの PLBs の系統樹酵母・カビの PLBs の系統樹

グルタミン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　 γ- アミノ酪酸（ GABA)

CO2

γ アミノ酪酸アミノトランスフェラーゼ　　　　　　　　 2- オキソグルタル酸

　コハク酸セミアルデヒド

NADP+

　　　　　　　　　　　　　　コハク酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ

NADPH 2- オキソグルタル酸 　　　　　　　　　　　 CO2 　　　　　 コハク酸

グルタミン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　 γ- アミノ酪酸（ GABA)

CO2

γ アミノ酪酸アミノトランスフェラーゼ　　　　　　　　 2- オキソグルタル酸

　コハク酸セミアルデヒド

NADP+

　　　　　　　　　　　　　　コハク酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ

NADPH 2- オキソグルタル酸 　　　　　　　　　　　 CO2 　　　　　 コハク酸

γ- アミノ酪酸経路γ- アミノ酪酸経路

GABaseGABase

グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ GDA ）グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ GDA ）

クエン酸回路

　原料（植物） 企業名、研究機関

米胚芽 オリザ油化㈱

カボチャ ロッテ電子工業㈱

玄米 前：中国農試、㈱ファンケル他

緑茶 ( 茶ｷﾞｬﾊﾞﾛﾝ ) 前：茶業試験場、㈱葉桐他

ケール、大麦若葉

㈱東洋新薬

米糠　 ( ﾊﾞｲｵﾘｱｸﾀｰ )

新潟県食品研究センター(片山食品が漬物に利用 )

アスパラガス ユニチカ

原　料 ( 微生物 )

　　　企業名、研究機関

乳酸菌 ㈱ヤクルト、㈱ファーマフーズ、　　㈱大阪生物環境科学研究所　他愛媛県工業技術センター ( 特許出願 )

乳酸菌＋酵母 フジッコ㈱

テンペ菌 池田糖化工業㈱

麹菌 ( カビ ) 栃木県産業技術センター、㈱カザミ　　

酵母 食品総合研究所

クロレラ クロレラ工業㈱

アガリクス ヤエガキ醗酵技研（株）　

納豆菌 ミツカン

微生物等を利用してＧＡＢＡを生成させる方法