Bioq. Carolina Cecilia Pedevilla Bioq. María Eugenia Tonelotto Hospital de Infecciosas “F. J....
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Bioq. Carolina Cecilia PedevillaBioq. María Eugenia Tonelotto
Hospital de Infecciosas “F. J.
Muñiz” Residencia Bioquímica y Microbiología
Criptococosis en Criptococosis en pacientespacientes
HIVHIV
CriptococcusCriptococcusneoformansneoformans
18951895
18961896
19161916
SanfeliceSanfeliceJugo DuraznoJugo Durazno
Busse BuschkeBusse Buschke1º Caso humano1º Caso humano
TorulopsisTorulopsis
193519351935
SaccharomycesSaccharomycesSaccharomycesneoformansneoformans
TorulaTorulahystoliticahystoliticaTorulaTorulahystoliticahystolitica SaccharomycesSaccharomyceshominishominis
SaccharomycesSaccharomyceshominishominis
2. Historia:
Introducción
CriptococcusCriptococcusneoformansneoformans
1950
19291929
Epidemiología
1ºReporte
193519351935
ReservoriosReservorios
ArgentinaArgentina
2. Historia:
Introducción
3. Justificación
Micosis sistémica oportunista + frecuente 6-13% pacientes infectados Pandemia del SIDA:
Incidencia ↑40 a 50 veces
TARGA
Muñiz (casos/año)
1985:2-31991: 80
2002, 130-150 nuevos
casos/año
15% HIV+ internadosCausa de muerte
↓incidencia
Introducción
4. Etiología: Género Cryptococcus: 37 especies. Patógenos: C. neoformans
C. laurentii C. albidus
Serotipos: A / B / C /
D /
A-Dvar grubiivar gatti
var gattivar neoformans
Introducción
5. Ecología y Epidemiología:Tabla n° 1: Variedades: Principales rasgos diferencialesCaracterística
s var neoformans
var grubii var gatti
Distribución Geográfica
Cosmopolita Áreas tropicales y subtropicales
Reservorios Deyecciones y nidos de palomas
Eucaliptus
Huésped Inmunosuprimidos
Inmunocompetentes
Introducción
5. Ecología y Epidemiología:Tabla n° 1: Variedades: Principales rasgos diferencialesCaracterística
s var neoformans
var grubii var gatti
Distribución Geográfica
Cosmopolita Áreas tropicales y subtropicales
Reservorios Deyecciones y nidos de palomas
Eucaliptus
Huésped Inmunosuprimidos
Inmunocompetentes
20%
Introducción
5. Ecología y Epidemiología:Tabla n° 1: Variedades: Principales rasgos diferencialesCaracterística
s var neoformans
var grubii var gatti
Distribución Geográfica
Cosmopolita Áreas tropicales y subtropicales
Reservorios Deyecciones y nidos de palomas
Eucaliptus
Huésped Inmunosuprimidos
Inmunocompetentes
var neorformans
Introducción
Introducción 5. Ecología y Epidemiología: Transmisión: vía inhalatoria Prevalencia:
Países desarrollados EEUU: 7-10% Europa: 3-5%
Países subdesarrollados Africa: 15-30% Argentina: 10-12%
1)Neumocistosis2)CMV3)Complejo MAI4)Criptococosis
TBC=Criptococosis
6. Factores de virulencia:
Cápsula: (-) fagocitosis
Compuestos Fenólicos
(DOPAMINA)
Fenoloxidasa
(-) Estallido Respiratorio
Melanina
Introducción
Introducción
7. Formas clínicas: CEREBRO
PULMÓN
IC: autolimitada asintomática
pulmón
IS:sintomáticadiseminada
SNC
MO
Riñón
Próstata
PIEL
PortaciónAsintomática
CriptococosisCutánea Primaria
Lesión Ulcerada en HIV+
Introducción8. Tratamiento Inicial: Anfo B (0.8 mg/kg/día)
Vía endovenosa↑Permeabilidad Nefrotoxicidad
Profilaxis, de por vida: Fluco (200mg/día)
Vía oral ó endovenosa (-) síntesis ergosterol Interacción con Rifampicina (TBC)
Estudios de laboratorio
Muestras clínicas:* LCR
* Hemocultivo (HMC)* Suero* Otras: Secreciones bronquiales
PAMO Biopsias
Escarificaciones de piel
Orina
Estudios de laboratorio
LCR
Físico-químico y Citológico
Estudios de laboratorio
CriptococosisCaracterísticas
Normales
Aspecto Límpido Límpido
Color Incoloro Incoloro
Proteínas N / Lig.↑ 10-40 mg/dl
Glucosa N / Lig. ↓ 40-50 mg/dl
Rto celularPleocitosis variable
0-5 células/mm³
Rto diferencial
Pred. mononuclear
Li: 95-100 %Mo: 0-3 % N:0-3%
Cél. End.: 0-3%
SIDA0-50 cel/mm3
HIV(-)20-200 cel/mm3
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
Estudios de laboratorio
1- Examen directo Tinta china
Otras tinciones
Gomori, Alcian Blue, HyE, etc
Falsos (+) Falsos (-)
RhodotorulaCandida
Criptoccoccus spLeucocitos
Variantes de Criptococos
25-50%HIV(-)
75%HIV(+)
Sensibilidad
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
Estudios de laboratorio
2- Cultivos:
Agar miel Sabouraud
Agar Infusión cerebro y corazón (BHI)
Agar estría
Agar semilla de girasol
Otros: AS, ACh
A. Sabouraud
Agar Estría
Agar GirasolBHI
Estudios de laboratorio
2-Cultivos:
Toda Mx
Sabouraud
BHI / Estría
28°C
37°C
28°CGirasolHMC
Lectura 21 díasLCR/día
HMC/2semResto/1sem
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
Estudios de laboratorio
3-Identificación bioquímica:
No fermentación de azúcares Asimilación de azúcares Producción de Ureasa
Producción de Fenoloxidasa Desarrollo a 28ºC y a 37ºC
Cryptococcus spp
Cryptococcus neoformans
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
Estudios de laboratorio
4-Determinación de Variedades:
Medio Salkin
Medio CBG
Asimilación de D-Pro y D-Trp
* Salkin:
Clicloheximida
Glicina
Rojo fenol
* CGB:
Canavanina
Glicina
Azul de Bromotimol
* Control Negativo
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
5-Detección Ag capsular (Suero/LCR/Orina)
Técnicas:
Aglutinación de partículas (AP)
ELISAFalsos (+) Falsos (-)
T. beigeliiFRNeoplasiasSepticemias
Prozona
Estudios de laboratorio
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
Estudios de laboratorio
6-Pruebas de sensibilidad
METODO DE REFERENCIA: (DOCUMENTO M27-A/CLSI)
CIM Microdilución en placas
CIM FALLO TERAPEUTICO
Estudios de laboratorio
Análisis micológicos
1- Examen directo 2- Cultivos
3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados
7. Interpretación de los estudios
Examen
Directoy/o
Cultivo Positiv
os
MuestrasSignificativas Potencialment
e Significativas
LCRSANGREBIOPSIAORINA
SECRECIONESRESPIRATORIAS
Estudios de laboratorio
7. Interpretación de los estudios
Ag capsular en Suero / LCR:
≥1/10 en suero → Significativo
> título → > nº Microorganismos
Valor predictivo → Tto
Estudios de laboratorio
17%
83%
Mujeres Hombres
Gráfico n°1: Criptococosis en el Hospital Muñiz: Distribución por Sexo (n=607)
Métodos de diagnóstico de la criptococosis asociada al SIDA. Dra.
Alicia Arechavala
29 años
SerotipoA
Discusión
Criptococosis: Complicación Tardía
Patologías asociadas 1. TBC2. Candidiasis3. Neumocistosis4. Infección por Herpes5. Diarrea6. Hepatitis7. Otras afecciones
Bajos CD4+
Discusión
Discusión
Muestras%
Positividad
Suero 95
LCR 93
Orina 79
Detección del Ag (AP) porcentaje de positividad
Discusión
Muestras Método % Positividad
LCRT. China 75Cultivos 91
SangreHemocultiv
o67
OrinaT. China 13Cultivo 22
Muestras y métodos: Porcentaje de Positividad
DiscusiónRelación entre Ag en suero y HMC
Título Ag HMC(+) HMC(-) Total
10000 89 18 1075000 38 13 511000 46 17 63100 33 40 7310 5 14 191 6 15 21
Negativo 7 7 14Total 224 124 348
DiscusiónRelación entre Ag en LCR y
cultivo del LCRTítulo Ag Cultivo
(+) Cultivo (-) Total
10000 34 - 345000 33 - 331000 86 5 91100 148 3 15110 39 5 451 53 2 55
Negativo 11 18 29Total 404 33 438
Discusión
Muestras%
Positividad
Suero 95
LCR 93
Orina 79
Detección del Ag (AP) porcentaje de positividad
Discusión
Muestras Método % Positividad
LCRT. China 75
Cultivos 91
Sangre Hemocultivo 67
OrinaT. China 13
Cultivo 22
Muestras y métodos: Porcentaje de Positividad
Discusión Seguimiento del tratamiento:
Títulos de Ag capsular en LCR Suero
Cultivo Éxito terapéutico:
Remisión cuadro clínico + 2 cultivos consecutivos LCR (-)
Criptococosis en pacientes HIV: Resumen
Infección generalizada
Diagnóstico de Certeza
Estudio micológico de LCRHemocultivo
Evaluación del Tratamiento
Pronóstico: Títulos de Ag capsularÉxito: Negativización de Cultivos
Agradecimientos especiales:
Dra Alicia Arechavala, Bioquímica (Unidad de Micología Hospital Muñiz) por el material ofrecido.
Bioq. Norberto Gomez, Jefe Laboratorio Central por permitirnos que
usurpáramos su oficina una y otra vez con el mismo tema!
Al laboratorio Central por estar presente cada uno aportando lo mejor para nosotras!
A los chicos: por TODO y TODOS los momentos que compartimos! GRACIAS!