Biologie moderne des leucémies aiguës myéloblastiques (LAM) C.Preudhomme Laboratoire...
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Biologie moderne des Biologie moderne des leucémies aiguës leucémies aiguës
myéloblastiques (LAM)myéloblastiques (LAM)
C.PreudhommeLaboratoire d’Hématologie AU524 Inserm Lille
Introduction
40 % des LAM : Anomalies cytogénétiques
Anomalies cytogénétiques
Identification de gènes Pronostic Diagnostic et suivi Physiopathologie Modèle murin
60 % des LAM : Identification d’autres mécanismes Identification d’autres gènes (analogie de fonction ou nouvelles technologies)
Ciblage thérapeutique moléculaire
2003Impact pronostique des anomalies chromosomiques
• Consensus international– Bon risque t(15;17) t(8;21) inv(16)
– Mauvais risque -5/5q- -7 3q t(9;22) t(6;9) complexe
– Intermédiaire caryo normal
• Résultats contradictoires 11q23
trisomie 8
autres trisomies
autres a.structure
Reste à définir sur grandes séries prospectives
Distribution des anomalies chromosomiques
varie avec l ’âge (St Jude -Schoch)
<2 ans enfants Adult <60 ans Adult >60 ans
t(8;21) 0% 14% 8% 2%
inv(16) 5% 6% 5% 3%
t(15;17) 0% 8% 6% 3%
41% 9% 5,3%t(9;11) 18% 6% 2%
autres 11q23 23% 3% 3% 0,8%
Normal 10% 20% 40% 40%
Complex - < 10% 15% 30%
MRC10t(8;21)
t(15;17)
inv(16)
normal
•anomalies isolées
•associées à risque intermédiaire
•associées à mauvais risque
Caryotype complexe
Définition variableMRC >=5 anomaliesEORTC/GIMENA >=4 anomaliesAutres groupes >=3 anomalies
Basé sur résultats caryotype (cytogénétique conventionnelle)
Fréquence augmente avec âge
enfant <10%
adulte 8-10%
>60 ans 18-30%
Que contient un caryotype complexe ?
Schoch GCC 2002;35:20
-5/5q-
-7/7q-
17p-
18q-, 12p- … moins fréquents
souvent combinées (24% : les 3 délétions)
Pertes >>>> gains
15%-20% des cas : absence d’anomalie 5/ 7/ 17
Impact pronostique du caryotype complexe
MRC10
15-56 ans
MRC11
s.âgés
MRC
German AML cooperative group
retrouve le mauvais pronostic >=3 anomalies
chez <60 ans et > 60 ans
Schoch BJH 2001; 112: 118
Les 11q23/MLL
Distinction t(9;11)(p21;q23) et les autres 11q23/MLL
St Jude JCO 2002; 20: 2302
LAM enfant
Les 11q23/MLLLAM adulte
MRC
•MRC10 1998: tous 11q23/MLL dans groupe intermédiaire
•ASH2002: tous 11q23/MLL restent dans groupe intermédiaire
CALGB
•t(9;11) dans groupe intermédiaire
•autres 11q23 dans groupe mauvais pronostic
SWOG
•tous les 11q en mauvais pronostic
BGMT95
•11q23/MLL autres que t(9;11) mauvais pronostic
Les 11q23/MLL
Seul screening FISH systématique recommandé
(arbre décisionnel LAM)
FISH double couleur
•cellules interphasiques=southern (sauf ITD MLL)
•cellules métaphasiques: identification partenaire
Répertorier tous les partenaires MLL
Déterminer le pronostic de chaque translocation
AML1
SCL
AML1RUNX1/CBFA2/PEBP2aB
AML2RUNX3/CBFA3/PEBP2aC
AML3RUNX2/CBFA1/PEBP2aA
Hématopoïèse
ossification
Développementtractus gastro-intestinal
Fonction principaleGènes
Les Core binding Factor : 3 sous unités et une seule
1 domaine en commun : le domaine RUNT
« Wing »
« Tail »
CBF
ADN
Runt
A’-B
• domaine Ig-like, semblable à p53, NF-B, STATs
Le domaine Runt
• 128 AA très conservés
• Fixation à l’ADN et association avec CBF
• Reconnaissance d’un motif PyGPyGGTPy
R80
R177R174
• Forte homologie avec le gène runt de la drosophile
• Rôle pivot dans l’hématopoïèse : souris KO aml1 -/- non viables
• Contrôle l’expression de nombreux gènes :
IL3, récepteur M-CSF, myéloperoxydase (MPO)…
chaînes ,, et du TCR (T Cell Receptor)
inhibiteur de kinase cycline-dépendante p21WAF1
Fonctions de AML1
• Fonction: Régulation de la croissance et de la différenciation des granulocytes
MPOIL3GM-CSFM-CSF RTCR
RUNX1
CBF
LEF-1
CEBP
ALY
CREB
P300 / CBP
P-CAF
RHD
Ac
Ac
Ac
Acetylation
PU.1 c-MYB
Effet activateur
Effet inhibiteur
NMLiaison à la matrice nucléaireco-localisation avec la RNA pol
EAR2453
RHD NLS VWRPY
351 381
TAD
Fixation répresseur TLE
mSin3A
P21 WAFet autres...
+
-
Core Binding Factor (CBF) fréquemment réarrangé dans les leucémies
t(8;21)(q22;q22) AML1-ETO (MTG8) LAM
inv16(p13;q22) CBFb -MYH11 LAM
t(16;21)(q24;q22) AML1-MTG16 LAM
t(8;21)(q24;q22) AML1-ETO2 (TRPS1) LAM
t(19;21)(q13;q22) AML1-AMP19 LAM
t(3;21)(q26;q22) AML1-EVI1, AML1-MDS1, AML1-EAP LMC, SMD
*
t(12;21)(p12;q22) TEL-AML1 (AML1-ETV6) LAL
Altération par translocations
Différents partenaires
*
Déacétylation, répression
AML1
Bcl2M-CSF R
GM-CSFTCRTGFCEBP
ETO
RHD
mSin3A
N-CoR
HDAC
ETO
MTGR1ETO2
MTG16
Conséquences fonctionnelles
Altération par translocations
T(8,21) et INV(16)
• Cytogénétique
• FISH ou RQPCR si
echec de caryo t(8;21) et M1/M2/M4
idem+normal si inv(16)
Mutations constitutionnelles de aml1
Familial Platelet Disorder (FPD)
prédisposition LAM
altération = délétion, mutations faux-sens ou non-sens
haploinsuffisance : Song et al. Nat.Genet. 2000
Mutations constitutionnelles
Mutations acquises et hémopathies malignes (1)
~6,5% dans les HM (> 900 patients)
20-25% dans les LAM0 (34/142)Osato et al. Blood 1999Yeoh et al. ASH 2000Preudhomme et al. Blood 2000Langabaer et al. GCC2002
35% dans les HM associées à Tri 21 acquises
30-40% dans les SMD secondaires (radiothérapie, chimiothérapie)
Mutations acquises
La protéine C/EBP
Facteur de transcription indispensable à la différenciation myéloïde.
Fixation sur les régions promotrices du G-CSF R, GM-CSF R, MPO,...
C/EBP(1)
• Protéine C/EBP
C/EBP(2)
Coopération avec d ’autres facteurs AML1, CBF, PU-1...
C/EBP (4)
• 2 domaines de transactivation• 1 domaine ZIP : Liaison au DNA
Dimérisation• 2 ATG d ’initiation
Protéines de 42 ou de 30kD. • Effet dominant négatif de la 30kD.
• Protéine C/EBP
bZIPTAD1 TAD2
30 Kd42 Kd
LAM et mutations de CEBPA (3)
• Pabst et al, Nature Genetics, vol 27, March 2001
7 % mutations (10/137) dans les LAM.16% (5/30) dans les LAM2 sans t(8/21).
• Gombart et al, Blood, vol 99, February 2002
408 échantillons de tumeurs toutes confondues.11 patients mutés:
8/78 LAM1/92 SMD (1 AREB-T)1/36 cancer pulmonaire à petites cellules.1/33 cancer de la prostate
Descriptif des Mutations de CEBPA
1er groupe: Mutants N-Ter
70 97 127 200 278 358
Forme de 30kD: Patients 1 à 12
Wild type
Patients 1, 8, 11
Patients 2, 9
Patients 4, 6, 12
Patient 5
Patient 10
Patient 7
Patient 3
159
107
59
TAD1 TAD2 bZIP
• 42kD tronquée• 30kD Dominant négatif
TAD2 bZIP
Descriptif des Mutations de CEBPA
70 97 127 200 278 358Wild type
Patient 12, 13313
TAD1 TAD2 bZIP
Patient 7, 9, 10, 11, 14, 15
70 97 127 200 278 358Wild type
Patient 15
Patient 8
383
TAD1 TAD2 bZIP 2ème groupe: Mutants C-Ter
Fixation au DNA ou dimérisation altérée
3ème groupe: partie centrale
Domaine bZIP amputé
C/EBP :survie globale
C/EBP muté = amélioration de la survie globale
C
um
ula
tive p
erc
en
tag
e
0 2 4 6 8 10
0
25
50
75
100 .|||
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years At risk:
0 178 67 40 18 4 1 1 23 17 7 2 1 0
Logrank P=.03
0 178 117 1 23 10
N O
CEBP MutéCEBP WT
P=0.03
A dominant-negative mutant of C/EBP, associated with acute myeloid leukemias, inhibits differentiation of myeloid and erythroid progenitors of man but not mouse
Maike Schwieger, Jürgen Löhler, Meike Fischer, Uwe Herwig, Daniel G. Tenen and Carol Stocking
Blood, 1 April 2004, Vol. 103, No. 7, pp. 2744-2752.
C/EBPp30, a myeloid leukemia oncoprotein, limits G-CSF receptor expression but not terminal granulopoiesis via site-selective inhibition of C/EBP DNA binding
Rebecca Cleaves, Qian-fei Wang and Alan D Friedman1
Blood. 2004 Apr 1;103(7):2744-52. Epub 2003 Dec 04.
C/EBP
AML1-ETO et leucemogénèse :nécessaire et/ou suffisant ? (1)
Miyamoto et al. PNAS 2000
HSC: cellules souches; CLP: progéniteurs lymphoides
MRD+ chez les patients en longue RC
Altération par translocations
AML1-ETO Knock/In absence d’hématopoièse fœtale hépatique mort des souris (Downing, Zhang, August, 2001, vol98,n°18)
Souris transgèniques AML1-ETO avec promoteur myeloide-spécifique
Expression dans le compartiment myéloide hématopoièse normale
Si traitement ENU (mutation dans l ’ADN)
AML1-ETO seul ne suffit pas
Altération par translocations
LA
AML1-ETO et leucemogénèse :nécessaire et/ou suffisant ? (2)
Class II Mutations
AML1/ETO, PML/RARa,AML1/ETO, PML/RARa,
C/EBPa lossof functionC/EBPa lossof function
Class I Mutations
BCR/ABL, FLT3-ITDBCR/ABL, FLT3-ITD
Therapy : eg, ATRATherapy : eg, imatinib mesylate, FTL3 inhibitors AMLAML
Blocage de differenciation + prolifération
FLT3C-KitRAS
FLT3
Domains
SP : Signal Peptide
TM : Transmembrane
TK : Tyrosine Kinase
KI : Kinase Insert
CT : C-termJM domain duplications (Y591/Y599) Duplications
Leaves TK domain in frameDominant positive mutations
- Class III receptor tyrosine kinase (KIT, FMS, PDGFR)- Expressed on hematopoietic stem cells- Ligand (FL) expressed on stroma cells
SP TM JM TK1 KI CTTK2CN
Exon 10 Exon 11 Exon 12
11F 12R
835/836
FLT3 review (Kottaridis et al, BJH 2003)(3)
n %
Thiede et al 979 20.4 - hyperleucocytose
- M3V
Schnittger et al 1003 23.5 - M5
- M2
Kattaridis et al 854 27 - caryotype normal
-11q23 <0.5%
- t(6,9)
- Rare CBF Pas d’influence sur la RC, des rechutes
RAS
• 3 gènes : N, K, H RAS
• Mutations codons 12, 13, 61, autres
• LAM : N>K>H RAS
• 10 à 15% de mutations (25% dans les CBF)
Valeur pronostique contreversée
Bilan : selon le caryotype
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Population
générale
Mutations
FLT3
Mutations
Ras
Mutations
CEBPa
ND
Déf avorable
I ntermédiaire
Favorable
Groupes pronostiques (1)
Selon le caryotype (MRC)
C
um
ula
tive p
erc
en
tag
e
0 2 4 6 8 10
0
25
50
75
100 .||
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years At risk:
1 26 10 8 2 0 0 2 136 67 35 16 5 1 3 23 3 1 0 0 0
Logrank P<.001
1 26 11 2 136 81 3 23 21
N O
favorable
intermédiaire
défavorable
P=0.30 (NS)
OS
Groupes pronostiques (3)
Conclusion : Nouvelle classification proposée :
P=0.006
C
um
ula
tive p
erc
en
tag
e
0 2 4 6 8
0
25
50
75
100 . |||
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.
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years At risk:
1 38 22 13 4 1 2 115 54 29 13 3 3 30 4 2 1 1
Logrank P<.001
1 38 13 2 115 73 3 30 26
N O
Groupe 1
Groupe 3
Groupe 2
groupe 1 : MRC1, CEBP+, FLT3-
groupe 2 : MRC2, RAS- et gpe 1 FLT3+,
groupe 3 : MRC 3, RAS+
OS
C-Kit
• Récepteur Stem Cell Factor
• Mutation ponctuelle dans mastocystose (codon 816)
• LAM : 1,5% mutation mais
inv(16) : 10-25% délétion exon 8 ; 5% D816
t(8;21) : 5% délétion exon 8 ; 5% D816
Associé à un risque de rechute augmenté
Survie et rechute des LAM avec mutation de c-Kit exon 8
D’après Care et al. , Br J Haematol, juin 2003
All t(8;21) inv(16)N=81 N=58 N=33
Age (y) 33 [.8-60] 30.5 [4-58] 34 [.8-60] NSSex Ratio (M/F) 44/37 29/19 5/18 NSWBC (G/L) 21 [1.7-257] 13.4 [1.7-155] 58.6 [4-257] p=.0001
Mutations
KIT 15% (11/74) 11% (5/42) 19% (6/32) NS Ex8 11% (8/74) 7% (3/42) 16% (5/32) NS D816 4% (3/74) 4% (2/49) 3% (1/32) NS
FLT3-D835 6% (5/81) 4% (2/48) 9% (3/33) NSRAS 21% (15/71) 11% (4/38) 33% (11/33) p=.02N-RAS 16% (12/73) 8% (3/40) 27% (9/33) p=.03K-RAS 6% (4/71) 3% (1/38) 9% (3/33) NS
0
,2
,4
,6
,8
1
0 2 4 6 8 10
0
,2
,4
,6
,8
1
0 2 4 6 8 10E
FS
OS
Years Years
RTK-
RTK+
RTK-
RTK+
P=.004P=.0007
CBF
0
,2
,4
,6
,8
1
0 2 4 6 8 10
0
,2
,4
,6
,8
1
0 2 4 6 8 10
P=.0007 P=.06
OS
OS
RTK-
RTK+
RTK-
RTK+
t(8;21) inv(16)
YearsYears
RR P valueRTK Mutation 3.50[1.56-6.85] .002CBF (t(8;21) vs inv16) 3.03[1.01-8.39] .04Age* 1.005[.998-1.012] NSWBC* 1.005[.982-1.030] NS
Multivariate analysis (OS)
*continuous variables
BAALC (Brain And Acute leukemia cytoplasmic)
- Localisé en 8q22.3
- Corrélation entre +8 et hyperexpression de BAALC
- Baldus et al, Blood 2003
80 caryotypes normaux
< 60 ans
CAL GB 9621
- Résultats
• pas de différence age, sexe, flt3, NP, Hb mais BAALC faible : leuco et M5
• pas influence sur RC
• BAALC survie : 1.7 VS 5.8 years
EFS : 0.8 VS 4.9 years
DFS 1.4 VS 7.3 years
- Facteur pronostic indépendant
D’après Baldus et al, Blood 2003
EVI 1- Localisé en 3q26
- Anomalies rares mais de mauvais pronostic
- t(3;3) ou inv(3) hyperexpression EVI 1 et/ou EVI 1-MDS1
- Groupe Hollandais, Blood 2003
• 319 patients
• RQ-PCR : EVI 1 + MDS1 - 6 patients Groupe I
EVI 1 + MDS1 + 26 patients Groupe II
EVI 1 - MDS1 + 12 patients Groupe III
EVI 1 - MDS1 - 275 patients Groupe IV
- EVI 1 : lié à caryotype défavorable
- lien avec 11q23
- groupe I et II : pronostic très défavorable
Ÿ Courbes de survie
0 1000 2000 3000 4000
RFS_jrs
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
Cu
m S
urv
ival
FLT3_quali_median
,00
1,00
,00-censored
1,00-censored
Survival Functions
0 1000 2000 3000 4000
RFS_jrs
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
Cu
m S
urv
ival
HoxA9_quali_media
n
,00
1,00
,00-censored
1,00-censored
Survival Functions
p = 0,01 p = 0,008
ETUDE DU PHENOTYPE ETUDE DU PHENOTYPE MDRMDR
P.Lepelley - Laboratoire d ’Hématologie - CHU de LILLE
22 oct 2003
PHENOTYPE MDRPHENOTYPE MDR• Expression cellulaire de protéines de
transport • Efflux et/ou redistribution intracellulaire• Résistance croisée• - Glycoprotéine-P (MDR1) - MRP
(multidrug resistance associated protein)
• - LRP (lung resistance protein) - BCRP (breast cancer resistance protein)
• Modulation par agents pharmacologiques
Etudes discordantes : problèmes méthodologiques
Expression de PgP,MRP,LRP,BCRPExpression de PgP,MRP,LRP,BCRP
BCRP
Fréq Pronostic Fréq Pronostic Fréq Pronostic Fréq
LAM de novo40% (20-
75)+
40% (10-50)
+/- 30% +/- 30%
Rechutes 80% 90% 50-70%
>55 ans 70%
SMD acutisés 80% + 60%
PGP MRP LRP
Intérêt pronostic de la PgP
TEST FONCTIONNEL D ’EFFLUX DE LA TEST FONCTIONNEL D ’EFFLUX DE LA RHODAMINE 123RHODAMINE 123
Rh123 (200ng/ml) 45mn 20°C
Efflux 2H 37°C + Vérapamil (10g/ml)
Spécifique de la Pgp
MRP: efflux+/- > 4h non inhibé par
Vp
•Marqueur mitochondrial (523nm)
•2 temps:
Accumulation (A)
Efflux (E) +/- Vérapamil(V)
PhénotypePhénotype MDR / PgP dans les MDR / PgP dans les LAM et SMD (247pts)LAM et SMD (247pts)
LAMdiag(M0,DMP,C.cpl..
LAM enrechute
LAMinduites
SMDacutisés
SMD(areb, -T,Lmmc)
nb pts 83 61 22 32 49
Pgp 78% 67% 85% 86% 85%
Rh123 63% 56% 91% 69% 80%
Corrélation avec l ’age (p<0.001) et avec CD34 (p < 0.001)
Age moyen: 56 ans, 96 pts<55 ans - 151 pts >55 ans
20 cas (9 neg) étudiés au diag et en rechute/acutisation pas de conversion
FACTEURS PRONOSTIQUES DES LAFACTEURS PRONOSTIQUES DES LA
LAM
• Age
• Leucocytose
• Cytogénétique
• “FAB” + DMP
• 2ème VS de novo
+ mutations :FLT3 RASCEBPA P53c.Kit Autres
LAL
• Age
• Leucocytose
• Cytogénétique
• Phénotype
préthérapeutique
chimiosensibilité
• Délai de RC
•Maladie résiduelle
• Délai de RC
• Chimio sensibilité
• Maladie résiduelle
LA MALADIE RESIDUELLE
Temps
Rémission complète
Clinique
Nombrede blastes
1011
1010
1012
Cytologie
Chimiothérapie
PCR
10-2
10-5
INTERETS DU SUIVI DE LA MALADIE INTERETS DU SUIVI DE LA MALADIE RESIDUELLE PAR RQ-PCR DANS RESIDUELLE PAR RQ-PCR DANS
LES LEUCEMIES AIGUES LES LEUCEMIES AIGUES MYELOIDES PRESENTANT UNE MYELOIDES PRESENTANT UNE
TRANSLOCATION t(8;21)TRANSLOCATION t(8;21)
MATERIEL ET METHODESMATERIEL ET METHODES
I. PATIENTSI. PATIENTS
29 patients suivis 29 patients suivis au CHRU de Lille au CHRU de Lille
(1994 - 2003)(1994 - 2003)
235 prélèvements 235 prélèvements sanguins et médullairessanguins et médullaires
27 échantillons 27 échantillons concomitants de concomitants de
moelle et de sangmoelle et de sang
Age médian : 46 ansAge médian : 46 ans21 patients 21 patients homogèneshomogènes
2 allogreffes2 allogreffes
5 LAM15 LAM120 LAM220 LAM2 1 LAM41 LAM4
3 inconnus3 inconnus
2 interruptions 2 interruptions thérapeutiques thérapeutiques
précocesprécoces
RESULTATSRESULTATS
I. ANALYSE GLOBALEI. ANALYSE GLOBALE
PatientsPatients
100% de rémission complète en post-induction100% de rémission complète en post-induction
10 patients rechutent (10 à 37 mois après le diagnostic)10 patients rechutent (10 à 37 mois après le diagnostic)
Survie globale moyenne : 101 moisSurvie globale moyenne : 101 mois
Survie moyenne sans rechute : 70 moisSurvie moyenne sans rechute : 70 mois
Résultats de RQ-PCRRésultats de RQ-PCR
8 échantillons exploitables par patients. 28,5 mois de médiane de suivi8 échantillons exploitables par patients. 28,5 mois de médiane de suivi
Valeur médiane du taux de transcrit au diagnostic : 9.10Valeur médiane du taux de transcrit au diagnostic : 9.10-1-1 (0,23 à 31,3) (0,23 à 31,3)
Valeur médiane du taux de transcrit à la rechute : 4,86.10Valeur médiane du taux de transcrit à la rechute : 4,86.10-1-1 (2,3.10 (2,3.10-3-3 à 24,6) à 24,6)
III. COURBES DE MR DES 21 PATIENTS HOMOGENESIII. COURBES DE MR DES 21 PATIENTS HOMOGENES
Catégorisation des patientsCatégorisation des patients
RESULTATSRESULTATS
3 groupes identifiés en fonction de l’évolution des courbes de suivi : 3 groupes identifiés en fonction de l’évolution des courbes de suivi :
Groupe A : 8 patientsGroupe A : 8 patients
Patient A3
Mois
0 2 4 6 10 15 20 25 30 35 40 45 50
Ma
lad
ie R
és
idu
elle
1e-6
1e-5
1e-4
1e-3
1e-2
1e-1
1e+0
1e+1
Patient A4
Mois
0 2 4 6 9 12 15 18 21 24 27
Ma
lad
ie R
és
idu
elle
1e-6
1e-5
1e-4
1e-3
1e-2
1e-1
1e+0
1e+1
Groupe A : 1 seule rechuteGroupe A : 1 seule rechute
MR < 10MR < 10-5-5 en post-induction en post-induction
RESULTATSRESULTATS
Groupe B : 7 patientsGroupe B : 7 patients
MR < 10MR < 10-5-5 dans les 6 premiers mois dans les 6 premiers mois
Patient B5
Mois
0 2 4 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33
Ma
lad
ie R
és
idu
elle
1e-6
1e-5
1e-4
1e-3
1e-2
1e-1
1e+0
1e+1
Patient B6
Mois
0 2 4 6 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Ma
lad
ie R
ésid
ue
lle
1e-6
1e-5
1e-4
1e-3
1e-2
1e-1
1e+0
1e+1
Groupe B : 0 rechuteGroupe B : 0 rechute
RESULTATSRESULTATS
Groupe C : 6 patientsGroupe C : 6 patients
Pas de MR < 10Pas de MR < 10-5-5 dans les 6 premiers mois dans les 6 premiers mois
Patient C4
Mois
0 5 10 15 20 25 30 35
Ma
ladie
Ré
sidue
lle
1e-6
1e-5
1e-4
1e-3
1e-2
1e-1
1e+0
1e+1
Patient C5
Mois
0 2 4 6 8 10
Maladie R
ésiduelle
1e-6
1e-5
1e-4
1e-3
1e-2
1e-1
1e+0
1e+1
Groupe C : 5 rechutesGroupe C : 5 rechutes
Catégories établies en fonction de la MR à 6 moisCatégories établies en fonction de la MR à 6 mois
RESULTATSRESULTATS
Mois
100806040200
Su
rvie
Cu
mu
lée
1.2
.9
.6
.3
0.0
Temps avant rechute / Catégories
p = 0,00001
1 / 15 *
5 / 6 *
* : nbre de rechute
: patients du groupe A + B
- - - : patients du groupe C
différence très significativedifférence très significative
absence de passage de MR sous 10absence de passage de MR sous 10-5-5
dans les 6 moisdans les 6 mois
= = facteur de mauvais pronosticfacteur de mauvais pronostic
Facteurs pronostiques identifiésFacteurs pronostiques identifiés
RESULTATSRESULTATS
Catégories établies en fonction de la MR post-inductionCatégories établies en fonction de la MR post-induction
- MR > 10MR > 10-3-3 en post-induction en post-induction
- Chute < 3 log en post-inductionChute < 3 log en post-induction
différence très significativedifférence très significative
= = facteur de mauvais pronosticfacteur de mauvais pronostic
: patients dont la MR post-induction est < 10-3
---- : patients dont la MR post-induction est > 10-3
Mois
100806040200
Su
rvie
Cu
mul
ée
1.2
.9
.6
.3
0.0
PFS / valeur MR post-induction(seuil = 10-3)
p = 0,006
5 / 8 *
* : nbre de rechute
1 / 10 *
Mois
100806040200
Su
rvie
Cu
mul
ée
1.2
.9
.6
.3
0.0
p = 0,01
PFS / perte 3 log de MR après l’induction
: patients perdant + de 3log de MR après l’induction
---- : patients perdant - de 3log de MR après l’induction
4 / 6 *
* : nbre de rechute
2 / 12 *
RESULTATSRESULTATS
V. COMPARAISON MR MOELLE ET SANGV. COMPARAISON MR MOELLE ET SANG
27 prélèvements concomitants de moelle et de sang27 prélèvements concomitants de moelle et de sang
Différence MRDifférence MRmoellemoelle - MR - MRsangsang : entre -1,27 et +1,37 ; moyenne à -0,13 : entre -1,27 et +1,37 ; moyenne à -0,13
Valeurs de MR des paires sang / moelle
1,E-06
1,E-05
1,E-04
1,E-03
1,E-02
1,E-01
1,E+00
1,E+01
Doublons MO + SG
MR
/ K
asum
i
moelle
sang
y = 2,0894x1,0539
R2 = 0,9526
1,E-07
1,E-06
1,E-05
1,E-04
1,E-03
1,E-02
1,E-01
1,E+00
1,E+01
1,E+02
1,E-07 1,E-06 1,E-05 1,E-04 1,E-03 1,E-02 1,E-01 1,E+001,E+011,E+02
MR Moelle
MR
San
g
Coefficient de détermination à 95%Coefficient de détermination à 95% = MR= MRmoellemoelle et MR et MRsangsang comparables comparables
Scnittger et al,
BLOOD, 2003
Krauter et al ,
JCO 2004
Others transcriptsOthers transcripts
• Very few data
• * MLL AF9
* multiple splice site : difficult
* scholl et al : GCC, November 2003
• 8 patients + 2 cell lines
• Feasibility of RQ PCR : OK
• But sensitivity : LOW
* less than 20 samples analyzed
No clinical relevance demonstrated
WT1WT1
• Tumor suppressor gene located on chromosome 11p13
• Involved in pathogenesis of wilms tumor
• High expression in ovary, testis, spleen
• Expression observed in more than 80% of AML
• Expression low in PB but variable in BM
• Qualitative RT PCR : few interest for MRD
• RQ PCR : more interesting in PB than in BM
Cillioni et al, Leukemia,2002
FLT3
Domains
SP : Signal Peptide
TM : Transmembrane
TK : Tyrosine Kinase
KI : Kinase Insert
CT : C-termJM domain duplications (Y591/Y599) Duplications
Leaves TK domain in frameDominant positive mutations
- Class III receptor tyrosine kinase (KIT, FMS, PDGFR)- Expressed on hematopoietic stem cells- Ligand (FL) expressed on stroma cells
SP TM JM TK1 KI CTTK2CN
Exon 10 Exon 11 Exon 12
11F 12R
835/836
Kottaridis
Maladie résiduelle dans les leucémies aiguës myéloïdes:
approche cytométrique
L. Campos
P. Flandrin
Laboratoire d ’Hématologie
Hôpital Nord - CHU de St. Etienne
Phénotypes associés à la leucémie
• Expression croisée d’antigènes: marqueurs lymphoïdes sur cellules myéloïdes (ou inverse).
• Expression asynchrone d’antigènes: coexpression d’antigènes de maturité et d ’immaturité d’une même lignée.
• Surexpression antigénique: augmentation d ’expression d ’un antigène sur une cellule.
• Cellules exprimant des propriétés aberrantes en taille et structure.
Orfao et San Miguel (Blood 2001):
126 LAM en rémission complète,
après la chimiothérapie d ’induction,
>10-2 : élevé
10-3-10-2 : intermédiaire
10-3-10-4 : faible
< 10-4 : très faible
Survie sans rechute à 3 ans:
Venditti ( 2002):
56 patients,
après chimiothérapie d ’induction et de consolidation,
résultats:
après induction: taux cellules avec phénotype aberrant = 4.5 x 10-4. (seuil)
> 4.5 x 10-4 : 53 % de rechute
< 4.5 x 10-4 : 40 % de rechute .
après consolidation: taux = 3.5 x 10-4.
> 3.5 x10-4 : 77 % de rechute.
< 3.5 x10-4 : 17 % de rechute.
L ’étude de la maladie résiduelle après consolidation semble + prédictive du risque de rechute.
Probabilité de survie en fonction de MDR après consolidation (Venditti, 2000)
Laboratoire d’Hématologie A Calmette U524 InsermA. CossonN. GrardelJ.P. KerckaertP. LepelleyH. Leroy C. RocheC. RoumierV. SoenenTechniciens
Cliniciens MDS CHRU LilleF. Bauters S. De BottonB. Quesnel« P. Fenaux »
J. AndrieuxJ.L. Laï
Membres du Groupe ALFAMembres du GBMHM« Intergroupe LAM »
Laboratoire de Génétique Médicale CHRU Lille