Biologia molecolare nel linfonodo sentinella
Transcript of Biologia molecolare nel linfonodo sentinella
Lezione di Anatomia Patologica
BIOLOGIA MOLECOLARE
NEL LINFONODO SENTINELLA
Luigia Macrì
Università degli Studi di Torino
AO-U San Giovanni Battista
di Torino
Linfonodo
Sentinella
1. Cos’è il linfonodo sentinella?
Il Linfonodo Sentinella è il
primo linfonodo che riceve la
linfa da un tumore ed è quello
che più probabilmente viene
colonizzato dalle cellule
tumorali, dando origine alle
“METASTASI” linfonodali.
Sentinella
2. Chi esamina il linfonodo sentinella?
L’ANATOMO PATOLOGO è il
medico che con un esame al
microscopio valuta la presenza
di metastasi nel Linfonodo
Sentinella.
3. Quando può essere esaminato?
La diagnosi al microscopio sul Linfonodo Sentinella, per
definire se ci sono o meno metastasi, viene effettuata
dall’anatomo patologo dopo
o durante l’intervento.
In questo caso si parla di esame intraoperatorio .
EE
ICC
2 mm
2 mm
LINFONODO SENTINELLA
FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA
RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE
UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA
J Clin Pathol 2004;57:695–701.
Le procedure anatomo-patologiche per la valutazione del LS
mancano di standardizzazione
• riduzione macroscopica
• utilizzo dell’esame al congelatore
• numero di sezioni istologiche da esaminare
• utilizzo di colorazioni ancillari
• stesura del referto
Based on AJCC/UICC TNM, 7th edition
Protocol web posting date: October 2009
(sn): Valutato il solo linfonodo(i) sentinella. Se vengono asportati 6 o più linfonodi sentinella e/o
linfonodi non sentinella, questa sigla non dovrebbe essere utilizzata.
pN0Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, non ulteriori
valutazioni per cellule tumorali isolate.
pN0(i–) Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con
STAGING
nella VALUTAZIONE CLASSICA DEL
LINFONODO SENTINELLA
pN1
pN1 a: METASTASI interessanti da1 a 3 linfonodi ascellari, con almeno
una metastasi più grande di 2.0 mm
pN1mi: MICROMETASTASI (più grandi di 0.2 mm e/o composte da più
di 200 cellule, ma nessuna metastasi più grande di 2.0 mm).
pN0(i–) Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con
valutazione immunoistochimica negativa
pN0(i+) Gruppi di cellule maligne, o singole cellule, in linfonodo(i)
regionale(i) non più grandi di 0.2 mm, o meno di 200 cellule in una
singola sezione istologica (evidenziate da colorazione E/E o ICC, incluse
le cellule tumorali isolate)
LINFONODO SENTINELLA
FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA
RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE
UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA
4. Nuove tecnologie
In questo caso l’anatomo patologo non cerca più le cellule tumorali al
microscopio, ma esegue indagini di biologia molecolare che permettono
valutare la presenza di molecole di RNA proprie delle cellule di tumori della
mammella (proteina CK19) nel Linfonodo Sentinella.
In particolare la metodica One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA)
prevede l’uso di uno strumento automatizzato e di prodotti dedicati (kit).
OSNA OSNA OneOne StepStep NucleicNucleic Acid Acid AmplificationAmplification
� PROCEDURA AUTOMATIZZATA DI AMPLIFICAZIONE DEGLI
ACIDI NUCLEICI
� VERIFICA LA PRESENZA DEL GENE DELLA CK19 NEL
TESSUTO LINFONODALETESSUTO LINFONODALE
�CONSENTE UNA DIAGNOSI MOLECOLARE DEL
LINFONODO SENTINELLA INTRAOPERATORIA DEFINITIVA
� FORNISCE UN RISULTATO DI NEGATIVO, MICROMETASTASI
O MACROMETASTASI
++Macro-Metastasi
mRNA della CK19Dimensioni delle metastasi
La diagnosi OSNA
SENTINELLA
CLASSICOSENTINELLA
OSNA
++
+
-
Macro-Metastasi
Micro-Metastasi
ITC / background
250 copie
mRNA/µL – CK19
(5.0 x 106)
5.000 copie
mRNA/µL – CK19
(1.0 x 108)
Diagnosi di carcinoma
mammarioValutazione ECOGRAFICA dei linfonodi
LNF non sospetti LNF sospetti
Agoaspirato
LINFONODO SENTINELLA
FLOW-CHART DIAGNOSTICA - MOLINETTE
positivonegativo
dissezione ascellare
Metodica istologica standard
Valutazione ICC della positività per CK-19
(sul tumore primitivo)
CK-19 POSITIVO CK-19 NEGATIVO
OSNA + Imprint
EE
ICC
2 mm
2 mm
IMPRINT
DIAGNOSI INTRAOPERATORIA SLN: DIAGNOSI INTRAOPERATORIA SLN: utilizzo dell’intero linfonodoutilizzo dell’intero linfonodo
molecolare
morfologica
OSNA
IMPRINT
Interpretazione e diagnosi
Patologo
molecolare
OSNA 110 casi
Metodo Tradizionale
169 casi
Macrometastasi 11% 20 %
2010: eseguiti 279 LS presso Breast Unit Molinette
Macrometastasi 11% 20 %
Micrometastasi 18% 8%
ITC71% 73%
Negativo
P<0.01
Macrometastasi OSNAMetodo
Tradizionale
Cavo ascellare positivo
42% 45%
Micrometastasi OSNA Metodo
Tradizionale
Cavo ascellare positivo
22% 22%
GRAZIE PER L’ATTENZIONEGRAZIE PER L’ATTENZIONE