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Bilirrubinas
Disciplina: Bioquímica
Curso: Análises Clínicas
3º. Módulo
Docente: Profa. Dra. Marilanda Ferreira Bellini
Hemoglobina
Proteína Globular
Globina
Comparative Biochemistry and Physiology, 146 (2007) 22-52
GLOBINA 4 Cadeias
Polipeptídicas
2 tipo alfa
2 tipo beta
Hemoglobina
Proteína Globular
Globina
Grupo Heme
Comparative Biochemistry and Physiology, 146 (2007) 22-52
Hemoglobina
Proteína Globular
Globina
Grupo Heme
Função:
Comparative Biochemistry and Physiology, 146 (2007) 22-52
Função: •Oxigenação dos tecidos •Capacidade antioxidante ao sangue
GLOBINA 4 Cadeias
Polipeptídicas
2 tipo alfa
2 tipo beta
Bilirrubina
• É o principal produto do metabolismo do heme da hemoglobina.
• 20% � precursores dos eritrócitos destruídos na medula óssea na medula óssea
– eritropoiese não-efetiva,
– outras proteínas heme como a mioglobina, os citocromos e a peroxidase.
Síntese da Bilirrubina1) Eritrócitos são eliminados no baço quando
ficam velhos ou danificados. A hemoglobina liberta, que é decomposta em grupo heme e em globinas (transformadas em aminoácidos)Pela ação da Heme oxigenase o grupo Heme forma a Biliverdina.
Síntese da Bilirrubina2) Posteriormente, devido a ação da Biliverdina
redutase, a biliverdina é transformada em bilirrubina não conjugada nas células retículo-endotelial do baço. Esta bilirrubina não conjugada não é solúvel em água. Em seguida, é ligado à albumina e enviado para o fígado.
Síntese da Bilirrubina4) Nos Hepatócitos, ela é conjugada com ácido
glicurônico pela enzima glucuroniltransferase, tornando-o solúvel em água. Muito do que vai para a bile e, portanto, fora para o intestino delgado.
Síntese da Bilirrubina5) A bilirrubina conjugada que permanece no
intestino grosso e é metabolizada pelas bactérias colônicas de urobilinogênio.Urobilinogênio é reabsorvido (circulação entero-hepática) e excretada na urina, juntamente com uma forma oxidada, urobilina; Quando presente nas fezes, essas apresentam coloração marrom. essas apresentam coloração marrom.
Síntese da Bilirrubina1) Eritrócitos são eliminados no baço
quando ficam velhos ou danificados. A hemoglobina liberta, que é decomposta em grupo heme e em globinas (transformadas em aminoácidos)Pela ação da Heme oxigenase o grupo Heme forma a Biliverdina.
4) Nos Hepatócitos, ela é conjugada com ácido glicurônico pela enzima glucuroniltransferase, tornando-o solúvel em água. Muito do que vai para a bile e, portanto, fora para o intestino delgado.
5) A bilirrubina conjugada que permanece
2 ) Posteriormente, devido a ação da Biliverdina redutase, a biliverdina é transformada em bilirrubina não conjugada nas células retículo-endotelial do baço. Esta bilirrubina não conjugada não é solúvel em água. Em seguida, é ligado à albumina e enviado para o fígado.
3) O complexo bilirrubina-albumina é metabolizado nos hepatócitos.
5) A bilirrubina conjugada que permanece no intestino grosso e é metabolizada pelas bactérias colônicas de urobilinogênio.Urobilinogênio é reabsorvido (circulação entero-hepática) e excretada na urina, juntamente com uma forma oxidada, urobilina; Quando presente nas fezes, essas apresentam coloração marrom.
Bilirrubina
Não-Conjugada , Indireta
• Produzida no baço;
• Apolar , ou seja, insolúvel em água;
Conjugada, Direta
• Produzida por reação enzimática da bilirrubina não-conjugada;
• Molécula polar+apolar;• Transportada para o fígado
via corrente circulatória;
• Ligada de maneira firme, mas reversível, à albumina.
• Molécula polar+apolar;
• Solúvel em água;
• Eliminada na urina.
Hiperbilirrubinemia
• Icterícia
– é a pigmentação amarela de pele, esclerótica e membranas mucosas.
– Bilirrubina plasmática > 3,0 mg/dL– Bilirrubina plasmática > 3,0 mg/dL
– Sinal � patologias hepáticas e biliares.
Hiperbilirrubinemia
Predominantemente não-conjugada (indireta)
• Pré –hepática;
• Excesso de bilirrubina não-conjugada no sangue circulante;
Predominantemente conjugada (direta)
• Comprometimento na captação, no armazenamento ou na excreção da bilirrubina.circulante;
• Não é excretada na urina;
• Atravessa a barreira hematoencefálica.
excreção da bilirrubina.
• Tanto a bilirrubina conjugada como a não-conjugada são retidas;
• Variadas concentrações no soro.
Detecção de bilirrubina
• Paciente:
– Jejum (8h)
• Amostra:
– Soro (mantido no escuro)– Soro (mantido no escuro)
• Realização Teste:
– Até 3h após coleta da amostra.
Detecção de bilirrubina
• Métodos:
• 1883-Erlich
– reação com o ácido sulfanílico diazotado, em amostras de urina.amostras de urina.
• Van den Bergh e Snapper
– presença de bilirrubina no soro sangüíneo pelo emprego do diazo -reagente de Erlich e álcool como acelerador.
Detecção de bilirrubina
• Métodos:
– Fundamentação teórica dos métodos:
fração que produz cor com a reação de Van denBergh em solução aquosa é bilirrubina direta Bergh em solução aquosa é bilirrubina direta
(polar+ apolar), enquanto a fração que desenvolve cor com o álcool é bilirrubina indireta (apolar).
Detecção de bilirrubina
• Métodos:
• Malloy e Evelyn:
– Propuseram o uso de metanol a 50% para evitar a precipitação das proteínas.precipitação das proteínas.
• 1938 -Jendrassik e Grof:
– uso de cafeína-benzoato-acetato para acelerar a reação azo-acoplada. Na maioria
Detecção de bilirrubina
• Métodos:
• Espectrofotometria direta:– Diluição da amostra em uma solução tampão.– Método não apresenta uma padronização adequada.
• Enzimático:– Enzima bilirrubina oxidase ;– Oxidação da bilirrubina � à biliverdina (incolor). – A reação é monitorada pela redução da absorvância;– Vantagem: elevada especificidade da enzima pela bilirrubina.
• Cromatografia líquida de alta performance (HPLC). – Quantifica as várias frações da bilirrubina. – Usado somente em laboratórios de pesquisa.
Urobilinogênio:
Urina e Fezes
Bilirrubina Conjugada
Bilirrubina Livre
Bilirrubina Livre+
Bactérias
Urobilinogênio
Urobilinogênio:
Urina e Fezes
• ↑urobilinogênio na urina e nas fezes � ↑ formação e excreção da bilirrubina
• ↓ urobilinogênio na urina e nas fezes � doenças hepáticas, obstruções intrahepáticas ou extrahepáticas.
• Valores de referência para o urobilinogênio urinário são de 0 -4 mg/dia.
– Valores diminuídos são impossíveis de serem detectados.
– O exame visual da amostra fecal com urobilinogênioreduzido revela cor cinza ou argila.