Bandeo cromosómico 1
-
Upload
germanvelez -
Category
Documents
-
view
874 -
download
0
Transcript of Bandeo cromosómico 1
![Page 1: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/1.jpg)
BANDEO CROMOSÓMICO
![Page 2: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/2.jpg)
¿PARA QUE? En algunas especies los pares
cromosómicos no pueden diferenciarse claramente considerando sólo sus componentes distintivos en sentido longitudinal;
se debe recurrir a técnicas citológicas especiales para la tinción de los cromosomas,
Se evidencian "bandas" transversales (oscuras y claras) que corresponden a los distintos tipos de cromatina.
![Page 3: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/3.jpg)
TECNICAS MAS USADAS
Bandeo G
Bandeo Q
Bandeo R
Bandeo C
Bandeo NOR
![Page 4: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/4.jpg)
BANDEO G Se utiliza tratamiento con tripsina previo a la
utilizacion de Giemsa ya que la tripsina degrada la proteinas y da lugar a bandas claras y oscuras.
Bandas Oscuras: Regiones de ADN ricas en A-T y pobres en genes constitutivos.
Bandas Claras: Regiones de ADN con G-C Y en genes constitutivos
Regiones A-T son resistentes a la tripsina lo cual genera una coloración oscura en el bandeamiento.
![Page 5: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/5.jpg)
Mayor nivel de bandas = Mayor calidad del estudio
![Page 6: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/6.jpg)
BANDEO Q
Se basa en el uso de colorantes fluorescentes como la quinqcrina. Dando a lugar bandas brillantes y oscuras. Técnica similar al bandeo G
Bandas Brillantes: Contienen regiones ricas en A-T.
Bandas oscuras: G-C
Regiones con G-C reprimen la fluorescencia y por eso no se tiñen, al contrario que las regiones con A-T
![Page 7: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/7.jpg)
No es muy frecuentemente utilizada
![Page 8: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/8.jpg)
BANDEO R
Técnica opuesta al bandeamiento y se utiliza el calor como desnaturalizante o BrdU
Bandas oscuras: G-C
Bandas claras: A-T
El calor desnaturaliza las regiones ricas en A-T por eso se visualizan mas las regiones con G-C
![Page 9: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/9.jpg)
BANDEO C Marcan las regiones Centromericas y
pericentromericas.
Permite la tinción de la heterocromatina constitutiva.
Se utiliza hidroxido de sodio e hidroxido de bario para desnaturalizar el ADN.
![Page 10: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/10.jpg)
Se usa principalmente para los cromosmas 1, 9 y 16
![Page 11: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/11.jpg)
BANDEO NOR
Marcan las regiones de los organizadores nucleolares acrocentricos.( regiones cromosómicas que forman y mantienen el nucléolo)
![Page 12: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/12.jpg)
BASES MOLECULARES DEL BANDEO CROMOSOMICO.
![Page 13: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/13.jpg)
CLASIFICACIÓN
BANDEOS CROMOSOMICOS
MORFOLOGICOS
QFQ
GTG
RFA
RHG
THG
CBG
DINAMICOS
GBG
RBA
RBG
GB-AAu
RB-AAu
![Page 14: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/14.jpg)
BANDEOS MORFOLOGICOS
Se basan en técnicas inherentes a la heterogeneidad de la cromatina.
Importante la relación con proteínas(histónicas y no histónicas) e interacciones ADN.
Se subclasifican en:
1. Técnicas de tinción diferencial
2. Métodos de tinción selectiva
3. Coloraciones con fluoroeromos específicos aislados o combinados con colorantes no fluorecentes
4. Tinciones con anticuerpos fluorecentes.
![Page 15: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/15.jpg)
Nomenclatura Bandeos Morfologicos QFQ: Bandas Q por fluorecencia usando
quinacrina. GTG: Bandas G por tratamiento enzimático
con tripsina utilizando Giemsa. RFA: Bandas R por fluorecencia usando
naranja de acridina. RHG: Bandas R mediante desnaturalización
térmica utilizando Giemesa. THG: Bandas T por desnaturalización térmica
empleando Giemesa. CBG: Bandas C por hidróxido de bario
utilizando Giemesa.
1) tipo de bandeo 2) técnica de detección empleada 3) tipo de tinción.
![Page 16: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/16.jpg)
BANDEOS DINAMICOS Incorporación de una base analoga, (BrdU), en el ADN durante la
fase S del ciclo celular. Se denomina también bandeo de replicación debido a la relación existente entre el tiempo de incorporación del BrdU y el patrón de replicación.
Si se incorpora BrdU durante la fase de replicación temprana se obtiene un patrón de bandeo R destacándose las regiones ricas en G-C.
Si se incorpora la base análoga durante la fase tardía de replicación se obtiene un patrón de bandas G, destacándose las zonas de predominio de secuencias A-T.
Los cromosomas pueden visualizarce utilizando distintos métodos de tinción como Giemesa o el naranja de acridina o utilizando anticuerpos específicos
![Page 17: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/17.jpg)
Nomenclatura Bandeos Dinamicos GBG: Bandas G por incorporación de BrdU
utilizando Giemesa. RBA: Bandas R por incorporación de BrdU
empleando naranja de acridina. RBG: Bandas R por incorporación de BrdU
utilizando Giemesa. GB-AAu: Bandas G por incorporación de
BrdU empleando anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal.
RB-AAu: Bandas R por incorporación de BrdU usando anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal.
![Page 18: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/18.jpg)
Bromo desexiuridina (BrdU) Análogo mutagénicamente activo de la timina, en que el
grupo -CH3 en posición 5' se reemplaza por Br. Tratamiento e investigación del cancer debido a que aumenta
la susceptibilidad de las células a la radioterapia porque inhibe la reparación de roturas causadas por la radiación en la doble cadena de ADN
Agente mutagenico: altera los patrones de transcripción Aumenta la afinidad de las proteinas cromosomales por las
zonas de la cadena que contengan BrdU, Altera la unión de proteínas reguladoras a la cadena de ADN, Inhibe la expresión de algunas funciones de diferenciacion
celular Provoca alteraciones en la membrana plasmatica.
![Page 19: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/19.jpg)
PROCEDIMIENTO BANDAS G
1. Envejecer las preparaciones en estufa a 65°C / 14h o 3 dias a temperatura ambiente
Bandeo GTG
Tripsina desnaturaliza proteinas de cromosomas
Tincion Giemsa o Leishman
Bandeo G con colorante Wright
Protocolo mas usado.
Se introduce la preparacion en solucion salina de 2SSC (Citrato trisodico disuelto en NaCl 0,3M) durante 1 minuto a 65°C. Esto permite que se abra la hebra de ADN
Lavar la preparacion con agua destilada y secar al aire.
Teñir con colorante Wright al 0.25% y tampon Sorensen en proporcion 1 a 3 duraten 3 minutos
![Page 20: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/20.jpg)
PROCEDIMIENTO BANDA C
CBG bandas C obtenidas con hidroxido Barico usando Giemsa
1. Introducir la preparacion en una cubeta con HCL 0.02N a temperatura ambiente por 10 minutos, lavar con agua y dejar secar al aire
2. Introducir la preparacion en una cubeta a 60°C con Ba(OH)2 saturado durante 1 minuto. Esto despuriniza y desnaturaliza el ADN.
3. Lavar con agua destilada y metanol para eliminar restos de bario dos veces
4. Dejar secar e incubar en 2xSSC a 65°C / 15 min
5. Lavar la preparacion y dejar secar
6. Teñir con colorante Leishman al 20% o Giemsa durate 5 a 10 minutos
Esta tecnica degrada un 50% del material cromosomico lo que dificulta la aplicación posterior de otras tecnicas.
El unico material que queda teñido es la heterocromatina constitutiva porque resiste a la degradacion
![Page 21: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/21.jpg)
Procedimiento bandas NOR1. Añadir 0.2uL de solucion de nitrato de
plata al 50% filtrada a la preparacion
2. Adicionar 6 a 8 gotas de formaldehido al 0.3% (acelera la tincion)
3. Incubar a 37°C durante 24h protegido de la luz
![Page 22: Bandeo cromosómico 1](https://reader035.fdocument.pub/reader035/viewer/2022081416/55cf9c1a550346d033a89a22/html5/thumbnails/22.jpg)
BIBLIOGRAFIA http://www.oocities.org/researchtriangle/lab/251
3/bandeos.htm Cristina Hernando Davalillo, Caracterizacion de
Anomalias cromosomicas en diagnostico prenatal y postnatal mediante tecnicas de citogenetica molecular, Tesis Doctoral 2005.
http://docentes.cs.urjc.es/~odeluis/Docencia/Genetmed/Bloque_1_2p.pdf
http://geneticahumana.tripod.com/libros/page201.html
http://www.fmed.uba.ar/depto/histo1a/genetica/adm/sg2.pdf