Bacilos Gram-negativos Gram-negativos não Fermentadores Profª: Karina Ponsoni Corbi.
Bacilos Gram negativos exigentes - … · 2013-04-30 · Bacilos gram negativos pleomórficos....
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Bacilos Gram negativos exigentesexigentes
Género Haemophilus
Género Bordetella
Género Legionella
Género Brucella
Género Francisella
HaemophilusEspecie Localización
H. influenzae Tracto respiratorioH. haemolyticus y bocaH. parahaemolyticus
H. aegyptius Ojo
H. aphrophilus Placa dentalH. paraprophilus “ “H. seguis “ “
H. ducreyi Tracto genital
Haemophilus
�BGN pleomórficos. Nuticionalmente exigentes.
�Aerobios estrictos.�Requiere factores especiales en los medios de cultivo para su crecimiento:
Factor X = Hemina Factor V = NAD (nicotinamida adenindinucleótido)
Hematíes lisados(sangre precalentada)AGAR CHOCOLATE
Haemophilus
EspecieFactor
X V
H. influenzae + +
H. parainfluenzae - +
H. ducreyi + -
Haemophilus influenzae• NIÑOS- CEPAS CAPSULADAS
Meningitis.Epiglotitis aguda.Celulitis.Artritis.
• NIÑOS/ADULTOS- CEPAS NO CAPSULADAS.Sinusitis.Otitis mediaNeumonía (enf. pulm. crónica).Reacción EPOC.
Haemophilus influenzaeMENINGITIS:
�Niños no vacunados (3m – 6a).�Fase inicial: cuadro respiratorio leve (1-3 d).�Fiebre elevada, cefalea intensa,rigidez de nuca. �Mortalidad con tto. precoz: < 10%.�Baja incidencia de secuelas neurológicas.�Baja incidencia de secuelas neurológicas.
EPIGLOTITIS:�Niños no vacunados (2 – 4 a).�Fase inicial: faringitis, fiebre, disnea.�Progresión muy rápida: Celulitis, inflamación tejidos
supraglóticos (obstrucción TR, muerte). �Alta mortalidad si no se inicia el tratamiento
rápidamente.
Haemophilus influenzaeObtención de muestras clínicas:
LCR, sangre, exudado ótico, esputo,
• Tinción de GRAM • Cultivo (PVX o agar de Levinthal)• Cultivo (PVX o agar de Levinthal)
Colonias opacas y lisasSatelitismo
Haemophilus influenzae
– Identificación bioquímica • Factores X y V
– Identificación serológica: Serotipos a-f
Aglutinación con partículas de latex• Aglutinación con partículas de latex
Técnicas moleculares (LCR)
Haemophilus influenzae
� Infecciones sistémicas:� Precoz.� Alta tasa mortalidad sin tto.� Cefalosporinas amplio espectro.� Cefalosporinas amplio espectro.
� Inf. TR (sinusitis, otitis):� Ampicilina.� Si R (30%): cefalosporina 3ª generación,
azitromicina, quinolona.
Haemophilus influenzae
�VACUNAS CONJUGADAS (serotipo b)
�Quimioprofilaxis : � Rifampicina.� Rifampicina.� Niños portadores con alto riesgo de desarrollar la
enfermedad.
Bordetella
� Bacilos gram negativos pleomórficos.� Aerobios estrictos.� Oxidasa catalasa positivo� Bacterias exigentes y crecimiento lento
Requieren medios de cultivo especialesRequieren medios de cultivo especialescon sangre, albumina, carbón y almidón (Bordet-Gengou).
Especies:B. pertussisB. parapertussisB. bronchiseptica
Bordetella pertussis
� Transmisión vía respiratoria (gotitas de pfluge).� Adherencia al epitelio traqueobronquial ciliado.
Adhesión, inmovilización de los cilios y destrucción del epitelio.epitelio.
� Producción local de toxinas y enzimas: Toxina pertussis. Pertactina. Toxina dermonecrótica. Hemaglutinina. Citotoxina. Toxina adenilatociclasa.
� Inflamación y exudado bronquial: TOSFERINA
Bordetella pertussis
� P. INCUBACIÓN: 7-14 días.� P. CATARRAL: 1-2 semanas: Mayor contagiosidad
Rinorrea. Tos. Conjuntivitis. Febrícula. � P. ESTADO: 4-6 semanas.� P. ESTADO: 4-6 semanas.
Accesos de tos (10-15 días).Vómitos. Desnutrición. No fiebre alta.
� COMPLICACIONES:Respiratorias: Otitis. Neumonía.Abdominales: Hernias. Prolapso rectal.Hemorragias: Petequias. Epixtasis.Nerviosas: Convulsiones. Coma.
� P. DECLINACIÓN: 2-3 semanas.
Bordetella pertussis• TOMA DE MUESTRAS (toxicidad):
Ex. o aspirado nasofaringeo (Periodo catarral).Transporte inmediato (medios especiales).
• INMUNOFLUORECENCIA DIRECTA:50% Sensibilidad. Falsos positivos.
• CULTIVO: Medio Bordet-Gengou. Medio con carbon de Regan-Lowe.
35ºC, atm húmeda, 7-10 dias
• MÉTODOS MOLECULARES: PCR en lavado nasofaringeo.
• DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO : no disponible.
Bordetella pertussis� Reservorio: humano.� Distribución universal. Endémica.� Mayor riesgo de infección: niños <1 a. Aumento de
prevalencia de enfermedad en niños mayores y adultos.� Frecuencia: estacional.� Frecuencia: estacional.� Brotes: cada 3-4 años.� Contactos: cercanos.
TTO: macrolidos.Fluorquinolonas o cotrimoxazol
Género LegionellaEnfermedad de los legionarios
Enfermedad de Pontiac
Legionelosis
Legionellaceae
Legionella
Género Legionella
• Cocobacilos gramnegativos• Aerobios estrictos• No esporulados, no encapsulados• Morfología bacilar, pleomórfica, formas filamentosas• Móvil (flagelos polares o subpolares)
Fisiología y estructura
• Móvil (flagelos polares o subpolares)
Género Legionella
•Metabólicamente poco activas � pruebas bioquímicas
•Oxidasa variable
•Catalasa positiva débil
•Reducción de nitrato y ureasa negativas.
Fisiología y estructura
•No fermentadores
•Aa como fuente de energía
•Crecimiento lento. Medios cultivo especiales.
•L-cisteína /sales de hierro
•agar BCYE-α (“buffered charcoal yeast extract”) enriquecido con
alfa-cetoglutarato con o sin agentes selectivos añadidos.
Especies de
Legionella
Nº de
serogrupos
Patogenicidad
en humanos
Especies de
Legionella
Nº de
serogrupos
Patogenicidad
en humanos
L. adelaidensis 1 - L. londiniensis 2 -
L. anisa 1 +a L. longbeachae 2 +a
L. Beliardensis 1 - L. lytica 1 +a
L. Birminghamensis 1 +a L. maceachernii 1 +a
L. Bozemanii 2 +a L. micdadei 1 +a
L. Brunensis 1 - L. moravica 1 -
L. Busanensis 1 - L. nautarum 1 -
L. Cherrii 1 - L. oakridgensis 1 +a
L. Cincinnatiensis 1 +a L. parisienses 1 +a
L. Drankourtii 1 - L. pneumophila 16 +a
L. Drozanskii 1 - L. quateirensis 1 -
Género Legionella
90% de las infecciones
L. Drozanskii 1 - L. quateirensis 1 -
L. Dumoffii 1 +a L. quinlivanii 2 +b
L. Erythra 1 +a L. rowbothamii 1 -
L. Fairfieldensis 1 - L. rubrilucens 1 +b
L. Fallonii 1 - L. sainthelensi 2 +a
L. Feeleii 2 +a L. santicrucis 1 -
L. Geestiana 1 - L. shakespearei 1 -
L. Gormanii 1 +a L. spiritensis 2 -
L. Gratiana 1 - L. steigerwaltii 1 -
L. Gresilensis 1 - L. taurinensis 1 -
L. Hackeliae 2 +a L. tucsonensis 1 +a
L. Impletisoli 1 - L. wadsworthii 1 +a
L. Israelensis 1 - L. waltersii 1 +a
L. Jamestowniensis 1 - L. worsleiensis 1 +b
L. Jordanis 1 +a L. yabuuchiae 1 -
L. Lansingensis 1 +a
Género Legionella
Especies de Legionella implicadas en patología humana
Ecología
Microorganismo ambiental ubicuoFactores de supervivencia y replicación
Temperatura 20-45ºC
Calidad pH, turbidez, conductividad
Infección
Agua conductividad
Estancamiento Escaso flujo
Presencia de otros
microorganismos
Producción de biofilm
Protozoos Relación intracelular
Ecología y patogenia
Agua sanitaria
doméstica y otros
sistemas
Instalaciones artificiales
Ambiente natural
(lagos, ríos, aguas
termales ...)
Género Legionella
porina
Receptor CR3
Inhibición de la unión de los fagosomas
QuimiocinasCitoquinas
Enzimas proteolíticasFosfatasasLipasasNucleasas
Inmunidad celular
macrófagos activados por los linfocitos Th1
Género Legionella
• a) adhesión del microorganismo a los receptores de la superficie de las células,
• b) endocitosis y penetración del microorganismo en los fagocitos,
• c) vacuolización y escape del ataque bactericida,
Interacción Legionella-Células fagocíticas
• c) vacuolización y escape del ataque bactericida,• d) formación de la vacuola replicativa,• e) multiplicación intracelular y,• f) liberación de las bacterias y muerte celular.
Proceso neumónico potencialmente grave
Género Legionella
Manifestaciones clínicas
Fiebre de Pontiac
– P.incubación 5h-5días– 2-5 días.– 2-5 días.– Similar a una gripe.– Sin neumonía.– Resolución espontánea sin tratamiento.– L. pneumophila serogrupos 1, 4 y 6, L. micdadei y L. anisa
Género Legionella
Manifestaciones clínicas
Enfermedad de los legionarios
– P. incubación 2-15 días– 2-10 días– Fiebre, malestar, letargo, anorexia– Tos leve no productiva (50% esputo purulento, hemoptisis)– Tos leve no productiva (50% esputo purulento, hemoptisis)– Rx tórax � neumonía– 10-30% GI– Enfermedad multiorgánica (SNC, hígado y riñones).– transaminasas, hiponatremia, creatininquinasa– Necesita tratamiento antimicrobiano.
Género Legionella
Género Legionella
Diagnóstico de laboratorio
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
• Detección rápida de cualquier serogrupo L.pneumophila.
• Sensibilidad 25-75%.
• Especificidad 95%.• Especificidad 95%.
Género Legionella
Diagnóstico de laboratorio
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
CULTIVO
• Método referencia.
• Diagnóstico confirmación.• Diagnóstico confirmación.
• Cualquier especie y serogrupo.
• Sensibilidad 20- 80%. Especificidad 100%.
• Medio específico (BCYE).
• 35-37ºC, atm aerobia y húmeda.
• Tiempo crecimiento.
Género Legionella
Diagnóstico de laboratorio
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
CULTIVO
SEROLOGÍA
• EIA con IFI.
Seroconversión (incremento de cuatro veces, 1:256). Dx retrospectivo
Falsos positivos y tiempo (1 semana a 2 meses).
Género Legionella
Diagnóstico de laboratorio
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
CULTIVO
SEROLOGÍA
Ag L. pneumophila en orina
• Gran avance (EIA o ICT)
• Antígenos LPS L. pneumophila serogrupo 1.
• S 60-90%
• Rápido.
• Neumonía reciente o pasada (1 día-6 meses).
Género Legionella
Diagnóstico de laboratorio
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
CULTIVO
SEROLOGÍA
Ag L. pneumophila en orina
Detección de ADN en muestras clínicas
Inconvenientes del cultivo � técnicas moleculares (ADN de Legionella)
Género Legionella
Diagnóstico de laboratorio
Género Legionella
Tratamiento
Bacteria intracelular.
• Macrólidos (acitromicina y claritromicina)
• Fluorquinolonas (ciprofloxacino y levofloxacino)
• Rifampicina• Rifampicina
• Cotrimoxazol
• Tetraciclinas
Duración del tto 10-15 días
Género Legionella
Epidemiología y control
Género Legionella
Epidemiología y control
2,5
3
3,5
4Epidemiología
Legionelosis. Tasas de incidencia por 100.000 habitantes. 2001-2008
0
0,5
1
1,5
2
Europa 0,76 1,01 0,98 0,83 01-ene 1,11 1,13 1,18
España 3,49 3,54 3,05 2,67 3 3,07 2,66 2,99
2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008
1,01
Fuentes: Legionnaire´s disease in Europe 2007-2008. Joseph et al., 2010.Enfermedades de Declaración Obligatoria. RENAVE. Centro Nacional de Epidemiología. 2010.
Género Legionella
Epidemiología
Casos esporádicos o brotes.
Casos comunitarios o nosocomiales.
Distribución mundial (países desarrollados).
Principalmente en verano y otoño.Principalmente en verano y otoño.
EDO-CNE.
Mortalidad de la enfermedad de los legionarios
~20%
Francisella
Francisella tularensis TULAREMIAFiebre glandular
Fiebre de los conejos
Fiebre de la garrapata
Fiebre de la mosca del ciervo
Francisella philomiragia
Afecta a animales y humano
Agua salada
Pacientes inmunológicos
Francisella tularensis- F. tularensis subespecie tularensis (tipo A ) propia de Canadá y EEUU- F. tularensis subespecie holarctica (tipo B ) hemisferio Norte
-F. tularensis subespecie mediasiatica-F. tularensis subespecie novicida
No enfermedad en humano
Menos virulenta
• Cocobacilos pleomórficos• Pequeños (0.2 X 0.5 µm)• Gram –• Capsulados
Francisella tularensisCARACTERÍSTICAS
• Capsulados• Inmóviles, no esporulados• Aerobios estrictos (capnófilos)• Medios ricos (con cisteína)• Crecimiento lento (2-3 días)
Francisella tularensis- F. tularensis subespecie tularensis (tipo A )
- F. tularensis subespecie holarctica (tipo B ) Zonas con ríos y lluvias.
Occidental
Oriental
Características epidemiológicas y evolución de la enfermedad
� Reservorio � Zoonosis � Animales salvajes :- Conejos, liebres, ratones, topillos y otros roedeores... Aunque puede afectar a animales domésticos, aves, reptiles y crustáceos.
- Garrapatas duras ( Ixodes, Dermacentor,...) - Es muy resistente a las condiciones ambientales.
Francisella tularensisEPIDEMIOLOGÍA
- Es muy resistente a las condiciones ambientales.
� Mecanismos de transmisión :• Contacto con tejidos o líquidos de animales infectados• Ingestión de aguas contaminadas• Aerosoles (animal o laboratorio)• Picadura de artrópodo hematófago
• Garrapata• Mosca del ciervo � Chrysops• Otros artrópodos hematófagos : ácaros, jejenes, mosquitos ( y piojos)
• Forma úlcero-gladular : más frecuente Úlcera cutánea y adenopatía satélite
• Forma óculo-glandular:Conjuntivitis unilateral purulenta con adenopatías preauriculares o
P.I. � 1-21 días
Francisella tularensisCLÍNICA
Conjuntivitis unilateral purulenta con adenopatías preauriculares o cervicales
• Forma tifoidea: Fiebre, postración y signos sistémicos.
• Forma orofaríngea y gastrointestinal:Faringo-amigdalitis membranosa y adenopatías cervicales.
• Forma neumónica: Mortalidad muy elevada
• Muestras: Riesgo (guantes)• D. Directo :
– Cultivo necesidad de grupo sulfhidrilo (cisteína)• Crecimiento lento >3 días
– Identificación: con Ac específicos
Francisella tularensisDIAGNÓSTICO
– Identificación: con Ac específicos– PCR: en desarrollo
� D. serológico :– Aglutinaciones � “seroconversión” (1/160)
Porque los Ac pueden persistir muchos años– Reacciones cruzadas con Brucella
Estreptomicina (toxicidad)
Gentamicina
Francisella tularensisTRATAMIENTO
Fluorquinolona (ciprofloxacino)
• Cocobacilos gramnegativos pequeños.
• No encapsulados e inmóviles.
• Crecimiento lento.
• Exigente desde el punto de vista
Género Brucella
Fisiología y estructura
nutricional. Medios ricos.
• Aerobio estricto (CO2).
• Crecimiento lento (3-5 días � 21)
• No fermenta H. de C.
B. melitensis
B. abortus
ZOONO
Género Brucella
Especies
B. suis
B. canis
OSIS
Eritritol
Género Brucella
PatogeniaDosis infectiva 10-100 m.o.
Género Brucella
Patogenia
Patógeno intracelular del sist. reticuloendotelial
Brucelosis (Sir David Bruce)Enfermedad de Bang (Bernhard Bang)
Fiebre ondulante
Género Brucella
Manifestaciones clínicas
Fiebre de MaltaFiebre mediterránea remitenteFiebre de GibraltarFiebre de CretaFiebre de Constantinopla
Género Brucella
Manifestaciones clínicas
1-3 semanas (6 m).
Depende de la especie
B. mellitensis
B. suis
B. abortus
B. canis
Fase agudaFase aguda
- Sudoración : 90-95%, muy profusa (olor a paja húmeda)- Fiebre : 70-90% - Escalofríos : 75%- Derrames articulares : 20-60% - Digestivos : 70%
Otros síntomas generales: astenia, anorexia, malestar…Otras manifestaciones: cutáneas, SNC, CV.
Género Brucella
Manifestaciones clínicas
Fase crónica
3-6 meses
Focos persistentes de infección
No desarrollo de resistencias atb.
• Cultivo: (tiempo)– Hemocultivo.– Medulocultivo.
• Identificación:
Género Brucella
Diagnóstico directo
• Identificación:– Morfologia colonia.– Oxidasa.– Aglutinación.
• Métodos moleculares:– PCR.
• Rosa de Bengala.
• Aglutinación.
Género Brucella
Diagnóstico indirecto
• Aglutinación.
• Test de Coombs.
• ELISA: IgG, IgA, IgM.
Género Brucella
Tratamiento
• Doxiciclina (bacteriostático)• Doxiciclina + Rifampicina (OMS)
niños < 8 años / embarazadasniños < 8 años / embarazadas• Trimetoprim-sulfametoxazol + rifampicina
• Medidas de prevención en animales– Detección y sacrificio infectados– Vacunación en sanos
• Higienización de leche y derivados
Género Brucella
Prevención
• Educación sanitaria y Med. Prev. Ganadería
Laboratorios