Az alvadási rendszer fehérjéi Kappelmayer János DE OEC, KBMPI · APTI normál APTI keverék nem...
Transcript of Az alvadási rendszer fehérjéi Kappelmayer János DE OEC, KBMPI · APTI normál APTI keverék nem...
Az alvadási rendszer fehérjéi
Kappelmayer János
DE OEC, KBMPI
Fehérje diagnosztika, Pécs, 2006
1. Az alvadási rendszer fehérjéinek áttekintése
2. Alvadási fehérje abnormalitások
3. Az alvadási rendszer fehérjéinek vizsgálata
Az alvadási rendszer fehérjéivel kapcsolatos kórképek
Thrombocyta funkciós zavarok
- thrombocyta túlmûködés
- thrombocytopathia
- glikoprotein hiány- denz-test hiány- alfa granulum hiány- jelátviteli zavar
A von Willebrand megbetegedés tipizálása
Teszt I típus IIA típus IIB típus Thr-vWd III típus
vWf:Ag
R:Co
RIPA
RIPA-LD
Gyakoriság
Normál
vWf multimerek:
±
±
±
±
±
normál normál
ø
ø
ø
ø ø øaggregál aggregál
70-80% 10-12% 3-5% 0-1% 1-3%
ø
Coagulopathiák
1./ Alvadási tényezôk,fibrinolízis inhibitorok hiánya vagy csökkent szintje
2./ Kóros alvadási faktorok,fibrinolízis inhibitorok szintézise
3./ Inhibitorok
Alvadási tényezôk, hiánya vagy csökkent szintje
A/ ÖröklöttB/ Szerzett
a. csökkent szintézis(májelégtelenség)
b. consumptioC/ Terápiás (thrombolysis)
Öröklésmenet Prevalencia1 millió lakosra
Haemophilia A XR 100
Haemophilia B XR 20
vonWillebrand bet AD >100 AR 1
XI-es faktor hiány AR ritka
Abnormális alvadási faktorok szintézise
A/ CongenitalisB/ Szerzett (dysfibrinogenaemia
májbetegségekben, K vitaminhiány)
C/ Terápiás (syncumar) D/ Iatrogén (cephalosporin)
InhibitorokA/ Faktor ellenes neutralizáló vagy
nem neutralizáló antitesteka. öröklött faktor hiánnyal b. öröklött faktor hiány nélkül
B/ Globális inhibitorok(terápiás: heparin)
Az alvadási rendszer fehérjéinek vizsgálómódszerei
A véralvadás szûrôtesztjeiVérzési idôAktivált parciális tromboplasztin idô (APTI):
az intrinsic út vizsgálatára, FXII →→→→ fibrinaktivátor, foszfolipid, kalcium
Protrombin idô (PI):az extrinsic út vizsgálatáraszöveti faktor →→→→ fibrinszöveti faktor, kalcium
Trombin idô (TI):fibrinogén-fibrin átalakulás,trombin →→→→ fibrin
Platelet Function Analyser
Fluorescence intensity
Control
Control + TRAP
PatientPatient+ TRAPC
ell c
ount
Vitronectin receptor
Negativ control
ControlPatient
Fluorescence intensity
Cel
l cou
nt
M1M2
M3 M4
a- KONTROLL (100/thr)
b- KONTROLL TRAP (100/thr)
c- BETEG (470/thr)
d- BETEG TRAP (720/thr)
GpIIb/IIIa complex
XIIXIIa
XIXIaCa2+
IX
VIII
IXaCa2+
PLTFVIIaCa2+
VII+
TF, Ca2+
XV
XaCa2+
PL
Protrombin Trombin
Fibrinogén Fibrin
Fibrin(kereszt-kötött)
XIIIaCa2+
XIII
Ca2+
Intrinsic út
Extrinsic út
Közös út
PI
APTI
TI
APTI
normál
APTI keverék
nem
igen
nem
megnyúlt
nincs teendô
TI meghatározás (3)
PI meghatározás (2)kumarin
heparin
az eredménynem értékelhetô
citráthiba (1)
lupus antikoagulánsfaktor ellenes gátlótestFaktormeghatározá
s FXII, XI, IX, VIIIPK, HK
nem korrigál (4b)korrigál (4a)
CoagulopathiCoagulopathiáákk-- SpeciSpeciáális vizsglis vizsgáálatoklatok
A: A: AlvadAlvadáási tsi téényezô hinyezô hiáánynyáának kimutatnak kimutatáásasa::--ExtrinsicExtrinsic--Intrinsic Intrinsic úútt faktorok aktivitfaktorok aktivitáássáánaknakmeghatmeghatáározrozáásasa -- alvadalvadáási teszt si teszt ((egyfegyfááziszisúú,, kkéétftfááziszisúú))
-- kromogkromogéén tesztn teszt--FXIII, AlfaFXIII, Alfa--2 2 plazmin plazmin inhibitor inhibitor
B: B: KKóóros alvadros alvadáási faktorok kimutatsi faktorok kimutatáásasa::--ExtrinsicExtrinsic--Intrinsic Intrinsic úútt faktorainak faktorainak antigantigéénn meghatmeghat..((immunolimmunolóógiai mgiai móódszerreldszerrel:IRMA, ELISA):IRMA, ELISA)--AktivitAktivitáás meghats meghatáározrozáásasa, , ReptilReptilááz idôz idô
C: C: GGáátltlóótestek meghattestek meghatáározrozáásasa
GGáátltlóótestek alvadtestek alvadáási faktorok ellensi faktorok ellen
1.1. Specifikus alvadSpecifikus alvadáási faktorok elleni Igsi faktorok elleni Ig--kkGyengeGyenge-- erôserôs ttíípuspusúú ggáátltlóótestektestek
2. 2. GyakorisGyakorisáágaga: FVIII, FIX : FVIII, FIX elleni gelleni gáátltlóótesttesta a leggyakoribb leggyakoribb (FXI, FXII, FV, FX, FXIII,(FXI, FXII, FV, FX, FXIII,fibrinogfibrinogéénn elleni gelleni gáátltlóótest igen ritkatest igen ritka
3. 3. ElôfordulElôfordulááss: : HaemophiliaHaemophilia, , autoimmun autoimmun betegsbetegséégekgek, , gygyóógyszerek gyszerek (INH, Streptomycin)(INH, Streptomycin)
FVIIIFVIII elleni gelleni gáátltlóótesttestFVIII:C FVIII:C ellen ellen ((vWFvWF--ra nem ra nem hat)hat)
KialakulKialakuláásasa: : HaemophiliHaemophiliáás betegeks betegekPost partumPost partumRA, SLERA, SLEMalignitMalignitááss
GyengeGyenge--erôserôs ttíípuspusMennyisMennyisééggéét t BethesdaBethesda--egysegyséégben fejezzgben fejezzüük kik ki..
Bethesda Bethesda egysegyséég meghatg meghatáározrozááss
1.1. A A betegplazmbetegplazmáábbóól hl hííggííttáások ksok kéészszííttéésese..2. A 2. A betegplazma hbetegplazma hííggííttáásainak kontroll plazmsainak kontroll plazmáávalval
ttöörtrtéénô nô 1:1 1:1 araráánynyúú keverkeveréékeinek kkeinek kéészszííttéésese..3. A 3. A kontroll plazma kontroll plazma éés a s a keverkeveréékek kek 2 h2 h-- 3737°°CC
inkubinkubáálláásasa..
4. FVIII 4. FVIII aktivitaktivitáás meghats meghatáározrozáásasa..5. 5. ReziduReziduáális lis FVIII FVIII aktivitaktivitáás megads megadáásasa..6. 1 BE6. 1 BE az aktivitaz aktivitáása annak sa annak a a ggáátltlóótest mennyistest mennyiséégnekgnek,,
ami ami a a keverkeveréék k FVIII FVIII aktivitaktivitáássáát t 50%50%--ra csra csöökkentikkenti. .
TI
normál
polibrénes TI(1)
megnyúlt
nincs teendô
megnyúlt
normál
TI keverék+ RI (2)
heparin
nem korrigál
fibrinogén/fibrindegradációs termék
alacsony fibrinogénvagy dysfibrinogenemia
korrigál
Haemophilia A vonWillebrand betegség
Thrombocyta szám N N
Vérzési idô N
FVIII N,
vWF-Ag N
RIPA N ,
AlvadAlvadáási faktor meghatsi faktor meghatáározrozáássegyfegyfááziszisúú alvadalvadáási teszttelsi teszttel
Ismeretlen Ismeretlen Faktor aktivitFaktor aktivitáássúú
mintaminta
HiHiáányplazmanyplazma:: a a vizsgvizsgááltltFaktort nemFaktort nem, de , de mindenmindenMMááss faktort feleslegbenfaktort feleslegbentartalmaztartalmaz
PI: extrinsic PI: extrinsic úútt faktoraifaktoraiAPTI: intrinsic APTI: intrinsic úútt faktoraifaktorai
AlvadAlvadáási idôt si idôt standard standard plazmplazmáával nyertval nyertkalibrkalibráácicióórróól leolvasnil leolvasni
Faktor meghatFaktor meghatáározrozáás kromogs kromogéén tesztteln teszttel
I.I. Direkt tesztDirekt teszt ((kallikreinkallikrein, , XaXa, , XIaXIa, , trombintrombin))aktivaktiváállááss
mméérendô inaktrendô inaktíív faktor v faktor aktivaktiváált faktorlt faktor
RR--pNApNAaktivaktiváált faktorlt faktor
RR--COOH + COOH + pNApNA
II.II. Indirekt tesztIndirekt teszt ((XIIaXIIa→→→→→→→→kallikreinkallikrein, , IXa IXa →→→→→→→→XaXaVIIa VIIa →→→→→→→→XaXa, , VIIIa VIIIa →→→→→→→→XaXa))
FVIIFVII FVIIaFVIIaTFTF
FXFX FXaFXaFVIIaFVIIa+Ca+Ca
RR--pNApNA RR--COOH +COOH + pNApNAFXaFXa
Faktor meghatFaktor meghatáározrozáás kromogs kromogéén tesztteln teszttel
KromogKromogéén szubsztrn szubsztráátoktok:: olyan szintetikus rolyan szintetikus röövid peptidekvid peptidek((ááltalltaláában ban 33--44 tagtagúú),), melyeket az alvadmelyeket az alvadáási faktorok si faktorok ((proteolitikus enzimekproteolitikus enzimek)) elhaselhasíítanak tanak ééss ez ez aa reakcireakcióószszíínknkéépzôdpzôdééshez vezetshez vezet. A. A peptidek specifikusak peptidek specifikusak aa vizsgvizsgáálnilnikivkiváánt alvadnt alvadáási faktorrasi faktorra, a, a termterméészetes szubsztrszetes szubsztráátot tot ututáánozznozzáákk. A. A szszíínknkéépzôdpzôdéés ars aráányos az enzim aktivitnyos az enzim aktivitáássáávalval..
IleIle--GluGlu--GlyGly--ArgArg--pNApNA
FXaFXa
AA FXa protrombin hasFXa protrombin hasííttáásisihelyhelyéét utt utáánozzanozza..
Faktor meghatFaktor meghatáározrozáás kromogs kromogéén tesztteln teszttel
I.I. Direkt tesztDirekt teszt:: Faktor Faktor XX meghatmeghatáározrozáásskromogkromogéén szubsztrn szubsztráátt:: ArgArg--GlyGly--ArgArg--pNApNAreakcireakcióó::
FXFX FXaFXaRVV, Ca2RVV, Ca2++
ArgArg--GlyGly--ArgArg--pNApNA+ H+ H22OO ArgArg--GlyGly--ArgArg--OH+OH+ pNApNAFXaFXa
FotometrFotometráálláás s 405 nm405 nm--enenA FXA FX aktivitaktivitáás leolvass leolvasáása kalibrsa kalibráácicióós gs göörbe alapjrbe alapjáánn
Faktor meghatFaktor meghatáározrozáás kromogs kromogéén tesztteln teszttel
II.II. Indirekt tesztIndirekt teszt: FVIII: FVIII meghatmeghatáározrozáásskromogkromogéén szubsztrn szubsztráátt:: ArgArg--GlyGly--ArgArg--pNApNAreakcireakcióó::
FXFX FXaFXaFIXaFIXa, Ca, Ca2+2+, PL, PL
FVIIIFVIII
ArgArg--GlyGly--ArgArg--pNApNA+H+H22OOFXaFXa
ArgArg--GlyGly--ArgArg--OH+OH+pNApNA
FotometrFotometráálláás s 405 nm405 nm--enenA FVIIIA FVIII aktivitaktivitáás leolvass leolvasáása kalibrsa kalibráácicióós gs göörbe alapjrbe alapjáánn
KromogKromogéén teszttel vn teszttel véégzett alvadgzett alvadáásisifaktor meghatfaktor meghatáározrozááss
ElônyeiElônyei::1.1. Nagyobb pontossNagyobb pontossáágg2.2. ÁÁltalltaláában nem igban nem igéényel hinyel hiáányplazmnyplazmáátt,,
ilyenkor olcsilyenkor olcsóóbbbbHHáátrtráányanya::HemolHemolííziszis,, liplipéémia zavarmia zavar,, ilyenkor minta vakotilyenkor minta vakotkell kkell kéészszííteniteni..A A direkt teszt kdirekt teszt kóóros faktor jelenlros faktor jelenlééttéére nem elre nem elééggéérzrzéékenykeny..