Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo
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“Nematoides:
Controle Alternativo”,
Regina M. D. Gomes Carneiro
Embrapa Recursos Genéticos e
Biotecnologia
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Introdução
Os nematóides das galhas, Meloidogyne spp., são sem dúvida uma das doenças mais importantes de várias culturas de interesse comercial inclusive o café
M.EXIGUA, M.INCOGNITA E M.PARANAENSIS
Considerando a preocupação com o meio ambiente e com a saúde humana, alguns nematicidas devido à alta toxicidade, vem sofrendo cancelamentos e mesmo restrições de uso.
Dessa maneira, a implementação de medidas alternativas de controle são imprescindíveis para a manutenção ou aumento da produção agrícola nacional.
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Introdução
Para a adoção dessas medidas de manejo
Identificação das espécies de nematoides ocorrentes
Sanidade da mudas e escolha do local de plantio
Ex: mudas enxertadas em C.canephora : Apoatã
Manejo das enxurradas
Limpeza de máquinas e implementos
Rotação com culturas não hospedeiras
Ex: Crotalaria spectabilis, aveia branca, amendoim,
mucuna preta
Adição de matéria orgânica
Destruição das plantas atacadas
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Introdução: Resistência genética
M.exigua: IAPAR 59,Tupi RN-IAC1669 ,
Catiguá MG3 (Hibrido do Timor)
M.incognita e M. paranaensis: algumas combinações de
C.arabica e C.canephora originaram plantas resistentes,
porém, segregantes para essa característica.
Germoplasma Icatu Híbrido artificial de Ca e Cc
IPR 100 com 100 % de resistência
Cafeeiros arabica da Etiópia também apresentaram
resistência a essas espécies.
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Introdução: Resistência genética
A cultivar Apoatã 2258 : porta enxerto de cultivares de
C. arabica
Fontes de resistência: C.canephora,
....................................C.congensis,
...................................C. devewrei
Resistencia aos nematoides estar aliada a um sistema
radicular bem desenvolvido.
A diversidade fisiológica intra e interespecíficas de
populações de Meloidogyne tem dificultado a seleção de
fontes de resistencia do cafeeiro
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É imprescindível uma identificação correta das
espécies e biótipos de Meloidogyne do cafeeiro.
Como é possível classificar rapidamente e
corretamente as espécies de Meloidogyne do
cafeeiro ?
Qual a variabilidade que ocorre dentro das
espécies? Existem Raças ou Biótipos que
quebram a resistência ? É possível
identificá-los ?
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Diversidade Biológica e Genética de Meloidogyne spp.
do cafeeiro e Estabelecimento de Marcadores
Enzimáticos e Moleculares para a Identificação de
Espécies. Financiamento Embrapa-Café e CNPq
Regina M. D. Gomes Carneiro &
Myrian S. Tigano
Embrapa Recursos Genéticos e
Biotecnologia, IAC, IAPAR
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Introdução
Os nematóides, gênero Meloidogyne e são representados por mais de 90 espécies descritas, sendo 17 detectadas no cafeeiro.
A caracterização das espécies é baseada sobretudo, em características morfológicas de fêmeas, machos e juvenis do segundo estágio e requer especialista na área de taxonomia .
Os fenótipos da enzima esterase são espécie-específicos e existem padrões apenas para algumas espécies (cerca de 44), sendo 10 padrões já caracterizados para Meloidogyne spp. do cafeeiro.
Até o momento existem marcadores moleculares para apenas 14 espécies, sendo 6 obtidos para o cafeeiro
A variabilidade intraespecifica, até o momento foi pouco estudada.
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Objetivos
Caracterizar da variabilidade intraespecífica de populações de Meloidogyne spp.
Estabelecer marcadoes enzimáticos e moleculares para diferentes espécies.
Identificar as principais populações atípicas que ocorrem no Brasil e no exterior.
Revalidar e Sinonimizar as espécies
Descrever novas espécies
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Resultados
Uma coleção de trabalho de Meloidogyne spp. está sendo estabelecida e mantida na Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Essa coleção já conta com mais de 180 isolados purificados e criopreservados (Carneiro et al., 2005).
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Diversidade de Meloidogyne spp. do
cafeeiro
O primeiro estudo sobre diversidade de
populações brasileiras de Meloidogyne
spp. foi realizado por Randig et al.
(2002, 2004).
Nesses estudos foram estabelecidos
marcadores SCAR para identificação
rápida e precisa das principais
espécies brasileiras do cafeeiro.
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Randig et al. (2002)
Parsimony-based tree
100
exi1
exi2 67.5%
62 %
30.1%
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Scar-Café-Multiplex
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Resultados
Em levantamento realizado a campo em
cafeeiros infestados em 54 localidades
nos estados de São Paulo e Minas Gerais
foi validado o kit de identificação (SCAR-
multiplex) , comparando-o com a técnica
de identificação por marcadores
enzimáticos (esterases) (Carneiro et al.,
2005)
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Fenótipos de esterase
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SCAR -Café
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Meloidogyne spp. do cafeeiro
Estudo de 18 isolados de Meloidogyne spp. provenientes de cafezais de diferentes regiões do Brasil, América Central e Havaí, identificou as principais espécies e caracterizou a diversidade genética dos nematóide de galhas do café desses países, com respeito ao fenótipo de esterase, morfologia e polimorfismo molecular (Carneiro et al., 2006).
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Meloidogyne spp. do cafeeiro
. Os fenótipos de esterase mostraram-se específicos e uma ótima ferramenta para identificar todas as espécies do nematóide das galhas em café: M. incognita (Est I1, I2), M. paranaensis (Est P1, P2), M. arenaria (Est A2), M. arabicida (Est AR2), M. exigua (Est E1, E2), M. mayaguensis (Est M2),e uma espécie nova (Est SA2, SA4).
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Descrição de Meloidogyne izalcoensis Carneiro et al.,
2007
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Meloidogyne izalcoensis Carneiro et al., 2007
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Diversidade de M. exigua (Muniz
et al., 2008)
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RAPD SCAR
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Neighbor-joining
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Morfologia de M. exigua da seringueira (Muniz et
al.,2009)
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Marcilene Fernandes A. dos Santos, Cleber Furlanetto, Maria Ritta A. Almeida, Fabiane C. Mota, Natállia O.R. Silveira, Joelma G.P.Silva, Ana Cristina M.M.Gomes, Philippe Castagnone Sereno, Myrian S.
Tigano, Regina M.D.G. Carneiro.
Diversidade de Meloidogyne incognita e espécies correlatas com base em aspectos morfológicos, citológicos e moleculares
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Resultados- Isoenzimáticos
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A: I1N1 (isolado 1), B: I2N1 (isolado 4), C: S2N1 (isolado 11),
D: S2N1 (isolado 10), E: S2aN3 (isolado 13), F: S2aN3 (isolado
14).
Fotografias de padrões perineais de fêmeas sob Microscopia de Luz
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A) I1N1 (isolado 1), B) I2N1 (isolado 4), C) S2N1
(isolado 10), D) S2N1 (isolado 11), E) S2N1 (isolado
9), F) S2aN3 (isolado 16).
Estiletes de fêmeas sob Microscopia Eletrônica de Varredura
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A) I1N1, B) I2N1: o disco labial
redondo e centralmente côncavo
e marcado por anéis
incompletos.
C) S2N1, D) S2N1, E) S2N1 e
F) S2aN3, o disco labial é
arredondado e fundido com os
lábios medianos.
Região anterior de machos sob Microscopia Eletrônica de Varredura
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Estilete dos machos I1N1, I2N1 e S2N1 são muito
semelhantes aos de M. incognita (Eisenback &
Triantaphyllou (1991). A distância da DGO é curta
(1,5-3,5 μm).
Estilete de machos
Estilete dos machos de S2aN3 é
diferente na forma; Distância da
DGO é 2,0-4,5μm nos isolados
S2aN3.
![Page 36: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/36.jpg)
Nos isolados I1N1, I2N1 e
S2N1 a região anterior
possui um número variável
de anéis incompletos (1-7).
Todos os outros caracteres
são semelhantes a descrição
de M. incognita feita por
Eisenback & Triantaphyllou
(1991).
Juvenil do segundo estádio (J2)
S2aN3 a região anterior é
lisa, às vezes com 1-2
anéis.
![Page 37: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/37.jpg)
Citogenética
Forma Triiploide
(3n=40-46) foi a mais
comum e apareceu
em todos isolados
de M. incognita dos
perfis enzimáticos:
I1N1, I2N1, S2N1.
![Page 38: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/38.jpg)
![Page 39: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/39.jpg)
M. incognita, M. hispanica e Meloidogyne spp. foram testados com três marcadores do tipo SCAR, desenvolvido para M. incognita (Ziljstra et al. 2000, Randig et al. 2002, Qing-Peng et al., 2004);
Utilizando esses marcadores três fragmentos espécie-específico de (1.200 pb, 399 pb e 955 pb) foram obtidos para os doze isolados mostrando que eles são M. incognita (I1N1, I2N1 e S2N1);
Um outro fragmento de cerca de 1.650 pb foi obtido para os dois isolados de Meloidogyne sp. (S2aN3) e para os três isolados de M. hispanica.
Resultados-SCAR
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Com base em análise de PCR-
RAPD, os isolados de M.
incognita apresentaram
variabilidade intraespecífica e
os resultados foram
congruentes com as
isoenzimas: I1N1, I2N1 e
S2N1;
Os isolados de M. hispanica e
S2aN3 apresentou alguma
semelhança em relação de
disposição de bandas;
Resultados-RAPD
![Page 41: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/41.jpg)
Resultados: Análise filogenética
![Page 42: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/42.jpg)
Considerando as abordagens morfológicas e
moleculares, foi possível concluir que os três
fenótipos de enzimas (I1N1, I2N1 e S2N1)
caracterizam a espécie M. incognita, apresentando
pouca variabilidade dentro da espécie.
Nas análises filogenéticas todos os isolados de M.
incognita se uniram com 100 % de boostrap,
ocorrendo uma pequena correlação com os perfis de
enzima e nenhuma com as raças na topologia da
árvore.
Conclusão
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INFORMAÇÕES ADICIONAIS SOBRE O NEMATÓIDE Meloidogyne inornata
LORDELLO, 1956 (TYLENCHIDA: MELOIDOGYNIDAE) E A SUA CARACTERIZAÇÃO
COMO UMA ESPÉCIE VÁLIDA (Carneiro et al., 2007)
)
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![Page 45: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/45.jpg)
![Page 46: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/46.jpg)
![Page 47: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/47.jpg)
![Page 48: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/48.jpg)
![Page 49: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/49.jpg)
![Page 50: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/51.jpg)
![Page 52: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/52.jpg)
Manejo integrado de Meloidogyne paranaensis
usando rotação de culturas, resistência genética e
controle biológico
Sousa, M.G. ; Moita, A.W ; Carneiro, R.G. ; Carneiro, R.M.D.G. Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, C.P. 02372, CEP 70849-970, Brasília, DF, Brasil., Embrapa Hortaliças, C. P. 218, 70351-970 , Brasília, DF, Brazil. Instituto Agronômico do Paraná - IAPAR, C. P. 481, 86047-902, Londrina, PR, Brasil. E-mail: [email protected]
![Page 53: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/53.jpg)
Rotação de culturas
Retirada dos cafeeiros contaminados em 50% da área infestada e plantio de aveia preta (Avena strigosa L.), amendoim (Arachis hypogaea L.) e mucuna cinza (Mucuna cinereum) durante 18 meses em sucessão de culturas.
Após 18 mesesocorreu a retirada dos cafeeiros em mais 50 % das áreas
Controle biológico: foi usado o isolado de P12 de P. penetrans( 0,5 gramas de pó de raiz ou seja, 108 endósporos/por cova de cafeeiro), nos dois solos de diferentes texturas.
• Instalação do ensaio com cafeiros: plantio do acesso de Icatú ( H4782-7-925-IAC) (parcialmente resistente) e IAPAR 59 (altamente suscetível) a M. paranaensis.
![Page 54: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/54.jpg)
Tratamentos do ensaio
Os 8 tratamentos foram:
ACE
ACF
ADE
ADF
BCE
BCF
BDE
BDF
• Blocos ao acaso com 11 repetições
Variáveis
A= Café resistente ( Icatú)
B= Café suscetível ( Iapar 59)
C= Inoculado com Pasteuria
D= Não inoculado com Pasteuria
E= Com manejo de solo
F= Sem manejo de solo
![Page 55: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/55.jpg)
Conclusões
A sucessão de culturas com aveia preta, amendoim e mucuna cinza durante 18 meses foi mais efetiva no controle de M. paranaensis em solo argiloso (97%) do que em solo arenoso (75%).
Embora tenha ocorrido segregação na cutivar Icatú, os melhores resultados no manejo, devem-se a resistência parcial dessa cultivar.
A sucessão de culturas não hospedeiras realizada antes do plantio dos cafeeiros e integrada com a cultivar parcialmente resistente ‘Icatú’ foi o método mais eficiente no controle de M. paranaensis, em solo argiloso, em condições de campo durante os primeiros 4 anos
O efeito da sucessão de culturas não hospedeiras realizada antes do plantio dos cafeeiros foi diminuindo com o tempo, tendo praticamente desaparecido no 5° ano.
O efeito da bactéria como agente de controle foi praticamente inexistente nos três primeiros anos e pouco efetivo durante todo o ensaio, praticamente desaparecendo após cinco anos.
![Page 56: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/56.jpg)
Desafios e Perspectivas
Estudar a variabilidade intraespécifica de várias
populações de M. paranaensis.
Tentar correlacionar a variabilidade genética com
patogenicidade e virulência.
Estudar a patogenicidade de várias populações de
Meloidogyne spp. a diferentes acessos de cafeeiro.
Estudar a eficiência das variedades resistentes quando
usadas como porta enxerto de cultivares comerciais
em áreas infestadas.
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Equipe-Embrapa
Myrian S. Tigano - Pesquisadora Cenargen, Biologia Molecular
Rui Gomes Carneiro-Pesquisador IAPAR-Nematologia
Philippe Castagnone Sereno- INRA, França
Wallace Gonçalves- Pesquisador IAC-Fitotecnia
Ana Cristina Gomes - Técnico MS-Cenargen, CNPq
Onivaldo Randig – Pos-Doc -CNPq
Maria R. A. Almeida - Bolsista-Embrapa- Café
Marcilene F.A . dos Santos –Bolsista-Embrapa- Café
Maria de Fátima Muniz-Doutorado / UFLA, FAPEAL
Vanessa Matos-Estagiária Cenargen/CNPq
Fabio Rodrigues Sousa-Bolsista Embrapa Café
Danilo Furtado dos Santos –Bolsista CNPq
Marina D. G. Carneiro-Bolsista-Embrapa- Café
Mariana Sousa-Bolsista-Embrapa- Café
![Page 58: Apresentação cafe 2012-nematoides controle alternativo](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022052411/557075f8d8b42a51688b5118/html5/thumbnails/58.jpg)
OBRIGADA!!!!!