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APPORT DU GÉNOTYPAGE DES GROUPES SANGUINS EN
MÉDECINE TRANSFUSIONNELLE
HANANE EL KENZ27/09/2017
Corata
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¨ Systèmes de groupes sanguins
¨ Anticorps anti-érythrocytaires
¨ Génotypage des groupes sanguins
¤ Indications
¤Nomenclature de biologie clinique
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Apport du génotypage des groupes sanguins en médecine transfusionnelle
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Systèmes de groupes sanguins
¨ Classifications en plus de 30 systèmes de groupes sanguins¨ > de 300 Ag érythrocytaires¨ Transmission génétique
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Systèmes de groupes sanguins
ØInternational Society of Blood Transfusion (ISBT)ØRed Cell Immunogenetics and Blood Group Terminologyhttp://www.isbtweb.org/working-parties/red-cell-immunogenetics-and-blood-group-terminology/
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Nomenclature ISBTTable of blood group antigens v.5_151222
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Nomenclature ISBTTable of blood group antigens v.5_151222
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Nomenclature ISBTTable of blood group antigens v.5_151222
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Systèmes de groupes sanguins
¨ Détermination des spécificités érythrocytairesq par sérologie (phénotype étendu) q par biologie moléculaire (génotypage des groupes
sanguins)
Structures peptidiques Structures
glucidiques
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Systèmes de groupes sanguins
¨ Anticorps naturels (réguliers ou irréguliers)¨ Anticorps immuns¨ Auto-anticorps
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q Apparaissent suite à une stimulation antigénique transfusionnelle ou obstétricale (ou greffe)q Toujours irréguliers car leur survenue après stimulation
antigénique est inconstanteq Cibles:qAg de spécificité courante RHD, RHCE, KEL, FY,
MNS, JK…qAg de haute fréquence (>99%) ou Ag publicqAg de faible fréquence (<1%) ou Ag privé
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Anticorps immuns
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Anticorps immuns
q RAI: recherche d’anticorps irréguliersq Identification des anticorps irréguliers
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Anticorps immuns
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Anticorps immuns
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q Cible: Structures antigéniques propres du patientq Spécificité: « structures publiques » parfois anti-RH5, anti-
RH1
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Auto-anticorps
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q Fixation de petites quantités d’IgG et de complément: q IgG : 5 à 90 molécules/GRq C3d : 5 à 40 molécules/GR
q Sensibilité du test de CD :q 100 à 500 molécules d’IgG/GRq 400 à 1100 molécules de C3d/GR
q CD+ sans hémolyse clinique:q 1 à 15% des patients hospitalisésq 1/1000 à 1/14000 donneurs de sang
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Auto-anticorps
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q Fixation aspécifique d’Ig :q Hypergammaglobulinémieq Ig IV à hautes dosesq Modification de la structure membranaire du GR
q Détection de Complément activé:q Auto- et Allo-Ac médicaments, infections bactériennes
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Auto-anticorps
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q Test de CD polyvalentq Mise en évidence de la sensibilisation du GR (Ig ou Cplt)
q Test de CD monovalentq IgG, C3d, (IgA, IgM, C4…)q Souvent IgG seule ou IgG associée à du complément (AHAI mixte) ou
C3d seul (souvent quand une IgM est en cause)q Test d’élution
q Permet de définir la spécificité de l’auto-anticorpsq Panel comportant des hématies dépourvues d’Ag publics
q Exclure la présence d’un allo-Acq Procédures d’auto ou d’allo-adsorption
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Auto-anticorps
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Auto-anticorps
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q 30 gènes de Systèmes de groupes sanguins identifiés et séquencés (tous les polymorphismes sont connus)
q La plupart des polymorphismes à Substitution nucléotidique simple codant pour des substitutions d’aaq au niveau de glycosyltransférasesq ou au niveau du domaine extracellulaire de la protéine
membranaire érythrocytaireq Systèmes de groupes sanguins àAg résultant de divers
allèles d'un même gène ou d'ensemble de gènes contigus, dénommés haplotypes
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Nomenclature des groupes sanguins
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Système RH (ISBT 004)
L’antigène RH1
q Protéine D: poids moléculaire 30-33kDa, constitué de 417 acides aminés
q Protéine traversant 12 fois la membrane érythrocytaire
q 6 boucles extracellulaires à Expression du RhD
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Système RH (ISBT 004)
q Gènes RHD et RHCE sur le chromosome 1 codent pour les protéines RhD et RhCE§ 10 exons§ Homologues à 96 %
q Système RH hautement polymorpheq Complexité génique: >285 allèlesq Un phénotype peut être le résultat de plusieurs génotypes
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Système RH (ISBT 004)
L’antigène RH1q Anomalies quantitatives et/ou qualitatives
q Antigène D faible ou RHW1§ Anomalies quantitatives§ Nombre de sites antigéniques/hématie <5000§ Historiquement nommé Du§ Pas de risque d’allo-immunisation dans un contexte obstétrico-
transfusionnelq Antigène D partiel ou RHP1
§ Anomalies qualitatives à Perte de 1 ou plusieurs épitopes§ Risque d’allo-immunisation dans un contexte obstétrico-
transfusionnel
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q Antigène RH1 faibleq Transfusions
§ Transfusion avec des unités de sang RH:1q Grossesse
§ Pas d’injection d’immunoglobulines anti-RH1
q Antigène RH1 partielq Transfusions
Transfusion avec des unités de sang RH:-1q Grossesse
§ Injection d’immunoglobulines anti-RH1
Système RH (ISBT 004)
Carte de groupe sanguin
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q Variants RH1:
q Impossible de faire la discrimination entre un Ag RH1 faible et un antigène RH1 partiel en sérologie
q Densité antigénique varie pour un même variantq Résultats variables pour un même variant (avec même réactif et même
technique)
q Biologie Moléculaire
q Diminution de l’expression antigénique du RH1q Résultat discordant entre deux réactifsq Anticorps anti-RH1 chez un patient RH:1 à auto- ou allo-Ac
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Système RH (ISBT 004)
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Système RH (ISBT 004)
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Etude des variants du RHD
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Système RH (ISBT 004)
q Gène RHCE code pour la protéine RHCE
q En fonction des allèles, expression des Ag RhC et/ou Rhc et RhE
et/ou Rhe
q Polymorphisme Cc lié à la 2ème boucle extracellulaire
q Polymorphisme Ee lié à la 4ème boucle extracellulaire
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Système RH (ISBT 004)
¨ Variants RHCE
Ø Faibles et/ou partielsØ Polymorphismes peuvent donner lieu à l’apparition d’Ag de faible
fréquence et d’Ag de haute fréquence
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Etude des variants du RHCE
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Génotypage des groupes sanguins de spécificité courante
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q Génotypage en médecine transfusionnelleq Indisponibilité d’antisérum commercialq (Poly)immunisations dans un contexte transfusionnel
sans phénotype étendu disponibleq Test direct à l’antiglobuline positif (CD+)q Diminution de l’expression antigéniqueq Résultat discordant entre deux réactifsq Auto-anticorps anti-RH (polytransfusés, grossesses)
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Génotypage des groupes sanguins: Indications
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q Génotypage en médecine transfusionnelleq Indisponibilité d’antisérum commercialq (Poly)immunisations dans un contexte transfusionnel
sans phénotype étendu disponibleq Test direct à l’antiglobuline positif (CD+)q Diminution de l’expression antigéniqueq Résultat discordant entre deux réactifsq Auto-anticorps anti-RH (polytransfusés, grossesses)
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Génotypage des groupes sanguins: Indications
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q Tests de compatibilité pré-transfusionnels perturbés par la présence d’auto-Ac anti-érythrocytaires à Procédures d’auto- ou d’allo-adsorptions lourdes pour exclure un allo-Ac(Branch & Petz, 1999; Cheng, Wong, & Lee, 2001; Cid et al., 2005)
q Taux d’alloimmunisation des patients atteints d’AHAI > autres polytransfusés (drépanocytaires ou thalassémiques) (Branch & Petz 1999).
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Génotypage et AHAI: Intérêt?
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q Près de 12 à 40% des patients atteints d’AHAI ont des allo-Acsignificatifs (Leger & Garratty 1999; Branch & Petz 1982; Wallhermfechtel et al. 1984; James et al. 1988; Sokol et al. 1988; Laine & Beattie 1985; Issitt et al. 1996)
q Alternative aux techniques d’adsorption : sélection de CGR phéno-identiques § Efficace mais non applicable si patient récemment transfusé
ou si CD+ § Etude de Shirey: Phénotype étendu irréalisable dans 40%
des cas (Shirey et al. 2002)
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Génotypage et AHAI: Intérêt?
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Génotypage et AHAI : Résultats
Transfusion support of autoimmune hemolytic anemia: how could the blood group genotyping help? El KenzH, Efira A, Le PQ, Thiry C, Valsamis J, Azerad MA, Corazza F. Trans Res. 2014 Jan; 163(1): 36-42.
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Génotypage et AHAI
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q Génotypage en médecine transfusionnelleq Indisponibilité d’antisérum commercialq (Poly)immunisations dans un contexte transfusionnel
sans phénotype étendu disponibleq Test direct à l’antiglobuline positif (CD+)q Diminution de l’expression antigéniqueq Résultat discordant entre deux réactifsq Auto-anticorps anti-RH (polytransfusé, grossesse)
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Génotypage des groupes sanguins: Indications
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q Patiente drépanocytaire suivie de longue date sur le
campus Brugmann-HUDERF
q Historique transfusionnel:
q Nombreuses transfusions (crises vaso-occlusives, acute
chest syndrome,..)
q Pas de contexte d’allo-immunisation connu
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♂ Patient 41 ans drépanocytaire homozygote
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♂ Patient 41 ans drépanocytaire homozygote
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♂ Patient 41 ans drépanocytaire homozygote
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Ø Octobre 2016: Départ pour les US pour accouchement
Ø Hystérectomie suite à une hémorragie de la délivrance
Ø Multiples transfusions à RAI et CD positifs
Ø Auto et/ou allo-immunisation?
Ø Etude du gène RHD: RHD partiel de type DIIIa
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♂ Patient 41 ans drépanocytaire homozygote
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♂ Patient 41 ans drépanocytaire homozygote
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♂ Patient 41 ans drépanocytaire homozygote
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Nomenclature de biologie clinique
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