ＩＳＳＮ１６７２－４３０５ＣＮ１２－１３５２ Ｎ

实　 　 验　 　 室　 　 科　 　 学

ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ　 ＳＣＩＥＮＣＥ第 ２１ 卷　 第 ２ 期　 ２０１８ 年 ４ 月

Ｖｏｌ1049008 ２１　 Ｎｏ1049008 ２ 　 Ａｐｒ1049008 ２０１８

一种鉴定 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠基因型的简捷方法研究

闫清伟（西藏民族大学 体育学院 陕西 咸阳　 ７１２０８２）

摘　 要 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠是体育科学领域研究运动改善 ＡＤ 分子机制的一种常用模型针对该模型小鼠的基因鉴定 业内常用的办法较为繁琐 实验操作过程中容易出错 且实验过

程中采用的小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒增加了实验成本 为克服这些弊端 详细报道了一种简便高效 低成本的基因鉴定方案 并重点介绍了小鼠剪趾标记法方案 ldquo一步法rdquo ＤＮＡ 抽提方案为 ＡＰＰ ＰＳ１小鼠基因型的鉴定提供了一种简捷高效的方法参考关键词 基因型鉴定 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 剪趾标记法 ＤＮＡ 抽提

中图分类号Ｇ８０４　 　 文献标识码Ａ　 　 ｄｏｉ１０３９６９ ｊｉｓｓｎ１６７２－４３０５２０１８０２００３

Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ａ ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ ＡＰＰ ＰＳ１ ｄｏｕｂｌｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ

ＹＡＮ Ｑｉｎｇ－ｗｅｉ（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｘｉｚａｎｇ Ｍｉｎｚｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｘｉａｎｙａｎｇ ７１２０８２ Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ ＡＰＰ ＰＳ１ ｄｏｕｂｌｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｉｓ ａ ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｎｔｉ ＡＤ ｉｎ ｓｐｏｒｔｓ ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ ｉｓ ｍｏｒｅ ｃｕｍｂｅｒｓｏｍｅ ａｎｄ ｅｒｒｏｒ ｐｒｏｎｅ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ａｎｄ ｔｈｅｓｍａｌｌ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｃｏｓｔ Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｔｈｅｓｅ ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｒｅｐｏｒｔｓ ａ ｓｉｍｐｌｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｌｏｗ ｃｏｓｔ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｄｅｔａｉｌ Ｉｔ ｆｏｃｕｓｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｔｏｅ ｃｌｉｐｐｉｎｇ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ａｎｄ ldquoｏｎｅ－ｓｔｅｐrdquo ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｃｈｅｍｅ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡＰＰ ＰＳ１ ｍｉｃｅＫｅｙ ｗｏｒｄｓ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｏｅ ｃｌｉｐｐｉｎｇ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　

　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　

基金项目西藏自治区高校青年教师创新之处计划（项目

编号ＱＣ２０１５－５９）

　 　 阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒrsquo ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ＡＤ）是一

种中枢神经系统的进行性神经退行性疾病 主要表

现有学习记忆能力减退或丧失大脑 Ａβ 沉积老年

斑块增多ｔａｕ 蛋白过度磷酸化脑萎缩脑糖代谢下

降及蛋白质降解等特征［１－３］ 目前临床医学对 ＡＤ仍无有效的治疗办法 近年来体育科学领域的研

究显示合理规律的运动可明显延缓 ＡＤ 的病理进

程［４ － ５］但其内在机制尚不清楚仍需要开展广泛深

入的研究 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠是关于 ＡＤ 病理

研究的一种常用动物模型 该模型小鼠价格昂贵在研究过程中可在购买种鼠后实验室自行繁殖

由于繁殖时使用 ＡＰＰ ＰＳ１ 杂合子雄鼠与野生型雌

鼠交配繁殖根据孟德尔遗传定律可知子代小鼠中

有 １ ２ 概率的小鼠为野生型因此需对子代小鼠进

行 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因型鉴定 本研究系统介绍了一种

快速高效低成本的基因鉴定方案具体如下

１　 材料与器材

１１　 实验动物

本实验所用种鼠为 Ｃ５７ＢＬ ６ 品系 ＡＰＰ ＰＳ１ 转

基因雄性小鼠及野生雌性小鼠均购自南京大学模

式动物研究所（１）动物饲养条件

温度２５plusmn１湿度４５光照条件１２ｈ 光照 １２ｈ 黑暗自由摄食与饮水

闫清伟一种鉴定 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠基因型的简捷方法研究

（２）繁殖方法

１ 只雄性 ＡＰＰ ＰＳ１ 转基因小鼠与 ３ 只野生雌

性小鼠同笼饲养交配后约 ２０ 天产仔 本实验共鉴

定 ４ 周龄新生小鼠 ３１ 只鉴定的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基

因小鼠均为杂合子１２　 试剂与耗材

５０ｍｍｏｌ Ｌ ＮａＯＨ 溶液 （实验室自配） ｐＨ８ ０ＴｒｉｓＨＣｌ（实验室自配）２timesＴａｑ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｇｅｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）ＰＳ１ 引物（上海生工生物工程技术服务有限

公司以下简称上海生工）５０timesＴＡＥ（上海生工）琼脂糖（上海生工）核酸燃料 Ｇｏｌｄ ｖｉｅｗ（上海浩然

生物）ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ（上海碧云天生物技术有限公

司以下简称碧云天）６times上样缓冲液（碧云天）１５ｍＬ 离心管（碧云天）移液枪头（碧云天）ＰＣＲ用八联管（碧云天）１３　 仪器

移液枪水浴锅低温高速离心机低速微型离

心机ＰＣＲ 仪精密电子秤微波炉水平电泳仪凝胶成像系统

２　 基因鉴定方法

２１　 剪趾标记

小鼠采用剪脚趾法进行序号标记 即小鼠前肢

每只 ４ 个脚趾前脚趾号码由左到右分别定义为

２０３０４０５０６０７０８０９０后肢每只有 ５ 个脚趾后脚趾号码由左到右分别定义为 １２３４５６７８９１０如图 １ 所示 这样前后组合一次最多标记

１００ 只小鼠 如 ４ 号鼠的标记法为剪左侧后肢第 ４号脚趾１６ 号鼠标记方法为剪右侧后肢第 ６ 号脚

趾和第 １０ 号脚趾３０ 号鼠的标记法为剪左侧前肢

第 ３０ 号脚趾９９ 号鼠的标记法为剪右侧前肢第 ９０号脚趾和右侧后肢第 ９ 号脚趾１００ 号鼠的标记方

法为剪右侧前肢第 ９０ 号脚趾和右侧后肢第 １０ 号

脚趾其余以此类推

图 １　 小鼠脚趾号码定义

２２　 ＤＮＡ 抽提

本实验小鼠 ＤＮＡ 抽提方法采用简捷的ldquo一步

法rdquo抽提方案 具体方法为

（１）将小鼠标记时剪掉的脚趾或剪尾巴 ０２ ～０1049008 ５ｃｍ 放入事前标好的 １５ｍＬ 离心管中

（２）然后每管中加入 １００μＬ ５０ｍｍｏｌ Ｌ 的 ＮａＯＨ溶液放入 １００水浴锅中水浴裂解 ３０ｍｉｎ

（３）取出后每管加入 ２０μＬ ｐＨ＝ ８０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ中和涡轮混匀

（４）置于高速低温离心机 １２０００ｒｐｍ 离心 ５ｍｉｎ所得离心管中的上清液即为抽提出的小鼠

ＤＮＡ 混合溶液可用于后续 ＤＮＡ 扩增反应２３　 ＤＮＡ 扩增

２３１　 引物

本实验所用 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠在原始构建

时其 ＡＰＰ 基因和 ＰＳ１ 基因载体共用 ＰｒＰ 启动子所以这两个基因为连锁表达表现为ldquo全或无rdquo的表达状

态即有 ＰＳ１ 基因表达时则 ＡＰＰ 基因也同时表达为简化鉴定程序本实验只鉴定 ＰＳ１ 基因其碱基数

为 ６０８ｂｐ ＰＳ１ 基因上游引物为５－ＡＡＴ ＡＧＡ ＧＡＡＣＧＧ ＣＡＧ ＧＡＧ ＣＡ－３下游引物为５ －ＧＣＣ ＡＴＧＡＧＧ ＧＣＡ ＣＴＡ ＡＴＣ ＡＴ－３ 由于鉴定基因型属定性

实验为简化实验程序本实验不设置内参２３２　 ２０μＬ ＰＣＲ 反应体系配置

本实验采用 ２０μＬ ＰＣＲ 反应体系扩增小鼠 ＰＳ１基因反应体系配置方案见表 １ 所示 每只小鼠对

应的扩增体系配置于事先标记好的 ＰＣＲ 八联管中盖上八联盖震荡混匀微型离心机离心 １５ｓ用于

后续 ＤＮＡ 扩增

表 １　 ２０μＬ ＤＮＡ 扩增反应体系

试剂 体积（μＬ） 规格

２ times ＭａｓｔｅｒＭｉｘ

１０

５０ｕｎｉｔｓ ｍＬＴａｑ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ２ times ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ （ ｐＨ８ ５）４ｍＭ ＭｇＣＬ２ ２ times Ｌｏａｄｉｎｇ ｄｙｅｄＡＴＰ ｄＣＴＰ ｄＧＴＰ ｄＴＴＰ０1049008 ４ｍＭ ｅａｃｈ

上游引物 ００４ １００μＭ Ｌ

下游引物 ００４ １００Μｍ Ｌ

ＤＮＡ 模板 ２

ｄｄＨ２Ｏ ７９２

２３３　 ＰＣＲ 扩增

将上述装有配制好的 ２０μＬ 小鼠 ＤＮＡ 扩增体

系的八联管置于 ＰＣＲ 扩增以上扩增设置扩增程

序 基本程序为（１）９５预变性 ５ｍｉｎ（共 １ 个循环）（２）９５变性 ３０ｓ５８退火 ３５ｓ７２延伸 ４５ｓ

９

（共 ４０ 个循环）（３）７２充分延伸 ３ｍｉｎ（共 １ 个循环）（４）扩增完毕 ４保持（循环数infin ）如图 ２ 所

示 总扩增时间大约需要 ２ｈ

图 ２　 ＰＳ１ 基因 ＰＣＲ 反应程序

２４　 琼脂糖凝胶电泳

２４１　 １琼脂糖凝胶配制

用精密电子秤称取 １ｇ 琼脂糖导入 ３００ｍＬ 锥

形瓶中 再用量筒量取 １００ｍＬ １timesＴＡＥ 溶液倒入上

述锥形瓶中微波加热溶解 待琼脂糖完全溶解后

取出室温放置 ５ ～ １０ｍｉｎ 后用移液枪吸取核酸染

料 Ｇｏｌｄ ｖｉｅｗ １０μＬ 加入该锥形瓶中充分混匀后倒

入事先准备好的插有梳子的制胶槽中室温冷却凝

固大约需要 ３０ｍｉｎ 待胶凝固后拔出梳子然后将

胶放入事先准备好的水平电泳槽中倒入适量（使ＴＡＥ 溶液高于胶面）１timesＴＡＥ 溶液待用２４２　 电泳及成像

点样法使 １０μＬ ＤＮＡ 扩增产物与 ６ times Ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ ２μＬ 充分混合每孔上样量为 １０μＬ凝胶两端

胶孔中各加入 ５μＬ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ上样完毕后１１０Ｖ电压电泳 ３０ｍｉｎ电泳结束后将凝胶置于凝胶成像

系统中观察并拍照

３　 结果

凝胶成像显示本实验所鉴定的 ３１ 只子代小鼠

中有 １３ 只为 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 本次扩增

的 ＰＳ１ 基因 ＤＮＡ 链长为 ６０８ｂｐ因此在 ５００ｂｐ 和

１０００ｂｐ 之间显示条带的孔道均有 ＰＳ１ 基因条带该孔对应的小鼠为 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 本实

验鉴定出的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠对应的泳道分

别是 １４５１２１３１６１８１９２３２４２５２７２９见图

３ 所示

图 ３　 小鼠 ＰＳ１ 基因凝胶系统成像

４　 讨论

ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠是目前体育科学领域

研究运动干预阿尔茨海默病分子机制的一种较为常

用的转基因动物模型其主要是给 Ｃ５７ＢＬ ６ 小鼠转

入 ＡＰＰ 和 ＰＳ１ 两个基因使小鼠过表达淀粉样前体

蛋白进而在低月龄时即可表现出 Ａβ 堆积的 ＡＤ 症

状［６ － ７］ 目前对于运动干预阿尔茨海默病的病理机

制研究中采用的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因模型在进行选

择实验动物之前不可避免要对动物的基因型进行

鉴定因此合理高效的基因鉴定方案是提高实验效

率的关键 本实验采用的基因鉴定方案其优点主

要在于 ＤＮＡ 的ldquo一步法rdquo抽提方案该方案可有效

降低鉴定成本缩短鉴定时耗对于 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因的鉴定以往的研究多采用

专用的小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒进行 ＤＮＡ 抽

提［８－１０］ 小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒在抽提 ＤＮＡ 时虽有抽提纯度高的优点但其整个抽提耗时较长通常在第一步裂解时即需要 ６ ～ ８ｈ整个鉴定过程需

１２ｈ 以上且中间程序繁琐操作时容易出错 由于

对 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因鉴定仅为定性研究无需定量因此可采用粗略的ldquo一步法rdquo抽提方案且后续 ＰＣＲ 扩

增时无需对内参基因进行扩增 ldquo一步法rdquo抽提方

案中间过程操作简捷不易出错其可在 ４０ｍｉｎ 内完

成对 ＤＮＡ 的抽提且抽提试剂为一般实验室常用试

剂实验室可自行配制因而大大节约了时间成本和

经济成本对于一般的 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因及其他基因的

鉴定３ｈ 左右即可得出结果 因此本实验所采用

的基因鉴定方案有准确高效操作简便等优点极大地降低了实验的难度和成本是一种值得借鉴和

推广的基因鉴定方案

５　 结语

ldquo一步法rdquo基因鉴定方法为基因型鉴定提供了

一种快速高效的方法参考其关键在于对 ＤＮＡ 抽提

过程的方法改进该方法显著提高了对转基因小鼠

的鉴定与分选效率有利于后续科学研究的快速高

效开展

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 Ｃａｃａｂｅｌｏｓ ＲＴｏｒｒｅｌｌａｓ ＣＬoacuteｐｅｚ－Ｍｕntildeｏｚ ＦＥｐｉｇｅｎｏｍｉｃｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ２０１４６（３）７５－８２

［２］ 　 Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＭＫｉｎｇ Ａ ＥＷｏｏｄｈｏｕｓｅ Ａｅｔ ａｌＴｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｏｃａｌ ｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙ ｏｎ ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎａｐｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＡＰＰ ＰＳ１ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ２０１５２６７２１９－２２９

（下转第 １４ 页）

０１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

（ｄ）颜色熵检索结果

图 ２　 花草检索结果

（ａ）灰度共生矩阵的检索结果

（ｂ）Ｇａｂｏｒ 小波检索的结果

图 ３　 纹理图像检索结果

经过多次实验选用不同的图像和不同的方法比

较分析可知在颜色特征方面颜色直方图描述了各

个颜色出现的频率适用于颜色信息种类较多的图

像累积直方图与颜色直方图检索结果大致相似但是计算精度有所提高因此可用于检索图像质量不好

的图像能有效提高检索结果的精确度颜色矩利用

其前三阶矩来表达颜色的分布信息区分能力较弱所以适用于图像间差异大的图像库颜色熵可用于检

索形状相同颜色却不一样的相关物体 在纹理特征

方面灰度共生矩阵的纹理特征适用于描述大而疏的

图像对于细密的图像检索效果较差Ｇａｂｏｒ 小波变换

方法比灰度共生矩阵检索效果好不仅可以获得较好

的频域信息同时还能反映图像像素的空间信息并且对图像的尺寸变化不敏感适合进行多尺度分析

３　 结语

根据视频处理与分析的过程并结合教学需求

设计多个实验本文选取运动目标跟踪和图像检索

作为示例进行说明 首先介绍了视频处理与分析的

重要性以及实验设计的必要性然后是对实验课程

设计的介绍包括实验目的实验环境实验方法和

结果分析 实验的设计不仅使课堂教学与实践教学

相统一便于学生理解抽象的图像特征而且提高学

生的动手和创新实践能力激发学生兴趣

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 陈汗青数字图像处理技术研究进展［ Ｊ］ 工业控制计算机２０１３２６（１）７２－７４

［２］ 　 田晨旭蔡绪福杨昌跃等ldquo实验教学＋rdquo的设计策略与实现

方法［Ｊ］ 实验科学与技术２０１７１５（１）１３１－１３３［３］ 　 秦小文基于视频序列的运动目标检测与跟踪算法的研究

［Ｄ］太原中北大学２０１２［４］ 　 高韬刘正光张军等基于特征点的多运动目标跟踪［ Ｊ］ 电

子与信息学报２０１０３２（５）１１１１－１１１５［５］ 　 谢红原博解武等ＬＫ 光流法和三帧差分法的运动目标检测

算法［Ｊ］ 应用科技２０１６４３（３）２３－２７［６］ 　 李国杨国庆张心珂等一种基于尺度不变特征点的运动目

标检测算法［Ｊ］ 信息与控制２００８３７（３）２８０－２８３［７］ 　 王莲基于内容的图像检索研究进展［ Ｊ］ 现代情报２００５２５

（５）２５－２８［８］ 　 张鑫基于颜色特征的图像检索方法研究［ Ｊ］ 计算机科学

２０１２３９（１１）２４３－２４５［９］ 　 李友峰基于颜色和纹理特征的图像检索相关算法的研究

［Ｄ］成都电子科技大学２００９［１０］ 　 王晓东纹理图像分类系统及其关键技术研究［Ｄ］南京南

京邮电大学２０１３［１１］ 　 贾婧王忠芝基于共生矩阵的图像检索系统的研究［ Ｊ］ 微计

算机信息２０１０２６（２９）２０２－２０３

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０９－２７作者简介刘永康（１９９１－）男山东寿光人研究生主要研

究方向数字图像处理模式识别

10509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979（上接第 １０ 页）［３］ 　 Ｚｅｒｂｉ ＶＫｌｅｉｎｎｉｊｅｎｈｕｉｓ ＭＦａｎｇ Ｘｅｔ ａｌＧｒａｙ ａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｄｅ

ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ａｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ ２０１３ ３４（５） １４４０－１４５０

［４］ 　 Ｌｉｕ Ｈ Ｚｈａｏ Ｇ Ｚｈａｎｇ Ｈ ｅｔ ａｌ Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｔｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅ－ｌｉｋｅ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ［ Ｊ］ ＢｅｈａｖｉｏｕｒａｌＢｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１３２５６２６１－２７２

［５］ 　 ＬｉｕＨＺｈａｏ ＧＣａｉ Ｋｅｔ ａｌＴｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｌｏｎｇ － ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ［ Ｊ］ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１１２１８（２）３０８－３１４

［６］ 　 ＺｈａｎｇＹＹｉｎ ＦＬｉｕ Ｊｅｔ ａｌＧｅｎｉｐｏｓｉｄｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ β－ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒrsquo ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２０１５８９７－１６

［７］ 　 ＹａｏＺＪｉｎｇ ＨＷａｎｇ Ｄｅｔ ａｌ Ｖａｌｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｏｌｆａｃｔｏｒｙｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅＡｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｔｏ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｂｕｌｂ［Ｊ］ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ２０１６１４４５３－５９

［８］ 　 武强李露斯范文辉等ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因 ＡＤ 传代小鼠的基因

型鉴定及其行为学分析［Ｊ］卒中与神经疾病２００９（５）２９３－２９６［９］ 　 毛敬洁李钻芳林如辉等ＡＰＰ ＰＳｌ 双转基因阿尔海默病小鼠

的繁殖及基因型鉴定［Ｊ］实用中西医结合临床２０１５（１０）４－６［１０］ 　 宋敏唐军李达兵等 ＰＳ１ ＡＰＰ 双转基因阿尔茨海默病模

型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析［ Ｊ］ 第三军医大

学学报２００６（１４）１４５３－１４５６

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０８－３１作者简介闫清伟（１９８２－）男河南新乡人博士讲师主

要研究方向为体育学习与身心健康

４１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

闫清伟一种鉴定 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠基因型的简捷方法研究

（２）繁殖方法

１ 只雄性 ＡＰＰ ＰＳ１ 转基因小鼠与 ３ 只野生雌

性小鼠同笼饲养交配后约 ２０ 天产仔 本实验共鉴

定 ４ 周龄新生小鼠 ３１ 只鉴定的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基

因小鼠均为杂合子１２　 试剂与耗材

５０ｍｍｏｌ Ｌ ＮａＯＨ 溶液 （实验室自配） ｐＨ８ ０ＴｒｉｓＨＣｌ（实验室自配）２timesＴａｑ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｇｅｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）ＰＳ１ 引物（上海生工生物工程技术服务有限

公司以下简称上海生工）５０timesＴＡＥ（上海生工）琼脂糖（上海生工）核酸燃料 Ｇｏｌｄ ｖｉｅｗ（上海浩然

生物）ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ（上海碧云天生物技术有限公

司以下简称碧云天）６times上样缓冲液（碧云天）１５ｍＬ 离心管（碧云天）移液枪头（碧云天）ＰＣＲ用八联管（碧云天）１３　 仪器

移液枪水浴锅低温高速离心机低速微型离

心机ＰＣＲ 仪精密电子秤微波炉水平电泳仪凝胶成像系统

２　 基因鉴定方法

２１　 剪趾标记

小鼠采用剪脚趾法进行序号标记 即小鼠前肢

每只 ４ 个脚趾前脚趾号码由左到右分别定义为

２０３０４０５０６０７０８０９０后肢每只有 ５ 个脚趾后脚趾号码由左到右分别定义为 １２３４５６７８９１０如图 １ 所示 这样前后组合一次最多标记

１００ 只小鼠 如 ４ 号鼠的标记法为剪左侧后肢第 ４号脚趾１６ 号鼠标记方法为剪右侧后肢第 ６ 号脚

趾和第 １０ 号脚趾３０ 号鼠的标记法为剪左侧前肢

第 ３０ 号脚趾９９ 号鼠的标记法为剪右侧前肢第 ９０号脚趾和右侧后肢第 ９ 号脚趾１００ 号鼠的标记方

法为剪右侧前肢第 ９０ 号脚趾和右侧后肢第 １０ 号

脚趾其余以此类推

图 １　 小鼠脚趾号码定义

２２　 ＤＮＡ 抽提

本实验小鼠 ＤＮＡ 抽提方法采用简捷的ldquo一步

法rdquo抽提方案 具体方法为

（１）将小鼠标记时剪掉的脚趾或剪尾巴 ０２ ～０1049008 ５ｃｍ 放入事前标好的 １５ｍＬ 离心管中

（２）然后每管中加入 １００μＬ ５０ｍｍｏｌ Ｌ 的 ＮａＯＨ溶液放入 １００水浴锅中水浴裂解 ３０ｍｉｎ

（３）取出后每管加入 ２０μＬ ｐＨ＝ ８０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ中和涡轮混匀

（４）置于高速低温离心机 １２０００ｒｐｍ 离心 ５ｍｉｎ所得离心管中的上清液即为抽提出的小鼠

ＤＮＡ 混合溶液可用于后续 ＤＮＡ 扩增反应２３　 ＤＮＡ 扩增

２３１　 引物

本实验所用 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠在原始构建

时其 ＡＰＰ 基因和 ＰＳ１ 基因载体共用 ＰｒＰ 启动子所以这两个基因为连锁表达表现为ldquo全或无rdquo的表达状

态即有 ＰＳ１ 基因表达时则 ＡＰＰ 基因也同时表达为简化鉴定程序本实验只鉴定 ＰＳ１ 基因其碱基数

为 ６０８ｂｐ ＰＳ１ 基因上游引物为５－ＡＡＴ ＡＧＡ ＧＡＡＣＧＧ ＣＡＧ ＧＡＧ ＣＡ－３下游引物为５ －ＧＣＣ ＡＴＧＡＧＧ ＧＣＡ ＣＴＡ ＡＴＣ ＡＴ－３ 由于鉴定基因型属定性

实验为简化实验程序本实验不设置内参２３２　 ２０μＬ ＰＣＲ 反应体系配置

本实验采用 ２０μＬ ＰＣＲ 反应体系扩增小鼠 ＰＳ１基因反应体系配置方案见表 １ 所示 每只小鼠对

应的扩增体系配置于事先标记好的 ＰＣＲ 八联管中盖上八联盖震荡混匀微型离心机离心 １５ｓ用于

后续 ＤＮＡ 扩增

表 １　 ２０μＬ ＤＮＡ 扩增反应体系

试剂 体积（μＬ） 规格

２ times ＭａｓｔｅｒＭｉｘ

１０

５０ｕｎｉｔｓ ｍＬＴａｑ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ２ times ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ （ ｐＨ８ ５）４ｍＭ ＭｇＣＬ２ ２ times Ｌｏａｄｉｎｇ ｄｙｅｄＡＴＰ ｄＣＴＰ ｄＧＴＰ ｄＴＴＰ０1049008 ４ｍＭ ｅａｃｈ

上游引物 ００４ １００μＭ Ｌ

下游引物 ００４ １００Μｍ Ｌ

ＤＮＡ 模板 ２

ｄｄＨ２Ｏ ７９２

２３３　 ＰＣＲ 扩增

将上述装有配制好的 ２０μＬ 小鼠 ＤＮＡ 扩增体

系的八联管置于 ＰＣＲ 扩增以上扩增设置扩增程

序 基本程序为（１）９５预变性 ５ｍｉｎ（共 １ 个循环）（２）９５变性 ３０ｓ５８退火 ３５ｓ７２延伸 ４５ｓ

９

（共 ４０ 个循环）（３）７２充分延伸 ３ｍｉｎ（共 １ 个循环）（４）扩增完毕 ４保持（循环数infin ）如图 ２ 所

示 总扩增时间大约需要 ２ｈ

图 ２　 ＰＳ１ 基因 ＰＣＲ 反应程序

２４　 琼脂糖凝胶电泳

２４１　 １琼脂糖凝胶配制

用精密电子秤称取 １ｇ 琼脂糖导入 ３００ｍＬ 锥

形瓶中 再用量筒量取 １００ｍＬ １timesＴＡＥ 溶液倒入上

述锥形瓶中微波加热溶解 待琼脂糖完全溶解后

取出室温放置 ５ ～ １０ｍｉｎ 后用移液枪吸取核酸染

料 Ｇｏｌｄ ｖｉｅｗ １０μＬ 加入该锥形瓶中充分混匀后倒

入事先准备好的插有梳子的制胶槽中室温冷却凝

固大约需要 ３０ｍｉｎ 待胶凝固后拔出梳子然后将

胶放入事先准备好的水平电泳槽中倒入适量（使ＴＡＥ 溶液高于胶面）１timesＴＡＥ 溶液待用２４２　 电泳及成像

点样法使 １０μＬ ＤＮＡ 扩增产物与 ６ times Ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ ２μＬ 充分混合每孔上样量为 １０μＬ凝胶两端

胶孔中各加入 ５μＬ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ上样完毕后１１０Ｖ电压电泳 ３０ｍｉｎ电泳结束后将凝胶置于凝胶成像

系统中观察并拍照

３　 结果

凝胶成像显示本实验所鉴定的 ３１ 只子代小鼠

中有 １３ 只为 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 本次扩增

的 ＰＳ１ 基因 ＤＮＡ 链长为 ６０８ｂｐ因此在 ５００ｂｐ 和

１０００ｂｐ 之间显示条带的孔道均有 ＰＳ１ 基因条带该孔对应的小鼠为 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 本实

验鉴定出的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠对应的泳道分

别是 １４５１２１３１６１８１９２３２４２５２７２９见图

３ 所示

图 ３　 小鼠 ＰＳ１ 基因凝胶系统成像

４　 讨论

ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠是目前体育科学领域

研究运动干预阿尔茨海默病分子机制的一种较为常

用的转基因动物模型其主要是给 Ｃ５７ＢＬ ６ 小鼠转

入 ＡＰＰ 和 ＰＳ１ 两个基因使小鼠过表达淀粉样前体

蛋白进而在低月龄时即可表现出 Ａβ 堆积的 ＡＤ 症

状［６ － ７］ 目前对于运动干预阿尔茨海默病的病理机

制研究中采用的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因模型在进行选

择实验动物之前不可避免要对动物的基因型进行

鉴定因此合理高效的基因鉴定方案是提高实验效

率的关键 本实验采用的基因鉴定方案其优点主

要在于 ＤＮＡ 的ldquo一步法rdquo抽提方案该方案可有效

降低鉴定成本缩短鉴定时耗对于 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因的鉴定以往的研究多采用

专用的小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒进行 ＤＮＡ 抽

提［８－１０］ 小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒在抽提 ＤＮＡ 时虽有抽提纯度高的优点但其整个抽提耗时较长通常在第一步裂解时即需要 ６ ～ ８ｈ整个鉴定过程需

１２ｈ 以上且中间程序繁琐操作时容易出错 由于

对 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因鉴定仅为定性研究无需定量因此可采用粗略的ldquo一步法rdquo抽提方案且后续 ＰＣＲ 扩

增时无需对内参基因进行扩增 ldquo一步法rdquo抽提方

案中间过程操作简捷不易出错其可在 ４０ｍｉｎ 内完

成对 ＤＮＡ 的抽提且抽提试剂为一般实验室常用试

剂实验室可自行配制因而大大节约了时间成本和

经济成本对于一般的 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因及其他基因的

鉴定３ｈ 左右即可得出结果 因此本实验所采用

的基因鉴定方案有准确高效操作简便等优点极大地降低了实验的难度和成本是一种值得借鉴和

推广的基因鉴定方案

５　 结语

ldquo一步法rdquo基因鉴定方法为基因型鉴定提供了

一种快速高效的方法参考其关键在于对 ＤＮＡ 抽提

过程的方法改进该方法显著提高了对转基因小鼠

的鉴定与分选效率有利于后续科学研究的快速高

效开展

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 Ｃａｃａｂｅｌｏｓ ＲＴｏｒｒｅｌｌａｓ ＣＬoacuteｐｅｚ－Ｍｕntildeｏｚ ＦＥｐｉｇｅｎｏｍｉｃｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ２０１４６（３）７５－８２

［２］ 　 Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＭＫｉｎｇ Ａ ＥＷｏｏｄｈｏｕｓｅ Ａｅｔ ａｌＴｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｏｃａｌ ｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙ ｏｎ ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎａｐｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＡＰＰ ＰＳ１ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ２０１５２６７２１９－２２９

（下转第 １４ 页）

０１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

（ｄ）颜色熵检索结果

图 ２　 花草检索结果

（ａ）灰度共生矩阵的检索结果

（ｂ）Ｇａｂｏｒ 小波检索的结果

图 ３　 纹理图像检索结果

经过多次实验选用不同的图像和不同的方法比

较分析可知在颜色特征方面颜色直方图描述了各

个颜色出现的频率适用于颜色信息种类较多的图

像累积直方图与颜色直方图检索结果大致相似但是计算精度有所提高因此可用于检索图像质量不好

的图像能有效提高检索结果的精确度颜色矩利用

其前三阶矩来表达颜色的分布信息区分能力较弱所以适用于图像间差异大的图像库颜色熵可用于检

索形状相同颜色却不一样的相关物体 在纹理特征

方面灰度共生矩阵的纹理特征适用于描述大而疏的

图像对于细密的图像检索效果较差Ｇａｂｏｒ 小波变换

方法比灰度共生矩阵检索效果好不仅可以获得较好

的频域信息同时还能反映图像像素的空间信息并且对图像的尺寸变化不敏感适合进行多尺度分析

３　 结语

根据视频处理与分析的过程并结合教学需求

设计多个实验本文选取运动目标跟踪和图像检索

作为示例进行说明 首先介绍了视频处理与分析的

重要性以及实验设计的必要性然后是对实验课程

设计的介绍包括实验目的实验环境实验方法和

结果分析 实验的设计不仅使课堂教学与实践教学

相统一便于学生理解抽象的图像特征而且提高学

生的动手和创新实践能力激发学生兴趣

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 陈汗青数字图像处理技术研究进展［ Ｊ］ 工业控制计算机２０１３２６（１）７２－７４

［２］ 　 田晨旭蔡绪福杨昌跃等ldquo实验教学＋rdquo的设计策略与实现

方法［Ｊ］ 实验科学与技术２０１７１５（１）１３１－１３３［３］ 　 秦小文基于视频序列的运动目标检测与跟踪算法的研究

［Ｄ］太原中北大学２０１２［４］ 　 高韬刘正光张军等基于特征点的多运动目标跟踪［ Ｊ］ 电

子与信息学报２０１０３２（５）１１１１－１１１５［５］ 　 谢红原博解武等ＬＫ 光流法和三帧差分法的运动目标检测

算法［Ｊ］ 应用科技２０１６４３（３）２３－２７［６］ 　 李国杨国庆张心珂等一种基于尺度不变特征点的运动目

标检测算法［Ｊ］ 信息与控制２００８３７（３）２８０－２８３［７］ 　 王莲基于内容的图像检索研究进展［ Ｊ］ 现代情报２００５２５

（５）２５－２８［８］ 　 张鑫基于颜色特征的图像检索方法研究［ Ｊ］ 计算机科学

２０１２３９（１１）２４３－２４５［９］ 　 李友峰基于颜色和纹理特征的图像检索相关算法的研究

［Ｄ］成都电子科技大学２００９［１０］ 　 王晓东纹理图像分类系统及其关键技术研究［Ｄ］南京南

京邮电大学２０１３［１１］ 　 贾婧王忠芝基于共生矩阵的图像检索系统的研究［ Ｊ］ 微计

算机信息２０１０２６（２９）２０２－２０３

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０９－２７作者简介刘永康（１９９１－）男山东寿光人研究生主要研

究方向数字图像处理模式识别

10509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979（上接第 １０ 页）［３］ 　 Ｚｅｒｂｉ ＶＫｌｅｉｎｎｉｊｅｎｈｕｉｓ ＭＦａｎｇ Ｘｅｔ ａｌＧｒａｙ ａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｄｅ

ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ａｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ ２０１３ ３４（５） １４４０－１４５０

［４］ 　 Ｌｉｕ Ｈ Ｚｈａｏ Ｇ Ｚｈａｎｇ Ｈ ｅｔ ａｌ Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｔｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅ－ｌｉｋｅ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ［ Ｊ］ ＢｅｈａｖｉｏｕｒａｌＢｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１３２５６２６１－２７２

［５］ 　 ＬｉｕＨＺｈａｏ ＧＣａｉ Ｋｅｔ ａｌＴｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｌｏｎｇ － ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ［ Ｊ］ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１１２１８（２）３０８－３１４

［６］ 　 ＺｈａｎｇＹＹｉｎ ＦＬｉｕ Ｊｅｔ ａｌＧｅｎｉｐｏｓｉｄｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ β－ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒrsquo ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２０１５８９７－１６

［７］ 　 ＹａｏＺＪｉｎｇ ＨＷａｎｇ Ｄｅｔ ａｌ Ｖａｌｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｏｌｆａｃｔｏｒｙｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅＡｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｔｏ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｂｕｌｂ［Ｊ］ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ２０１６１４４５３－５９

［８］ 　 武强李露斯范文辉等ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因 ＡＤ 传代小鼠的基因

型鉴定及其行为学分析［Ｊ］卒中与神经疾病２００９（５）２９３－２９６［９］ 　 毛敬洁李钻芳林如辉等ＡＰＰ ＰＳｌ 双转基因阿尔海默病小鼠

的繁殖及基因型鉴定［Ｊ］实用中西医结合临床２０１５（１０）４－６［１０］ 　 宋敏唐军李达兵等 ＰＳ１ ＡＰＰ 双转基因阿尔茨海默病模

型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析［ Ｊ］ 第三军医大

学学报２００６（１４）１４５３－１４５６

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０８－３１作者简介闫清伟（１９８２－）男河南新乡人博士讲师主

要研究方向为体育学习与身心健康

４１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

（共 ４０ 个循环）（３）７２充分延伸 ３ｍｉｎ（共 １ 个循环）（４）扩增完毕 ４保持（循环数infin ）如图 ２ 所

示 总扩增时间大约需要 ２ｈ

图 ２　 ＰＳ１ 基因 ＰＣＲ 反应程序

２４　 琼脂糖凝胶电泳

２４１　 １琼脂糖凝胶配制

用精密电子秤称取 １ｇ 琼脂糖导入 ３００ｍＬ 锥

形瓶中 再用量筒量取 １００ｍＬ １timesＴＡＥ 溶液倒入上

述锥形瓶中微波加热溶解 待琼脂糖完全溶解后

取出室温放置 ５ ～ １０ｍｉｎ 后用移液枪吸取核酸染

料 Ｇｏｌｄ ｖｉｅｗ １０μＬ 加入该锥形瓶中充分混匀后倒

入事先准备好的插有梳子的制胶槽中室温冷却凝

固大约需要 ３０ｍｉｎ 待胶凝固后拔出梳子然后将

胶放入事先准备好的水平电泳槽中倒入适量（使ＴＡＥ 溶液高于胶面）１timesＴＡＥ 溶液待用２４２　 电泳及成像

点样法使 １０μＬ ＤＮＡ 扩增产物与 ６ times Ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ ２μＬ 充分混合每孔上样量为 １０μＬ凝胶两端

胶孔中各加入 ５μＬ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ上样完毕后１１０Ｖ电压电泳 ３０ｍｉｎ电泳结束后将凝胶置于凝胶成像

系统中观察并拍照

３　 结果

凝胶成像显示本实验所鉴定的 ３１ 只子代小鼠

中有 １３ 只为 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 本次扩增

的 ＰＳ１ 基因 ＤＮＡ 链长为 ６０８ｂｐ因此在 ５００ｂｐ 和

１０００ｂｐ 之间显示条带的孔道均有 ＰＳ１ 基因条带该孔对应的小鼠为 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠 本实

验鉴定出的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠对应的泳道分

别是 １４５１２１３１６１８１９２３２４２５２７２９见图

３ 所示

图 ３　 小鼠 ＰＳ１ 基因凝胶系统成像

４　 讨论

ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因小鼠是目前体育科学领域

研究运动干预阿尔茨海默病分子机制的一种较为常

用的转基因动物模型其主要是给 Ｃ５７ＢＬ ６ 小鼠转

入 ＡＰＰ 和 ＰＳ１ 两个基因使小鼠过表达淀粉样前体

蛋白进而在低月龄时即可表现出 Ａβ 堆积的 ＡＤ 症

状［６ － ７］ 目前对于运动干预阿尔茨海默病的病理机

制研究中采用的 ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因模型在进行选

择实验动物之前不可避免要对动物的基因型进行

鉴定因此合理高效的基因鉴定方案是提高实验效

率的关键 本实验采用的基因鉴定方案其优点主

要在于 ＤＮＡ 的ldquo一步法rdquo抽提方案该方案可有效

降低鉴定成本缩短鉴定时耗对于 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因的鉴定以往的研究多采用

专用的小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒进行 ＤＮＡ 抽

提［８－１０］ 小剂量 ＤＮＡ 抽提试剂盒在抽提 ＤＮＡ 时虽有抽提纯度高的优点但其整个抽提耗时较长通常在第一步裂解时即需要 ６ ～ ８ｈ整个鉴定过程需

１２ｈ 以上且中间程序繁琐操作时容易出错 由于

对 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因鉴定仅为定性研究无需定量因此可采用粗略的ldquo一步法rdquo抽提方案且后续 ＰＣＲ 扩

增时无需对内参基因进行扩增 ldquo一步法rdquo抽提方

案中间过程操作简捷不易出错其可在 ４０ｍｉｎ 内完

成对 ＤＮＡ 的抽提且抽提试剂为一般实验室常用试

剂实验室可自行配制因而大大节约了时间成本和

经济成本对于一般的 ＡＰＰ ＰＳ１ 基因及其他基因的

鉴定３ｈ 左右即可得出结果 因此本实验所采用

的基因鉴定方案有准确高效操作简便等优点极大地降低了实验的难度和成本是一种值得借鉴和

推广的基因鉴定方案

５　 结语

ldquo一步法rdquo基因鉴定方法为基因型鉴定提供了

一种快速高效的方法参考其关键在于对 ＤＮＡ 抽提

过程的方法改进该方法显著提高了对转基因小鼠

的鉴定与分选效率有利于后续科学研究的快速高

效开展

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 Ｃａｃａｂｅｌｏｓ ＲＴｏｒｒｅｌｌａｓ ＣＬoacuteｐｅｚ－Ｍｕntildeｏｚ ＦＥｐｉｇｅｎｏｍｉｃｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ２０１４６（３）７５－８２

［２］ 　 Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＭＫｉｎｇ Ａ ＥＷｏｏｄｈｏｕｓｅ Ａｅｔ ａｌＴｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｏｃａｌ ｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙ ｏｎ ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎａｐｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＡＰＰ ＰＳ１ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ２０１５２６７２１９－２２９

（下转第 １４ 页）

０１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

（ｄ）颜色熵检索结果

图 ２　 花草检索结果

（ａ）灰度共生矩阵的检索结果

（ｂ）Ｇａｂｏｒ 小波检索的结果

图 ３　 纹理图像检索结果

经过多次实验选用不同的图像和不同的方法比

较分析可知在颜色特征方面颜色直方图描述了各

个颜色出现的频率适用于颜色信息种类较多的图

像累积直方图与颜色直方图检索结果大致相似但是计算精度有所提高因此可用于检索图像质量不好

的图像能有效提高检索结果的精确度颜色矩利用

其前三阶矩来表达颜色的分布信息区分能力较弱所以适用于图像间差异大的图像库颜色熵可用于检

索形状相同颜色却不一样的相关物体 在纹理特征

方面灰度共生矩阵的纹理特征适用于描述大而疏的

图像对于细密的图像检索效果较差Ｇａｂｏｒ 小波变换

方法比灰度共生矩阵检索效果好不仅可以获得较好

的频域信息同时还能反映图像像素的空间信息并且对图像的尺寸变化不敏感适合进行多尺度分析

３　 结语

根据视频处理与分析的过程并结合教学需求

设计多个实验本文选取运动目标跟踪和图像检索

作为示例进行说明 首先介绍了视频处理与分析的

重要性以及实验设计的必要性然后是对实验课程

设计的介绍包括实验目的实验环境实验方法和

结果分析 实验的设计不仅使课堂教学与实践教学

相统一便于学生理解抽象的图像特征而且提高学

生的动手和创新实践能力激发学生兴趣

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 陈汗青数字图像处理技术研究进展［ Ｊ］ 工业控制计算机２０１３２６（１）７２－７４

［２］ 　 田晨旭蔡绪福杨昌跃等ldquo实验教学＋rdquo的设计策略与实现

方法［Ｊ］ 实验科学与技术２０１７１５（１）１３１－１３３［３］ 　 秦小文基于视频序列的运动目标检测与跟踪算法的研究

［Ｄ］太原中北大学２０１２［４］ 　 高韬刘正光张军等基于特征点的多运动目标跟踪［ Ｊ］ 电

子与信息学报２０１０３２（５）１１１１－１１１５［５］ 　 谢红原博解武等ＬＫ 光流法和三帧差分法的运动目标检测

算法［Ｊ］ 应用科技２０１６４３（３）２３－２７［６］ 　 李国杨国庆张心珂等一种基于尺度不变特征点的运动目

标检测算法［Ｊ］ 信息与控制２００８３７（３）２８０－２８３［７］ 　 王莲基于内容的图像检索研究进展［ Ｊ］ 现代情报２００５２５

（５）２５－２８［８］ 　 张鑫基于颜色特征的图像检索方法研究［ Ｊ］ 计算机科学

２０１２３９（１１）２４３－２４５［９］ 　 李友峰基于颜色和纹理特征的图像检索相关算法的研究

［Ｄ］成都电子科技大学２００９［１０］ 　 王晓东纹理图像分类系统及其关键技术研究［Ｄ］南京南

京邮电大学２０１３［１１］ 　 贾婧王忠芝基于共生矩阵的图像检索系统的研究［ Ｊ］ 微计

算机信息２０１０２６（２９）２０２－２０３

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０９－２７作者简介刘永康（１９９１－）男山东寿光人研究生主要研

究方向数字图像处理模式识别

10509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979105097910509791050979（上接第 １０ 页）［３］ 　 Ｚｅｒｂｉ ＶＫｌｅｉｎｎｉｊｅｎｈｕｉｓ ＭＦａｎｇ Ｘｅｔ ａｌＧｒａｙ ａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｄｅ

ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ａｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ ２０１３ ３４（５） １４４０－１４５０

［４］ 　 Ｌｉｕ Ｈ Ｚｈａｏ Ｇ Ｚｈａｎｇ Ｈ ｅｔ ａｌ Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｔｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅ－ｌｉｋｅ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ［ Ｊ］ ＢｅｈａｖｉｏｕｒａｌＢｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１３２５６２６１－２７２

［５］ 　 ＬｉｕＨＺｈａｏ ＧＣａｉ Ｋｅｔ ａｌＴｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｌｏｎｇ － ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ［ Ｊ］ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１１２１８（２）３０８－３１４

［６］ 　 ＺｈａｎｇＹＹｉｎ ＦＬｉｕ Ｊｅｔ ａｌＧｅｎｉｐｏｓｉｄｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ β－ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒrsquo ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２０１５８９７－１６

［７］ 　 ＹａｏＺＪｉｎｇ ＨＷａｎｇ Ｄｅｔ ａｌ Ｖａｌｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｏｌｆａｃｔｏｒｙｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅＡｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｔｏ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｂｕｌｂ［Ｊ］ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ２０１６１４４５３－５９

［８］ 　 武强李露斯范文辉等ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因 ＡＤ 传代小鼠的基因

型鉴定及其行为学分析［Ｊ］卒中与神经疾病２００９（５）２９３－２９６［９］ 　 毛敬洁李钻芳林如辉等ＡＰＰ ＰＳｌ 双转基因阿尔海默病小鼠

的繁殖及基因型鉴定［Ｊ］实用中西医结合临床２０１５（１０）４－６［１０］ 　 宋敏唐军李达兵等 ＰＳ１ ＡＰＰ 双转基因阿尔茨海默病模

型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析［ Ｊ］ 第三军医大

学学报２００６（１４）１４５３－１４５６

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０８－３１作者简介闫清伟（１９８２－）男河南新乡人博士讲师主

要研究方向为体育学习与身心健康

４１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

（ｄ）颜色熵检索结果

图 ２　 花草检索结果

（ａ）灰度共生矩阵的检索结果

（ｂ）Ｇａｂｏｒ 小波检索的结果

图 ３　 纹理图像检索结果

经过多次实验选用不同的图像和不同的方法比

较分析可知在颜色特征方面颜色直方图描述了各

个颜色出现的频率适用于颜色信息种类较多的图

像累积直方图与颜色直方图检索结果大致相似但是计算精度有所提高因此可用于检索图像质量不好

的图像能有效提高检索结果的精确度颜色矩利用

其前三阶矩来表达颜色的分布信息区分能力较弱所以适用于图像间差异大的图像库颜色熵可用于检

索形状相同颜色却不一样的相关物体 在纹理特征

方面灰度共生矩阵的纹理特征适用于描述大而疏的

图像对于细密的图像检索效果较差Ｇａｂｏｒ 小波变换

方法比灰度共生矩阵检索效果好不仅可以获得较好

的频域信息同时还能反映图像像素的空间信息并且对图像的尺寸变化不敏感适合进行多尺度分析

３　 结语

根据视频处理与分析的过程并结合教学需求

设计多个实验本文选取运动目标跟踪和图像检索

作为示例进行说明 首先介绍了视频处理与分析的

重要性以及实验设计的必要性然后是对实验课程

设计的介绍包括实验目的实验环境实验方法和

结果分析 实验的设计不仅使课堂教学与实践教学

相统一便于学生理解抽象的图像特征而且提高学

生的动手和创新实践能力激发学生兴趣

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）

［１］ 　 陈汗青数字图像处理技术研究进展［ Ｊ］ 工业控制计算机２０１３２６（１）７２－７４

［２］ 　 田晨旭蔡绪福杨昌跃等ldquo实验教学＋rdquo的设计策略与实现

方法［Ｊ］ 实验科学与技术２０１７１５（１）１３１－１３３［３］ 　 秦小文基于视频序列的运动目标检测与跟踪算法的研究

［Ｄ］太原中北大学２０１２［４］ 　 高韬刘正光张军等基于特征点的多运动目标跟踪［ Ｊ］ 电

子与信息学报２０１０３２（５）１１１１－１１１５［５］ 　 谢红原博解武等ＬＫ 光流法和三帧差分法的运动目标检测

算法［Ｊ］ 应用科技２０１６４３（３）２３－２７［６］ 　 李国杨国庆张心珂等一种基于尺度不变特征点的运动目

标检测算法［Ｊ］ 信息与控制２００８３７（３）２８０－２８３［７］ 　 王莲基于内容的图像检索研究进展［ Ｊ］ 现代情报２００５２５

（５）２５－２８［８］ 　 张鑫基于颜色特征的图像检索方法研究［ Ｊ］ 计算机科学

２０１２３９（１１）２４３－２４５［９］ 　 李友峰基于颜色和纹理特征的图像检索相关算法的研究

［Ｄ］成都电子科技大学２００９［１０］ 　 王晓东纹理图像分类系统及其关键技术研究［Ｄ］南京南

京邮电大学２０１３［１１］ 　 贾婧王忠芝基于共生矩阵的图像检索系统的研究［ Ｊ］ 微计

算机信息２０１０２６（２９）２０２－２０３

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０９－２７作者简介刘永康（１９９１－）男山东寿光人研究生主要研

究方向数字图像处理模式识别

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ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ａｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ ２０１３ ３４（５） １４４０－１４５０

［４］ 　 Ｌｉｕ Ｈ Ｚｈａｏ Ｇ Ｚｈａｎｇ Ｈ ｅｔ ａｌ Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｔｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅ－ｌｉｋｅ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅ［ Ｊ］ ＢｅｈａｖｉｏｕｒａｌＢｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１３２５６２６１－２７２

［５］ 　 ＬｉｕＨＺｈａｏ ＧＣａｉ Ｋｅｔ ａｌＴｒｅａｄｍｉｌｌ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｌｏｎｇ － ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ［ Ｊ］ Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１１２１８（２）３０８－３１４

［６］ 　 ＺｈａｎｇＹＹｉｎ ＦＬｉｕ Ｊｅｔ ａｌＧｅｎｉｐｏｓｉｄｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ β－ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒrsquo ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［ Ｊ］ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２０１５８９７－１６

［７］ 　 ＹａｏＺＪｉｎｇ ＨＷａｎｇ Ｄｅｔ ａｌ Ｖａｌｐｒｏｉｃ ａｃｉｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｏｌｆａｃｔｏｒｙｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＡＰＰ ＰＳ１ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅＡｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｔｏ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｂｕｌｂ［Ｊ］ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ２０１６１４４５３－５９

［８］ 　 武强李露斯范文辉等ＡＰＰ ＰＳ１ 双转基因 ＡＤ 传代小鼠的基因

型鉴定及其行为学分析［Ｊ］卒中与神经疾病２００９（５）２９３－２９６［９］ 　 毛敬洁李钻芳林如辉等ＡＰＰ ＰＳｌ 双转基因阿尔海默病小鼠

的繁殖及基因型鉴定［Ｊ］实用中西医结合临床２０１５（１０）４－６［１０］ 　 宋敏唐军李达兵等 ＰＳ１ ＡＰＰ 双转基因阿尔茨海默病模

型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析［ Ｊ］ 第三军医大

学学报２００６（１４）１４５３－１４５６

收稿日期２０１７－０８－０２修改日期２０１７－０８－３１作者简介闫清伟（１９８２－）男河南新乡人博士讲师主

要研究方向为体育学习与身心健康

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