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QFB. María del Rosario Vázquez Larios
1er Encuentro de Innovación en el Laboratorio Clínico.
27 de Noviembre 2015
“Fortaleciendo las competencias
del Laboratorio Clínico”
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CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA
Métodos basados en criterios morfológicos
Métodos basados en tinción diferencial
Métodos basados en pruebas bioquímicas
Métodos basados en pruebas serológicas
Métodos basados en detección molecular
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OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Examen del material fresco:
– Examen directo de las muestras.
– Directas/modificaciones
- Solución salina/agua estéril. - Hidróxido de potasio 10%. - Azul de metileno Loeffler - Lugol
Examen material fijado y coloreado:
- Tinción de Gram
- Tinción Ziehl Neelsen
- Naranja de acridina.
- Auramina Rodamina
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IDENTIFICACION COCOS GRAMPOSITIVOS
BACTERIA CATALASA OXIDASA BACITRACINA 0.04 U
Staphylococcus + -- R
Micrococcus + + S
Enterococcus -- -- R
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ESTAFILOCOCOS
BACTERIA Coagulasa Agar sal y manitol Agar DNasa
S. aureus + + +
Estafilococos coagulasa negativo
-- --/+ --
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ESTAFILOCOCOS
BACTERIA Coagulasa Novobiocina Hemólisis
S. aureus + S BETA
S. epidermidis -- S NO?
S. saprophyticus -- R BETA
PRUEBAS BIOQUIMICAS: Azúcares, Urea VP.
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GÉNERO STREPTOCOCCUS
Streptococcus.
Streptococcus pneumoniae.
Estreptococos ß-hemolíticos.
Estreptococos del grupo viridans.
Enterococcus.
Leuconostoc.
Pediococcus
Resistentes a vancomicina.
Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002: 613-630.
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CARACTERÍSTICAS
Cocos grampositivos.
Disposición en pareja o en cadenas.
Anaerobios facultativos.
Algunos poseen cápsula.
Catalasa negativa.
Bacterias Fastidiosas Requieren de CO2
24 a 48 horas para su crecimiento óptimo.
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CLASIFICACIÓN
Serología o sistema Rebeca Lancelfield (1930).
Polisacáridos de pared celular:
Grupos A, B, C, D, F y G.
Acidos lipoteicoicos:
Grupo D y Enterococos.
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-hemólisis
-hemólisis
-hemólisis
PATRONES DE HEMÓLISIS
Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.
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CLASIFICACIÓN
Grupo serológico Hemólisis
S. pyogenes A
S. anginosus A, C, F, G
S. agalactiae B
S. dysgalactiea C, G
S. bovis/Enterococo D
E. grupo viridans No agrupables
S. pneumoniae No agrupable
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IDENTIFICACIÓN
LAP = Leucina aminopeptidasa PYR = Pyrrolidonylarylamidasa
Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.
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IDENTIFICACIÓN
Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.
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Streptococcus pneumoniae
Crecimiento en agar sangre
Hemólisis alfa o gamma
(+)
Optoquina
Pneumococo Solubilidad bilis
> 14 mm (< 14 mm)
(+)
Pneumococo Aglutinación
Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.
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ESTREPTOCOCOS ß HEMOLITICOS
Crecimiento en agar sangre
Hemólisis ß
(+)
Bacitracina/serología
S. pyogenes Estreptococo grupo B o C
CAMP
S. equi S. agalactiae
(+) (--)
(+) (--)
Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10th Edition. Mosby. St Louis 1998.
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PRUEBA DE CAMP
Staphylococcus aureus ATCC 33862
S. agalactiae Control +
Incubación s/CO2
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CLASIFICACIÓN DE ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO VIRIDANS
Grupo Especies
S. anginosus S. anginosus, S. constellatus,
S. bovis S. intermedius, S. alactolyticus, S. equinus.
S. mitis S. mitis, S. pneuminae, S. sanguis, S. parasanguis, S. gordonii, S. crista. S. oralis
S. mutans S. mutans, S. sobrinus, S. cricetus, S. ratus S. downei, S. macacae
S. salivarius S. salivarius, S. vestibularis, S. thermophilis
Sin agrupar S. acidominimus, S. sutis
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Crecimiento en agar sangre
Hemólisis alfa o gamma
(+)
Optoquina
Pneumococo Bilis esculina
Enterococos Estreptococos
grupo viridans
(+) (--)
(+) (-)
6.5% NaCl
PRUEBAS BIOQUIMICAS: Hidrólisis de esculina, hidrólisis de pirrolidonil-ß naftilamina (PYR), VP,
fermentación de carbohidratos (rafinosa, manitol, lactosa).
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Hemólisis alfa o gamma
Optoquina
Pneumococo Bilis esculina
Enterococos Estreptococos
grupo viridans
(+) (--)
(+) (-)
6.5% NaCl
ENTEROCOCOS
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ENTEROCOCOS
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Medios de aislamiento primario:
Agar de MacConkey.
Agar EMB.
Medios selectivos.
Agar Salmonella Shigella.
Agar entérico.
Agar xilosa-lisina-desoxicolato.
ENTEROBACTERIAS
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Características diferenciales:
Utilización de carbohidratos
Reacciones IMViC
Indol, RM, VP Citrato.
ENTEROBACTERIAS
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Características diferenciales:
Producción de ureasa.
Descarboxilación de lisina, orinitina
y arginina.
Producción de ácido sulfhídrico
Movilidad.
ENTEROBACTERIAS
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NO ENTEROBACTERIAS
Son incapaces de utilizar los carbohidratos como fuente de energía o que los degradan por la vía oxidativa.
Características diferenciales:
Oxidasa – positiva (generalmente).
Agar MacConkey (lactosa negativa)
Prueba OF
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Acinetobacter Pseudomonas
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NO ENTEROBACTERIAS
Características diferenciales:
Actividad citocromo oxidasa.
Crecimiento en agar MacConkey y SS.
Presencia de pigmento.
Reducción de NO3, NO2.
Producción de indol.
Producción de ureasa.
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NO ENTEROBACTERIAS
Características diferenciales:
Sensibilidad a penicilina, colistina y polimixina.
Hidrólisis de la esculina.
Desarrollo a 42ºC.
Licuación de la gelatina.
Hemólisis
Utilización de citrato.
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Hay más en ti, hay más
de lo que crees, puedes
hacer más de lo que
piensas, vales más de lo
que supones, a condición de
que pongas en ello tu pasión
y tu esfuerzo. “Plus est en
toi”, es una frase que
debieran ustedes recordar
cuando flaqueen. No voy a
rendirme, hay más ánimo
en mí, yo soy capaz de
hacer todavía más.
Dr. Ignacio Chávez