ANTİGLOBULİN TESTLER - kmtd.org.tr · Coombs Testi denir Tanımlar. Ulusal Kan Merkezleri ve...

ANTİGLOBULİN TESTLER

Dr . Güçhan ALANOĞLU

Ulusal Kan Merkezleri ve Transfüzyon Tıbbı Kursu 2

İİnsan nsan globulinlerineglobulinlerine karkarşışı oluoluşşan antikorlara an antikorlara AAntinti--HHumanuman GGlobulinlerlobulinler

((AHG, AHG, antikorlara karantikorlara karşışı geligelişşen antien anti--antikor) antikor)

BBu antikorlaru antikorlarıın kullann kullanııldldığıığı testleretestlere::AAntinti--HHumanuman GGlobulinlobulin (AHG) (AHG) TTestiesti veya veya CoombsCoombs TTestiesti denirdenir

Tanımlar


Direkt Antiglobulin Testi (DAT)

Eritrosit yüzeyinde yer alan antijenlerin,

kendilerine özgül antikorlarla vücutta kaplanışını

göstermek (sensitizasyonunu) için yapılan teste

DAT veya Direkt Coombs Testi denir


Indirekt Antiglobulin Testi (IAT)

Eritrosit sensitizasyonunun vücut dışında gerçekleştirilmesi ile serum/plazmada eritrosit antijenlerine karşı gelişen serbest antikorlarınvarlığını göstermek için yapılan testlere

IAT veya Indirekt Coombs Testi denir


Direkt ve İndirektAntiglobulin Testi


Hastanınörneği

Agglutinasyon

Direkt Coomb’s Testi,Direkt Antiglobulin Testi


DAT (+)

1. Hastalarda %10

2. Kan donörlerinde 1/1000-1/10000


DAT (+) Nedenleri-I

1. Eritrosit antijenlerine karşı oluşmuşotoantikorların komplemanla birlikte veya tek başına eritrosit yüzeyini kaplaması

2. Transfüzyon sonrası alıcı alloantikorlarınındonör eritrosit yüzeyini kaplaması

3. Donör plazmasındaki antikorların alıcıeritrositlerinin yüzeyini kaplaması


DAT (+) Nedenleri-II

1. Annedeki alloantikorların fetus eritrositlerini

kaplaması,

2. Çeşitli ilaçlar ( Penisilin, sefalosporin, quinidine,

phenacetin vb )

3. Yüksek doz gamaglobulin tedavisi

4. Hipergamaglobulinemi


Hastanınörneği

Agglutinasyon

1. basamak

2. basamak

İndirekt Coomb’s Testi


Alloantikor-Otoantikor-I

1. Alloantikor : Bireyin kendi eritrositlerinin yüzeyinde taşımadığı antijenlere karşıgeliştirdiği antikor

2. Otoantikor : Bireyin kendi eritrositlerinin yüzeyinde taşıdığı antijenlere karşı geliştirdiği antikor


Alloantikor-Otoantikor-II

Otokontrol Test Hücresi Antikor

Pozitif Negatif Otoantikor

Negatif Pozitif Alloantikor

Pozitif Pozitif OtoantikorOtoantikor+Alloantikor


Alloantikor Oluşturan Durumlar

1. Transfüzyon

2. Hamilelik

3. Transplantasyon

4. Tanımlanamayan nedenler


Önemli Antikor

1. 37oC’de reaktifdir

2. Verilen eritrositin ömrünün kısalmasına

3. Yenidoğanın hemolitik hastalığına

4. Hemolitik transfüzyon reaksiyonuna neden

olan


TARAMA-TANIMLAMA

1.1. Antikor Tarama Testi:Antikor Tarama Testi: bireyde eritrosit antijenlerine karbireyde eritrosit antijenlerine karşışı

antikor olup olmadantikor olup olmadığıığınnıı tespit etmek itespit etmek iççindirindir

2.2. Antikor TanAntikor Tanıımlama Testi:mlama Testi: var olan ya da muhtemel olan var olan ya da muhtemel olan

antikorun hangi kan grup sistemi ile iliantikorun hangi kan grup sistemi ile ilişşkili oldukili olduğğunu ve unu ve

hangi eritrosit antijenine karhangi eritrosit antijenine karşışı geligelişştitiğğini tespit etmek ini tespit etmek

iiççindirindir


ANTİKOR TARAMA-TANIMLAMA TESTLERİ-I

1. Fenotipik yapısı bilinen (tercihan homozigot) iki veya üç farklı

donörden alınmış test hücreleri tarama, daha fazla sayıda test

hücreleri ise tanımlama testlerinde kullanılmalıdır

2. Bir antikor homozigot hücrelerle heterozigot hücrelere göre

daha kuvvetli aglütinasyon oluşturuyorsa dozaj gösterdiğinden

söz edilir


1. Otokontrol (allo-oto antikor ayrımı) kullanılmalıdır

2. Serumda, az rastlanılan eritrosit antijenlerine karşı bir

antikor varsa tarama testleri negatif olabilir. Bu tür

antikorların varlığı uygun olmayan cross-match testi ile

gösterilebilir

ANTİKOR TARAMA-TANIMLAMA TESTLERİ-II


1. İnkübasyon süresi ve sıcaklık

2. pH

3. İyonik konsantrasyon (İyonik güç)

4. Antikorun afinite sabiti

5. Antijen ve antikor oranı

İndirekt antiglobulin testi; IAT; ETKİLEYEN FAKTÖRLER


İnkübasyon Süresi ve Sıcaklık

1. Aglütinasyonun ilk aşamasını veya sensitizasyon fazınıetkileyebilir

2. Klinik olarak önemli antikorlar, genellikle 30-37°C arasında reaksiyona girer

3. Çoğu antikorlar, tuz ve albüminli test ortamları kullanıldığıtakdirde 37°C’de ortalama 30 dakikalık bir inkübasyonzamanı gerektirir

4. Zayıf reaktif antikorlarda sürenin uzatılması gerekebilir


pH

6.8-7.2, fizyolojik pH uygundur


İyonik Güç1. Serum fizyolojikli ortamda Na+ (negatif yük etrafında) ve Cl- (pozitif

yük etrafında) iyonları antijen ve antikorun çevresinde kümelenirler

2. Zıt yüklü moleküller arasındaki çekme gücü azalınca antikorun antijenle bir araya gelmesi engellenir

3. Düşük iyon gücüne sahip solüsyonlar (LISS) kullanıldığında ortamdaki iyon sayısı azalır; pozitif ve negatif yükler ortaya çıkar

4. LISS, inkübasyon süresini kısaltır (37°C’de 10–15 dakika)


Antikorun Afinite Sabiti

1. Afinite sabiti, eritrositin herhangi bir antikora spesifik olarak

sahip olduğu karakteristiklerden biridir

2. Genelde denge sabiti ne kadar yüksekse antijen-antikor

reaksiyonunun sensitizasyon fazında antikorların birleşmesi o

kadar yüksektir


Antijen-Antikor Oranı

1. Reaksiyon hızı, ortamdaki antikor miktarı ve eritrosit antijenlerinin sayısına bağlıdır

2. Antikor miktarını artırmak, test duyarlılığını artırabilir

3. Nadiren, önemli antikor fazlası “prozon fenomeninin”oluşmasına neden olur

4. Eritrosit serolojisinde sıklıkla kullanılan oran, 1 damla %2–5’ lik eritrosit süspansiyonuna 2 damla serum şeklindedir. Hemolitik transfüzyon reaksiyonlarında serum miktarı 10–20 kat artırılabilir


Antihuman Globulin Reagenler

1. Polispesifik AHG2. Monospesifik AHG

n Anti-IgGn Anti-C3d ve Anti-C3bn Anti-C3d


Polispesifik AHG Reagenleri

1. Poliklonal; Tavşan poliklonal anti-IgG ve anti-C3d içerir (Diğer antiglobulin antikorları ve antikomplemanlarıiçerebilir)

2. Monoklonal karışım; Bir tavşan poliklonal anti human IgGve fare monoklonal anti-C3b,C3d içerir

3. Monoklonal; Fare monoklonal anti-IgG,-C3b ve –C3d içerir


Monospesifik Anti-IgG AHG Reagenleri

n Poliklonal IgG; Tavşan poliklonal IgG, anti komplemanaktivitesi olmadan IgG ağır zincirleri sadece insan gamaglobulinlerine karşı reaktif olan anti IgG içerir

nn MonoklonalMonoklonal IgGIgG; Fare ; Fare monoklonalmonoklonal antianti--IgGIgG iiççerirerir


Monospesifik Anti-C3d ve C3b AHG Reagenleri

1.1. PoliklonalPoliklonal antianti--C3d ve C3b (tavC3d ve C3b (tavşşan)an)

2.2. PoliklonalPoliklonal antianti--C3d, C4b, C4b (tavC3d, C4b, C4b (tavşşan)an)

3.3. Sadece iSadece işşaretlenmiaretlenmişş komplemankompleman kompenentlerinekompenentlerine karkarşışıreaktif olan ve anti reaktif olan ve anti immimmüünglobulinnglobulin aktivitesi olmayan aktivitesi olmayan antikorlarantikorlarıı iiççerirerir


Monospesifik Anti-C3d AHG Reagenleri

1.1. MonoklonalMonoklonal (fare)(fare)

2.2. MonoklonalMonoklonal antianti--C3d, C3b (fare)C3d, C3b (fare)

3.3. Sadece iSadece işşaretlenmiaretlenmişş komplemankompleman kompenentlerinekompenentlerinekarkarşışı reaktif olan ve anti reaktif olan ve anti immimmüünglobulinnglobulin aktivitesi aktivitesi olmayan antikorlarolmayan antikorlarıı iiççerirerir


Direkt Coomb’s

Hastanıneritrositleri

Hastanıneritrositleri

Agglutinasyon

Agglutinasyon


İndirekt Coomb’s testi

Hastanınserumu

Eritrosit


Değerlendirme 1

Çapraz karşılaştırma Oda ısısı

IAT 37°C-inkübasyon

Reaktiviteyi

artırma (+)

ALLOANTİKOR TANIMLAMA


Değerlendirme 2

Otolog kontrol

(-) (+) DAT

Alloantikor tarama Alloantikor tarama

Alloantikor

(+) (-)

Oto antikor

Otoantikor

(+)

Otoantikor + Alloantikor


Değerlendirme 3

1. Miks aglutinasyon varlığı

2. Rulo formasyonu / gerçek aglutinasyon


Reaktiviteyi Artırma

AMAÇ: 1) Aglütinasyonu arttırma

2) İnkübasyon süresini kısaltma

KULLANILANLAR: LISS

PEG

Albumin

Polybrene


Hatalı Negatif DAT ve IAT-11. Eritrositlerin yeterli yıkanmaması

2. AHG serumun geç eklenmesi

3. Personelin değerlendirme becerisi

4. Düzensiz santrifüjleme

5. Eritrosit konsantrasyonunun hatalıolması

6. Yüksek konsantrasyonda IgGparaproteini

7. Yıkama solüsyonunun düşük pH düzeyi


*Hatalı negatif DAT

1. Sadece komplemanla kaplanmışhücrelerde değerlendirmenin geçyapılması

2. Düşük antikor düzeyi

*Hatalı negatif IAT

1. Uygun koşullarda saklanmayan panel hücreleri

2. Serum yerine plazma kullanmak

Hatalı Negatif DAT ve IAT-2


Hatalı Pozitif DAT ve IAT1. Soğuk reaktif otoantikorlar

2. Kirli cam eşyalar

3. Kontamine solüsyonlar

4. Aşırı santrifüjleme

5. Örnek almada silikon jelli tüp kullanımı

6. Dextroz verilen damar yolundan örnek

alma


Test Teknikleri1. Tüp Metodu

2. Solid Faz Eritrosit Adherans yöntemi

3. Kolon Aglütinasyon Teknolojisi - Jel Metodu

4. Immunflouresan

5. Radioimmunassay

6. ELISA

7. Monoklonal antikor spesifik eritrosit antijen immunobilizasyonu (MAIEA)

Ulusal Kan Merkezleri ve Transfüzyon Tıbbı Kursu 39Gölcük Isparta


Kan Ver Hayat Ver

http://i93.photobucket.com/albums/l43/shijiang/EditedBloodbankDawn.jpg

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.mybloodyourblood.org/images/hs_images/giving_blood%25201.jpg&imgrefurl=http://www.mybloodyourblood.org/hs_saving_donate.htm&h=726&w=975&sz=75&hl=tr&start=52&um=1&tbnid=G-c-oNTQmrBqJM:&tbnh=111&tbnw=149&prev=/images%3Fq%3Dblood%2Bdonors%26start%3D40%26ndsp%3D20%26um%3D1%26hl%3Dtr%26rlz%3D1T4ADBF_enTR255TR270%26sa%3DN

http://www.hema-quebec.qc.ca/images/contenu/centredepresse/donneur_malaria_hr.jpg

ANTİGLOBULİN TESTLER - kmtd.org.tr · Coombs Testi denir Tanımlar. Ulusal Kan Merkezleri ve...

Documents

Transcript of ANTİGLOBULİN TESTLER - kmtd.org.tr · Coombs Testi denir Tanımlar. Ulusal Kan Merkezleri ve...